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1.
用直接结晶法从重组载体注射鸡蛋清中提取重组人溶菌酶（rhLYZ），并对其理化及生物学特性进行了鉴定。结果显示，rhLYZ能被hLYZ特异抗体识别；纯化的rhLYZ和天然hLYZ的热稳定性无显著差异，二者在pH3．0～11．0范围内均具有活性，pH为7．0时活性最强。采用最小抑菌浓度法测定了含rhLYZ蛋清和纯化rhLYZ对12种常见细菌的溶菌活性，二者对除有鞭毛伤寒杆菌和鳖嗜水气单胞菌以外的参试茵均有不同程度的抑制作用。表明，表达在重组栽体注射鸡蛋清中的rhLYZ具有与天然hLYZ十分相似的分子质量、热稳定性、pH活性范围和溶菌谱。 相似文献
2.
将鸡卵清蛋白基因5′-调控区控制的人溶菌酶（hLYZ）cDNA表达盒插入禽AAV末端反向重复序列之间,将CMV启动子控制的rep表达盒插入其下游,获得的表达载体pRep2ITR-OV4-LYZ用聚乙烯亚胺包裹,经翅静脉注射产蛋鸡,待蛋清中rhLYZ表达水平下降至注射前水平时,用pRep2ITR-OV4-LYZ进行3次重复注射,以RBB-R染料标记比色法和Western-blotting检测蛋清中rhLYZ表达,以细菌生长抑制试验检测rhLYZ活性。结果,在相同试验条件下,pRep2ITR-OV4-LYZ表达rhLYZ的水平和时间优于不含禽AAV序列的pOV4-LYZ,rhLYZ表达水平和时间随载体注射次数增加呈上升和延长趋势,rhLYZ的分子质量与天然hLYZ相同,对致乳牛乳腺炎大肠杆菌、葡萄球菌和链球菌具有显著的抑制作用。试验结果提示,禽AAV ITR和rep序列能促进hLYZ基因在鸡输卵管细胞中正确表达。 相似文献
3.
为在鸡蛋清中表达人溶菌酶(hLYZ),将含有hLYZ输卵管特异表达盒的重组禽腺联病毒以每只鸡2×10~(11)经翅静脉注射正常产蛋母鸡,收集蛋清对重组蛋白的表达情况进行检测。RT-PCR结果显示,hLYZ只在输卵管部位表达,Western blot结果显示重组蛋白大小正确,抑菌活性表明注射重组病毒后的蛋清的抑菌活性明显优于正常蛋清的。动态表达水平检测结果显示,注射病毒后第1周即可以检测到重组hLYZ的表达,第5周时表达量最高,达68.3μg/mL,表达时间持续3个月之久。以上结果表明,重组禽腺联病毒能介导人溶菌酶在蛋清中的高效、长时表达,为人溶菌酶的开发应用提供了新途径。 相似文献
4.
致病性嗜水气单胞菌气溶素基因的克隆与高效表达 总被引：4，自引：0，他引：4
根据 Gen Bank中致病性嗜水气单胞菌气溶素 (Aer)基因的序列设计引物 ,以国内嗜水气单胞菌分离株为模板 ,扩增出 Aer基因的全长序列。经 T载体克隆和序列测定 ,证实克隆了国内分离株的不含信号肽的 Aer全长基因。将该基因以正确的读码框架与表达载体 p ET2 8b连接 ,经 IPTG诱导、SDS- PAGE检测 ,外源基因获得高效表达。诱导 4 h的培养物中 ,融合蛋白的表达占菌体总蛋白含量的 4 8.5 7%。 Western-印迹结果显示 ,利用纯化包涵体制备的兔抗血清可以很好地识别嗜水气单胞菌产生的天然毒素 ,而且天然毒素制备的抗体也能识别纯化的重组毒素 相似文献
5.
在前期研究基础上,将经转座获得的杆状病毒重组穿梭质粒rBacmid-Rep、rBacmid-VP和rBacmid-LYZ共转染Sf9昆虫细胞,产生了表达人溶菌酶(hLYZ)的重组禽腺联病毒(rAAAV)(rAAAV-hLYZ);然后用纯化好的rAAAV-hLYZ溶液,在固体培养基上对常见病原菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、蜡状芽胞杆菌、白色念珠菌进行体外抑菌活性试验,研究重组禽腺联病毒介导的溶菌酶对临床病原菌的抑制作用。结果表明,溶菌酶基因能在重组禽腺联病毒中高效表达,这为进一步探索溶菌酶作为新型兽用生物药物奠定了基础。 相似文献
6.
《饲料研究》2017,(10)
Scygonadin抗菌肽是一类阴离子抗菌肽,从锯缘青蟹体内分离得到,对溶壁微球菌和嗜水气单胞菌具有较好的抑制作用。研究从锯缘青蟹c DNA文库中找出Scygonadin抗菌肽的成熟核苷酸序列和对应的氨基酸序列,并根据毕赤酵母的偏好密码子进行密码子优化,优化后的密码子经人工合成后连接到毕赤酵母表达载体p PCIZαA上,构建锯缘青蟹Scygonadin抗菌肽的真核表达载体,然后经电击转化至毕赤酵母X-33中。表达产物经镍柱纯化后进行SDS-PAGE电泳。结果表明,锯缘青蟹Scygonadin抗菌肽在毕赤酵母X-33中获得表达,且测序结果显示与最初设计的氨基酸序列一致;体外抑菌试验表明:纯化的重组多肽具有抑制溶壁微球菌及嗜水气单胞菌的作用,而且还可抑制金黄色葡萄球菌等多种革兰阳性菌,但其对革兰阴性菌的抑制作用相对较弱。 相似文献
7.
为了研究嗜水气单胞菌重组弹性蛋白酶的酶学性质,试验根据GenBank中的嗜水气单胞菌弹性蛋白酶基因ahyB设计1对含酶切位点的特异引物,以嗜水气单胞菌J-1(AhJ-1)株为模板,经PCR扩增得到不含信号肽的成熟弹性蛋白酶基因片段(787 bp),并与pMD18-T载体连接、测序,再用DNAStar软件分析。结果表明:该基因片段与豚鼠气单胞菌胞外蛋白酶同源性高达95%,与嗜水气单胞菌AG2株弹性蛋白酶ahyB基因同源性为92%,与铜绿假单胞菌LasB基因同源性为82%;将PCR产物连入表达载体pET-32a,转化至大肠杆菌BL21菌株中进行诱导表达,出现50 ku的融合表达蛋白,该表达产物纯化复性后表现出酶的活性。 相似文献
8.
从人胎盘组织中克隆获得人溶菌酶基因hLYZ,选用体内表达载体pcDNA3.1,构建表达载体pcDNA3.1hLYZ,并转染至小鼠体内,采集小鼠乳汁和乳腺组织,通过RT-PCR方法检测基因的表达水平,用免疫组化反应、Western blotting检测蛋白的表达,并通过体外抗菌活性检测重组人溶菌酶的抗菌活性。经酶切鉴定和核苷酸序列测定,表明重组质粒pcDNA3.1-hLYZ构建正确,小鼠乳清的SDS-PAGE电泳显示在约14700处有特异的蛋白条带出现,Western blotting检测表明成功表达了人溶菌酶,根据回归方程计算酶活性为4011U/mL,体外抗菌活性检测结果显示重组人溶菌酶对大肠杆菌有明显裂解作用。本试验成功地在小鼠乳腺中表达了重组人溶菌酶,表达的蛋白具有较高的酶活性,这些结果为哺乳动物乳腺生物反应器的研究奠定了基础。 相似文献
9.
将人溶菌酶（human lysozyme，hLYZ）cDNA插入由pcDNA3改造而成的pcDNAK表达载体。用获得的重组载体pcDNAKLYZ转染COS-1细胞，经免疫荧光试验证明能进行正确表达。将重组载体注射于哺乳母鼠，取其乳汁进行溶菌酶活性测定，结果显示，分泌在乳汁中的重组hLYZ高达139mg／L。根据乳汁体细胞检测结果，选择健康奶牛和乳腺炎阳性奶牛，分别在干奶时和产犊前2周2次注射重组质粒pcDNAKLYZ，注射途径为乳腺基部穿刺，注射剂量为300μg／乳区,于产犊后1个月采集奶样进行体细胞检测，结果显示，对前一泌乳期发生的奶牛乳腺炎的治愈率为91．5％，对下一泌乳期奶牛孔腺炎的预防有效率王少为96．97％。由此认为。构建的表达hLYZ基因的重组表达质粒，可以替代抗菌素类油乳剂用于干乳期乳腺炎的防治。 相似文献
10.
化学修饰对嗜水气单胞菌弹性蛋白酶活性及稳定性的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
用10 ku的截流膜超滤、30%~60%的硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤层析和阴离子交换层析,获得纯化的嗜水气单胞菌胞外弹性蛋白酶。SDS-PAGE显示,该酶是分子量约为33 ku的单体蛋白。用活化的右旋糖酐及单甲氧聚乙二醇(MPEG)分别对纯化的嗜水气单胞菌弹性蛋白酶进行化学修饰。修饰后的酶与原酶相比,修饰酶保留了天然酶的活性,两种修饰酶活性均能保留在60%以上,用MPEG修饰酶的保留活性更高(85.5%),而且两种修饰酶在耐热性、耐酸性等方面都优于天然酶,但修饰后酶的最适pH没变。修饰酶较天然酶稳定,具有较高的实用意义。 相似文献
11.
本试验从猪种布鲁氏菌S2疫苗株免疫雄性小尾寒羊构建的白细胞层SSH cDNA文库中筛选1段cDNA序列,经测序和BLAST同源性搜索比对发现其为溶菌酶重组片段,该片段大小为770 bp,编码148个氨基酸残基,编码的蛋白质是一种天然抗感染物质,已提交GenBank,登录号为JX263305。经荧光定量PCR分析,与正常组羊相比,在S2免疫14和30 d的羊白细胞层中该溶菌酶基因表达轻微上调,但差异不显著(P>0.05);在免疫40 d时恢复到正常水平。这也进一步说明溶菌酶是一种存在机体内必不可少的天然免疫因子,为布鲁氏菌病有效防控方面的研究奠定了基础。 相似文献
12.
Immune responses in chickens against Salmonella typhimurium monitored with egg antibodies 总被引：1，自引：0，他引：1
Three mature hens were immunized with an Aro- mutant of Salmonella typhimurium beginning with a subcutaneous dose in adjuvant followed by two oral boosters. Isotype-specific antibodies were measured in the white and yolk eggs collected weekly over a period of 230 days. Two hens showed a memory response to the first oral booster, with large increases in egg yolk IgG and smaller increases in IgA and IgM antibodies in egg whites. Smaller amounts of IgA and IgM antibodies were found in egg yolks, and a slight increase in IgG occurred in the whites. One hen showed an increase in serum titers of all isotypes against S. typhimurium. The second hen had high serum titers before immunization was started which did not change. The third hen had a high level of IgM in the white of eggs before immunization was started. This hen showed erratic responses in egg white antibodies following immunization, no increase in IgA or IgM in yolks and only a slight increase in IgG, no increase in serum IgG, and was the only hen with a high level of IgM antibody against S. typhimurium in the bile, conditions reflecting a state of oral tolerance. With the exception of this hen, the results showed that IgA and IgM antibodies were aroused in hens by immunization with an avirulent mutant of S. typhimurium, and that these antibodies were present in the white of eggs from immunized hens. 相似文献
13.
V Wiedemann R Kühlmann P Schmidt W Erhardt U L?sch 《Zentralblatt für Veterin?rmedizin. Reihe B. Journal of veterinary medicine. Series B》1990,37(3):163-172
Large quantities of specific egg antibodies can be produced with little effort by immunization of laying hens. Several antibody containing egg preparations were subjected to a tenacity test against digestive activity taking piglets with artificial jejunum fistulas as a model. Even with high doses of orally administered yolk lyophilisate no antibody activity could be found in the distal jejunum. The additional feeding of egg white, however, showed a significant protective effect on the yolks antibodies during the digestive act. No difference between egg white of immunized hens and egg white of unimmunized hens could be detected. Buffering the acidic gastric environment with sodium bicarbonate increased the antibody activity in the intestine by an average of 40%. Eggs administered in hot (70 degrees C) beef stock had higher antibody titers than eggs that were boiled for 4 minutes. Tenacity in antibodies fed in pellets was significantly lower than in powdered feed. 相似文献
14.
本试验旨在探讨饲粮中添加白酒糟酵母培养物对产蛋鸡生产性能、免疫机能及肠黏膜结构的影响。选取324只27周龄、产蛋率和体重相近的健康海兰褐蛋鸡,随机分成3个组,每组6个重复,每个重复18只鸡。3组产蛋鸡分别饲喂添加0(对照)、1%和2%白酒糟酵母培养物的玉米-豆粕型饲粮,试验分为预试期1周和正试期8周。结果表明:1)各时间段内各组间产蛋率差异不显著(P0.05),但1%白酒糟酵母培养物组产蛋率在1~4周、5~8周和1~8周比对照组分别提高了1.79%、2.07%和1.93%;1%白酒糟酵母培养物组5~8周和1~8周的平均日采食量有高于对照组的趋势(P0.10)。2)在第4周末,2%白酒糟酵母培养物组血清球蛋白含量较对照组和1%白酒糟酵母培养物组分别提高了19.0%(P0.10)和27.2%(P0.05),1%和2%白酒糟酵母培养物组血清磷含量均显著高于对照组(P0.05)。3)在第4周末,与对照组和1%白酒糟酵母培养物组相比,2%白酒糟酵母培养物组血清免疫球蛋白G和免疫球蛋白M含量均显著提高(P0.05);在第8周末,与对照组相比,2%白酒糟酵母培养物组血清免疫球蛋白A和免疫球蛋白M含量显著提高(P0.05),1%白酒糟酵母培养物组血清溶菌酶活性显著提高(P0.05)。4)与对照组和2%白酒糟酵母培养物组相比,饲粮中添加1%白酒糟酵母培养物显著提高了产蛋鸡空肠绒毛高度和隐窝深度(P0.05),有提高绒毛高度/隐窝深度的趋势(P0.10)。综上可知,产蛋鸡饲粮中添加适量(1%~2%)白酒糟酵母培养物可增强免疫机能,改善肠黏膜结构。 相似文献
15.
不同品种、不同周龄鸡蛋营养成分比较研究 总被引：4，自引：0，他引：4
本试验选用北京油鸡、白来航、海兰褐3个品种,每个品种随机挑选17或19周龄(北京油鸡)、42周龄、70周龄母鸡收集鸡蛋进行蛋黄营养成分的测定。结果表明:不同品种3个产蛋时期的蛋黄比例、蛋白比例、蛋黄维生素E含量都有极显著差异(P<0.01)。其中白来航、海兰褐在不同产蛋时期的蛋黄、蛋白比例呈现相同的变化趋势,即蛋黄比例为70周龄蛋最高,蛋白比例为初产蛋最高。3个品种不同产蛋时期维生素E含量变化亦势趋相同,初产蛋最高。3个品种42周龄蛋中的必需氨基酸比例显著高于其他2个时间点(P<0.01)。商业品种与中国地方鸡种所产蛋在蛋黄、蛋白比例、维生素B2变化趋势迥异,无统一规律可循。 相似文献
16.
Sellier N Vidal ML Baron F Michel J Gautron J Protais M Beaumont C Gautier M Nys Y 《British poultry science》2007,48(5):559-566
1. The repeatability and heritability of growth inhibition by egg albumen of two major pathogenic bacteria, a Gram-negative (Salmonella Enteritidis) and a Gram-positive (Staphyloccocus aureus) and of two antimicrobial albumen proteins, lysozyme and ovotransferrin, were estimated in commercial pedigree hens. 2. Repeatability was evaluated in 100 egg-type hens at the beginning, middle and end of the laying cycle on eggs collected for 3 weeks. Heritabilities were estimated at 36 to 40 weeks of age on 400 pedigree hens (2 eggs/hen), which were the offspring of 25 sires each mated with 4 dams. Ovotransferrin and lysozyme were quantified by ELISA. Salmonella Enteritidis (S.E.) and Staphyloccocus aureus (S.A.) were inoculated into a sample of sterilised albumen and enumerated after incubation. 3. Total protein content in albumen decreased with age of laying hens, whereas there were increases in lysozyme or ovotransferrin concentrations and in the bacteriostatic effect of albumen. 4. Repeatability for bacterial growth in albumen ranged from 0.29 to 0.39 for the number of S.E. (log cfu/ml) one day post inoculation (p.i.) but was lower and more variable at 5 d p.i. or for S.A. number. It ranged from 0.27 to 0.38 for S.E. and S.A. number at the mid period of the laying cycle. Repeatabilities were low and variable for total egg albumen protein or lysozyme and ovotranferrin concentrations (0 to 0.22). 5. Negative phenotypic correlations were observed between lysozyme concentrations and S.E. number but that between lysozyme and S.A. number was not significant. 6. Heritabilities were low (0.01 to 0.09) for protein traits. They were 0.11 for S.A. number and 0.16 for S.E. number one day p.i. 7. It appears to be more efficient to select on global bacterial growth than on specific antimicrobial proteins. The most promising trait is the number of S.E. one day p.i. 相似文献
17.
为了研究虫草粉（古尼虫草地顶孢霉培养物）联合酵母硒对蛋鸡产蛋性能、蛋品质、抗氧化功能和免疫功能的影响,试验选用450羽24周龄海兰褐壳蛋鸡,随机分为5组,每组6个重复,每个重复15羽。对照组饲喂基础饲粮,试验Ⅰ~Ⅳ组饲喂添加0.1 mg/kg酵母硒联合不同剂量虫草粉（0、0.2%、0.3%和0.4%）的基础饲粮,试验期27周;选取产蛋高峰中期（第40周龄）蛋鸡进行产蛋性能、鸡蛋品质、免疫功能和抗氧化功能分析。结果显示,与对照组相比,产蛋高峰中期试验Ⅲ组蛋鸡的产蛋率、平均蛋重均显著提高,料蛋比显著降低（P<0.05）;鸡蛋哈夫单位、蛋壳颜色、蛋壳强度、蛋黄颜色、蛋清粗蛋白质含量、蛋黄粗蛋白质和粗脂肪含量均显著升高（P<0.05）,蛋清中必需氨基酸Leu、Lys、Met、Trp、Phe、Thr、Val和His及非必需氨基酸Ala、Asp、Glu、Pro和Tyr水平也显著增加（P<0.05）;试验Ⅳ组蛋鸡的蛋壳颜色、蛋壳强度、哈夫单位和蛋清粗蛋白质含量均显著提高（P<0.05）,蛋清中必需氨基酸Ile、Gly、Arg和非必需氨基酸Cys、Ser水平均显著增加（P<0.05）;试验Ⅰ~Ⅳ组蛋鸡蛋黄、蛋清中硒含量均显著增加（P<0.05）。同时,与对照组相比,产蛋高峰中期试验Ⅲ组蛋鸡血清MDA含量显著下降（P<0.05）,WBC数量、血清IFN-γ和IL-2水平及T-AOC和T-SOD活性均显著升高（P<0.05）。结果表明,饲粮中联合添加酵母硒和适量的虫草粉能明显提高产蛋高峰中期蛋鸡的产蛋性能和鸡蛋品质,增强机体免疫力和抗氧化能力,以0.1 mg/kg酵母硒联合添加0.3%虫草粉的效果最佳。 相似文献
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肠炎沙门氏菌污染饲料对鸡蛋安全的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
本研究选用160只60周龄白来航蛋鸡,随机分为4组,分别一次性采食30g添加了0、4.7×102、4.7×105、4.7×108cfu肠炎沙门氏菌(SE)的饲料,然后用特异性PCR法对试验鸡所产鸡蛋的不同部位进行SE检测,并观察记录生产性能。结果显示,对照组鸡蛋各部位均为阴性,试验组的蛋壳、壳膜、蛋黄、蛋白均能检测到SE,且随染菌量的增大,检出率增高。当摄入108cfu的SE时,会降低产蛋率,但对鸡蛋的表观性状没有显著影响,成为危害人类健康的潜在隐患。 相似文献