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动物抗菌肽天蚕素(cecropin)因具有抗菌谱广、活性较强、不易产生耐药性等特点而成为新型抗菌剂开发的材料。为了探讨通过原核表达的途径高效获取天然cecropin,以重叠PCR方法分别人工合成家蚕(Bombyx mori)和果蝇(Drosophilamelanogaster)的抗菌肽cecropin B基因(CecB2)并克隆至T载体,测序确认后分别克隆至pET-32a载体,转化至E.coli BL21(DE3)宿主菌进行表达。通过SDS-PAGE和Western blotting检测到2种目的蛋白均得到表达,但表达量存在差异,Bradford法测定纯化后的BmCecB2融合蛋白和DmCecB2融合蛋白的质量浓度分别为0.6、2.0 mg/mL。经Ni-NTA亲和层析纯化和透析处理后的2种产物的抗菌活性存在明显差异:DmCecB2和BmCecB2的质量浓度为10 mg/mL时,对E.coli DH5α的抑菌圈直径分别为15、8 mm左右,最小抑菌浓度分别为0.05、0.10 mg/mL。以上结果说明DmCecbB2的原核表达效率及表达产物的抑菌活性均明显高于BmCecB2。用生物信息学方法分析家蚕和果蝇的CecB2蛋白在结构上存在差异,这可能是导致2种产物活性不同的主要原因。 相似文献
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抗菌肽cecropin P1的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
cecropin P1是一种哺乳动物抗菌肽,对G-菌及一些G 菌有抑制杀灭作用.本文就cecropin P1的结构、抗菌机理、抗菌活性、基因工程及其应用前景做一综述. 相似文献
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cecropins是最早在天蚕中发现的抗菌肽,故被称为天蚕素(cecropin),由31~39个氨基酸残基组成,分子量约为4ku,具有广谱抗菌作用。目前已报道的cecropins有30多种,其中cecropin-P1是Lee等首先从猪小肠中分离得到的(Lee et al.,1989)。cecropin-P1含有31个氨基酸残基,分子量为3339u,不含半胱氨酸(Cys),不能形成分子内二硫键,有强碱性的N端和强疏水性的C端,C端酰胺化,酰胺化的C端对其广谱抗菌作用极为重要。 相似文献
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抗菌肽(天蚕素)是生物体产生的一种具有强抗菌作用的阳离子多肽,是生物先天免疫的重要组成部分。抗菌肽不仅具有广谱的抗菌活性,还具有高效的抗真菌、病毒和原虫的活性,其抗菌机理独特,不易产生耐药性,能提高机体的免疫力。天蚕素抗菌肽分子具有独特的抗菌性能及其一定的营养作用,体外试验已证明它能有效的抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等有害菌。因此,它成为抗生素替代物的绝佳选择之一。 相似文献
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抗菌肽与抗生素的体外抗菌效果比较 总被引:17,自引:0,他引:17
应用由 Hancock实验室改进的微量肉汤稀释法测定了 cecropin P1、cecropin A、magainin 2、defensin 1、bactenecin、lactoferricin和 indolicidin等 7种抗菌肽和盐酸金霉素、去甲万古霉素、土霉素、强力霉素等 4种抗生素的体外抗菌活性 ,并且使用薄层琼脂糖孔穴扩散法比较了抗菌肽中 cecropin P1和 cecropin A与土霉素和呋喃唑酮对大肠杆菌 K88的抑菌效果。结果发现 ,抗菌肽与抗生素一样对几种革兰氏阳性菌和阴性菌都有不同程度的抗菌效果。其中 cecropin A、cecropin P1和 defensin1对大肠杆菌的 2个菌株 ATCC2 5 92 2和 K88的抗菌活性高于抗生素 ,defensin1是各种抗菌肽中对金黄色葡萄球菌抗菌效果最好的。抗生素对试验用金黄色葡萄球菌的抑制活性总体上要好于抗菌肽。与抗生素相比 ,cecropin A、cecropin P1和 indolicidin对猪霍乱沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌具有更好的抗菌效果。另外 ,抗菌肽的抑菌圈边缘十分清晰 ,而抗生素的整个抑菌圈都比较模糊且界线不明。因此 ,从抗菌效果方面考虑 ,抗菌肽可以代替抗生素用于疾病的预防和治疗 相似文献
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抗菌肽(antibacterial peptides,ABP)是生物体内产生的一类具有强抗菌作用的小分子多肽,是生物体天然免疫防御系统的重要组成部分。20世纪80年代首次从惜比古天蚕中发现该物质,经过专家研究小组的进一步研究,测定其一级结构,并给这类肽命名为Cecropins,我国学者称其为天蚕素。随着天蚕素抗菌肽的发现,世界许多实验室相继分别从家蚕血淋巴、柞蚕蛹、家蝇等动物体内分离到相似的具有抗菌活性的多肽。经过各国专家的潜心研究发现,这类抗菌肽物质具有强碱性、热 相似文献
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根据已发表的天蚕素B的cDNA序列化学合成4务引物,以重叠延伸PCR的方法合成了真核细胞偏爱密码子编码的抗菌肽天蚕素B基因,将其克隆于pMD18-T栽体,DNA序列分析证实合成的抗菌肽基因的碱基序列与设计的序列完全一致.利用山羊-β酪蛋白基因5'侧翼调控序列和真核基因表达栽体plRES1-neo,构建抗菌肽天蚕素B的乳腺组织特异性表达载体pbCP-cpin,将该载体溶于生理盐水,注入处于泌乳期的成年母山羊乳腺组织进行暂时表达.通过对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌试验确定了抗菌肽天蚕素B基因在山羊乳腺中的表达和抗菌活性.本试验建立了抗菌肽天蚕素B的乳腺瞬时表达系统,为验证各调控元件以及抗菌肽基因在转基因动物乳汁中分泌表达的有效性和可行性提供了一个快速检测系统. 相似文献
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抗菌肽是一种具有广谱抗菌活性的多肽,它也是动物防御系统产生的一类对抗外源性病原体致病作用的防御性肽类物质.一般由20~60个氨基酸残基组成,分子量在2 000~7 000 Da左右.抗菌肽合成的速度非常快,肽键合成速度比IgM快100多倍[12],致使机体在受到损伤或者病原微生物入侵时能迅速产生抗菌肽杀伤入侵者.所以抗菌肽又被称为是机体理想的第一道防线.自从20世纪70年代首先由瑞典的科学家Boman H G在用大肠杆菌诱导惜古比天蚕分离到第一个真正意义上的抗菌肽-天蚕素(cecropin)以来,此后人们相继又在两栖类、昆虫、水产动物及包括人在内的哺乳动物甚至植物及细菌等广泛的生物谱中发现了1 700余种抗菌肽[3].多数抗菌肽具有优良的广谱抗菌性能,对于革兰阳性菌和阴性菌都表现出良好的抑菌和抗菌效果;抗菌机理不同于抗生素,对真核细胞几乎没有作用,仅作用于原核细胞,同时不易使病原菌产生耐药性;并且对于一些真菌、病毒、原虫和肿瘤细胞都有一定的杀伤作用,相对于抗生素具有效价高、无残留等特点,因此一直受到各国学者的广泛关注.随着基因工程技术的迅速发展,抗菌肽在体外克隆和转载表达等研究也得到很好的发展,各种转抗菌肽基因动植物及其产品相继问世,为抗菌肽的大规模生产利用提供一条广阔的道路.因此如何更好的开发利用好抗菌肽这一资源,使之为人类健康服务,已受到越来越多的重视. 相似文献
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1980年,瑞典科学家Boman等用阴沟肠杆菌及大肠杆菌诱导惜古比天蚕蛹产生出具有抗菌活性的多肽类物质,定名为天蚕素(cecropins),这是世界上发现的第1种抗菌肽(antibacterial peptide)。随后,人们从微生物、植物、动物中都分离得到抗菌肽,还通过生物工程和基因工程人工合成大量的抗菌肽。抗菌肽具有广谱抗菌作用 相似文献