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1.
用纯化的猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(PRRSV)免疫Balb/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,使脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA 筛选,4次有限稀释法克隆,得到1株能稳定分泌抗猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3D6),经鉴定,该单抗为IgG2a亚类,杂交瘤细胞的平均染色体数目为99条,杂交瘤细胞培养上清及小鼠腹水单克隆抗体的ELISA效价分别为1∶512和1∶20480。这株单克隆抗体与伪狂犬病毒、猪丹毒、猪细小病毒均不发生交叉反应,显示出良好的特异性。连续培养20代后能稳定分泌抗体,此单克隆抗体的获得为PRRSV的研究及快速诊断方法的建立奠定了基础。 相似文献
2.
用纯化的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)免疫Balb／c小鼠，应用淋巴细胞杂交瘤技术．取脾细胞与NSn骨髓瘤细胞融合，经间接ELISA筛选，3次有限稀释法克隆，得到1株能稳定分泌抗猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株：6Pg。经鉴定，该单抗为IgG1亚类，杂交瘤细胞的平均染色体数目为99条，杂交瘤细胞培养上清及小鼠腹水单克隆抗体的ELISA效价分别为1：256和1：20480。经Western-blot鉴定为针对N蛋白的单抗。6Pn株单克隆抗体与伪狂犬病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒均不发生交叉反应，显示出良好的特异性。连续培养20代后能稳定分泌抗体。此单克隆抗体的获得为PRRSV的研究及快速诊断方法的建立奠定了基础。 相似文献
3.
本试验应用细胞杂交瘤技术,取健康BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0 骨髓瘤细胞进行细胞融合,经双抗体夹心ELISA筛选,4次有限稀释法克隆,得到2株能稳定分泌抗伪狂犬病病毒(PRV)的单克隆抗体杂交瘤细胞株:2C6E6、3D5F1。2株杂交瘤细胞培养上清的效价分别为1:512、1:1 024。鉴定结果显示这2株单克隆抗体分别为IgG1亚类和IgG2a亚类,杂交瘤细胞的平均染色体数目为84条。用纯化的PRV免疫经产健康的BALB/c小鼠,采用ELISA方法检测获得的腹水的效价分别为1:1 638 400和1:819 200。经检测这2株单克隆抗体与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒均不发生交叉反应,特异性良好。杂交瘤细胞连续培养30代,仍能稳定分泌抗PRV的单克隆抗体,说明这2株单克隆抗体的稳定性良好。本试验研究结果为PRV的快速诊断方法的建立奠定了理论基础。 相似文献
4.
以猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）作为免疫原,免疫BALB／c小鼠,经间接ELISA、IPMA和IFA试验进行杂交瘤筛选,共获得2株能分泌针对PRRSV单克隆抗体（简称单抗）的杂交瘤细胞株,分别命名为3D10和4H11,3D10亚类为IgG1,4H11亚类为IgG2b,单抗腹水的间接ELISA效价均达到1．0×10^7,染色体数目介于90～110之间。2株单抗与猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型均无交叉反应,IPMA和IFA结果显示单抗均能与接种于猴肾细胞（Marc145）的PRRSV发生特异性反应,证实抗PRRSV单抗具有良好的特异性和敏感性,为PRRSV抗原表位分析及相关抗原抗体诊断试剂盒的研制奠定了基础。 相似文献
5.
猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株膜基质蛋白单克隆抗体的研制 总被引：1，自引：1，他引：0
为制备抗猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株单克隆抗体,用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株免疫BALB/c小鼠,最后一次免疫后第3天取其脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,通过酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接免疫荧光试验（IFA）筛选,以有限稀释法克隆3次,制备单克隆抗体,并对制备的单克隆抗体进行鉴定。结果表明获得了2株分泌PRRSV膜基质蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞,命名为1D12、5H5,经鉴定其抗体亚型分别为IgG2b、IgM,2株均为κ链,腹水ELISA效价分别为1∶107和1∶105。该单克隆抗体与PRV、PPV、PCV、CSFV、JEV无交叉反应。作者成功制备了抗猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株膜基质蛋白单克隆抗体,为进一步建立相关诊断方法奠定了基础。 相似文献
6.
为获得针对猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30-like毒株GP5蛋白的单克隆抗体,采用表达纯化的PRRSV NADC30-like毒株的GP5蛋白按常规方法免疫小鼠,采用间接免疫荧光方法筛选出1株阳性杂交瘤细胞（命名为3E10）,经3次亚克隆后制备腹水并进行纯化鉴定。结果显示：该杂交瘤细胞连续传代20代后细胞上清液的IFA效价仍不低于1:40。纯化后的单克隆抗体腹水浓度为0.204 mg/mL,亚类鉴定为IgM,且未发现有中和活性。特异性检测显示3E10单克隆抗体能与2株PRRSV NADC30-like毒株发生荧光反应,而与4株高致病性PRRSV疫苗毒株、2株经典株PRRSV疫苗毒株以及CSFV、PCV2、BVDV及Marc-145细胞均无荧光反应,显示出较好的应用前景。 相似文献
7.
将水泡性口炎病毒（VSV）经差速离心和蔗糖密度梯度离心法进行纯化后,以纯化的VSV作为免疫原免疫8～10周龄雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA方法筛选能稳定分泌抗VSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对制备出的抗VSV单抗的特异性、抗体亚类等生物学特性进行鉴定。结果显示,试验成功筛选出2株能稳定分泌抗VSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1A2、4C3。ELISA鉴定结果表明,2株单抗均能特异性地与VSV结合,而与口蹄疫病毒（FMDV）、猪水泡病病毒（SVDV）均不发生交叉反应;诱生小鼠腹水产生的抗体效价可达1∶25 600～1∶51 200。杂交瘤细胞染色体核型鉴定结果显示,杂交瘤细胞染色体数为95～105,均高于2个亲本细胞的染色体数目,说明这2株细胞是两者的杂交产物。抗体亚类鉴定结果显示,所获得2株单抗1A2、4C3均为IgG1。Western blot分析结果表明,1A2可识别VSV G蛋白。2株抗VSV单克隆抗体的成功制备将为VSV快速检测方法的建立以及检测试剂的研制等奠定基础。 相似文献
8.
《畜牧与兽医》2021,(10)
为了制备非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)p11.5蛋白的特异性单克隆抗体,利用大肠杆菌表达系统,将密码子优化后的ASFV p11.5基因序列连接表达载体pET28a-SUMO,构建pET28a-SUMO-p11.5原核表达质粒,获得了可溶性的ASFV p11.5蛋白。经Western blot鉴定,重组ASFV p11.5蛋白可被ASFV标准阳性血清特异性识别,表明其具有良好的反应原性。将纯化后的p11.5蛋白免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞法,制备了4株可稳定分泌抗ASFV p11.5蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。3株单克隆抗体重链亚类为IgG1,1株重链亚类为IgG2a,轻链亚类均为κ。采用p11.5蛋白为包被抗原的间接ELISA方法检测单克隆抗体的效价均不低于1∶102.4×10~4。经间接免疫荧光试验(IFA)鉴定,4株单克隆抗体,均不与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒发生交叉反应,但均能与ASFV反应,表明单克隆抗体具有良好的特异性和反应性。本试验为p11.5蛋白结构功能、免疫学特性及ASFV诊断试剂产品的研究提供了重要的生物材料。 相似文献
9.
《中国预防兽医学报》2019,(3)
为了制备具有阻断能力的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的单克隆抗体(MAb),本研究以PRRSV SD53株感染Marc-145细胞后的上清作为免疫原免疫BALB/c雌鼠,筛选获得一株稳定分泌抗PRRSV MAb的杂交瘤细胞株(1H4)。鉴定结果显示,1H4 MAb是Ig G1亚类,轻链为κ链。1H4细胞上清经间接免疫荧光(IFA)检测其效价是1∶40,腹水的IFA效价是1∶3 200。阻断ELISA试验显示1H4 MAb与病毒的结合能够被PRRSV阳性血清阻断。Western blot试验显示1H4 MAb可以特异性识别PRRSV的N蛋白,经截短表达N蛋白鉴定该MAb的抗原识别序列为N蛋白末端aa 107～aa 123。该抗原表位在美洲型PRRSV中高度保守,该MAb的制备为进一步建立特异性强、灵敏度高的PRRSV阻断ELISA检测方法奠定了基础。 相似文献
10.
《中国动物传染病学报》2017,(6)
为了制备特异的抗猪附红细胞体单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb),将纯化的猪附红细胞体抗原浓缩后免疫6周龄BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞技术制备MAb。制备的MAb分别通过抗体亚类试剂盒、Western blot进行单抗亚类和特异性检测。结果显示,共获得了2株能稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株,命名为3F7和2C4。2株MAb的亚型均为IgG2a,其腹水效价分别可达1:16 000和1:14 000。特异性检测表明,2株MAb均能特异性地与猪附红细胞体结合,而与弓形虫、猪链球菌、猪肺炎支原体和猪繁殖与呼吸综合症病毒均无反应。2株MAb的获得有望为猪附红细胞体病的诊断和防治提供新的材料。 相似文献