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无菌采取内蒙古通辽市某羊场病死羊肠道内容物、肝脏和肺脏,进行细菌的分离培养。将从十二指肠内分离到的1株疑似致病菌株进行生化试验、小鼠致病性试验,再将其通过魏氏梭菌多重PCR试验、魏氏梭菌ELISA试验及16S rRNA PCR试验进行鉴定。将PCR产物进行测序并进行了16S rRNA基因的进化树分析。结果显示,经细菌生化试验、多重PCR试验、ELISA试验和16S rRNA试验均证实此分离株为A型产气荚膜梭菌;进化树分析显示该菌与序列号为HQ808749.1(美国)的A型产气荚膜梭菌遗传距离最近。结果表明,该羊病例所分离的致病菌为A型产气荚膜梭菌。 相似文献
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多重PCR检测圈养牛、猪和羊源魏氏梭菌 总被引：4，自引：0，他引：4
采用多重PCR对圈养源魏氏梭菌的α，β，ε，ι毒素基因进行了检测，结果证实该方法具有很高的特异性。通过对山东德州、枣庄、泰安、蒙阴曾经流行过魏氏梭菌病的猪场、牛场和羊场的162个粪便样品进行检测，检出率为19．1％，均为A型。应用该方法鉴别魏氏梭菌血清型快速、简便，结果对于预防治疗均具有重要的指导作用。 相似文献
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根据GenBank中已发布的产气荚膜梭菌α、β、ε、τ毒素基因序列,分别设计并合成针对4种毒素基因的特异引物,通过优化多重PCR反应条件,建立1种简单的产气荚膜梭菌定型菌落多重PCR方法。结果显示：A、B、C、D、E5型产气荚膜梭菌参考菌株均扩增出了相应的预期目的条带,而大肠杆菌、巴氏杆菌和芽孢杆菌则均未能扩增出相应条带;将单个菌落稀释100倍,仍能扩增出相应的目的片段,该方法对B型和E型参考菌株最低检测量分别为2．6×10^4cfu／mL、1．2×10^4cfu／mL。应用该多重PCR方法从106份样品中检测到30株产气荚膜梭菌且均为A型,其中病死鸡的盲肠内容物分离率为36．5％（19／52）,健康鸡群新鲜粪便样品分离率为20．4％（11／54）。本研究建立的多重PCR方法特异性强,敏感度高,重复性好,可以有效进行产气荚膜梭菌的快速检测及5种血清型的鉴别,对产气荚膜梭菌的感染及食品安全问题的研究均具有重要意义。 相似文献
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对2例突然死亡的山羊病料进行细菌分离培养，再应用多重PCR方法对可疑菌进行鉴定和基因分型，结合流行病学、临床症状、病理变化，诊断为A型产气英膜梭菌引起的山羊猝死症，通过毒素中和试验加以验证，两者结果相一致，说明多重PCR方法可以用于动物猝死症的快速诊断。 相似文献
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根据猪链球菌16SrDNA基因的种特异性基因序列和CPS基因的2型（1或／和2型）型特异基因序列设计了4条引物，建立了快速检测猪链球菌2型（1或／和2型）的多重PCR方法。利用保存的猪链球菌2型菌株和其他相关标准菌株作为参考菌株对该方法进行了敏感性和特异性试验。结果显示，所建立的多重PCR方法特异、敏感，对组织中的猪链球菌2型（1或／和2型）的最低检出水平为30CFU／mL。用所建立的多重PCR方法对采自江西、北京、珠海、天津、四川等省市的猪扁桃体样品进行了检测，并通过细菌分离和玻片凝集试验对其检测结果进行了验证，结果显示，检出阳性符合率为100％，证实建立的多重PCR方法可用于猪链球菌2型的快速检测。 相似文献
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O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
本研究建立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法,确立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法检测O型口蹄疫血清阴阳性判定标准：抗体效价大于或等于1：32时判为O型口蹄疫抗体阳性;1：16～1：32时判为O型口蹄疫抗体可疑。检测131份阴性血清、口蹄疫亚洲1型阳性血清和A型阳性血清,固相竞争ELISA方法和液相阻断ELISA方法的特异性分别是95．5％,84．7％。固相竞争ELISA方法检测口蹄疫亚洲1型、口蹄疫A型阳性血清时,无交叉反应,O型口蹄疫病毒感染牛、免疫牛和感染猪血清的阳性检出率均为100％,免疫猪检出率为86．7％。 相似文献
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多重聚合酶链反应检测环境中产气荚膜杆菌 总被引：12，自引：0，他引：12
产气荚膜杆菌根据产生4种主要毒素（α－β、ε、τ－毒素）可分为5种类型A－E型。在该研究中依据产气荚膜杆菌的5种毒素基因的序列，设计了5对PCR引物，建立了多重PCR方法，该方法可以快速区分5种类型的产气荚膜杆菌。并对68份环境样品（生活污水、生物肥料）进行检测和基因分型，共检出55株产气荚膜杆菌，其中A型产气荚膜杆菌50株，占总数的90％以上，B型、C型、D型只占5％，未检出E型产气荚膜杆菌，所有的分离株没有发现带有肠毒素。结果表明，目前环境中主要存在的菌型为A型菌，其他菌型的产气荚膜杆菌很少，而多数是非致病性产气荚膜杆菌。 相似文献