嗜水气单胞菌gyrA氟喹诺酮抗性决定区的克隆与分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

郑伟  卢强 《中国兽医科技》2003,33(3):8-15

研究了从病鱼体内分离的嗜水气单胞菌对氟喹诺酮类药物耐药性的分子机理。以4株对诺氟沙星等氟喹诺酮类药物耐药菌株及2株敏感菌株为模板，参照杀鲑气单胞菌gyrA基因序列，设计了1对引物，进行gyrA基因氟喹诺酮抗性决定区PCR扩增，将扩增产物克隆入pMD18-T载体，转化入大肠埃希氏菌DH5α中，小提质粒，酶切鉴定，测序并分析比较耐药菌和敏感菌的氨基酸残基序列。发现耐药菌有5个氨基酸突变位点，分别是83位点的Ser→Ile,92位点的Leu→Met,174位点的Ile→Phe,202位点的Asn→Asp,203位点的Leu→Arg，耐药菌突变后的氨基酸残基均比敏感菌正常的相对应氨基酸残基分子量大。83位点的突变与大肠埃希氏菌的耐药性突变一致。122位点具有保守的Try。  相似文献   

2个旋毛虫新生幼虫期特异性相似cDNA的克隆及序列分析     

刘明远  吴秀萍  付宝权  卢强  姚春雨  李莲瑞  P.Boireau 《中国兽医学报》2004,24(6):561-564

利用旋毛虫新生幼虫期特异性 c DNA探针 ,从新生幼虫 c DNA文库中筛选出 2个相似的旋毛虫新生幼虫期特异性 c DNA克隆 ,分别命名为 N5和 N10 ,N5长度为 12 5 0 bp,N10长度为 12 33bp。 NCBI Blast检索表明 ,2个c DNA全长序列均为旋毛虫新基因序列。DNASIS分析表明 ,N5与 N10的开放阅读框架分别为 10 14、10 17bp,编码338、339个氨基酸 ,推导的成熟蛋白氨基酸序列均为 32 1个氨基酸残基 ,相对分子质量推导值分别为 35 30 0和 354 0 0。 2个氨基酸序列中 N端均包含有一信号肽序列 ,可能为分泌性蛋白。NCBI Blast及 Inter Proscan检索表明 ,以上2个氨基酸序列均含有 型核酸酶的功能结构域 ,均编码 型核酸酶 (DNase ) ,且与已报道的旋毛虫包囊形成相关蛋白 P4 3(经鉴定也为 DNase )同源性最高。目前已有的试验结果证实 ,P4 3并未直接参与包囊的形成 ,而是一种与P4 3蛋白同源性非常高的蛋白参与了旋毛虫包囊的形成。由于 N5与 N10为旋毛虫新生幼虫期特异性表达基因 ,也就是在旋毛虫包囊形成的时期表达 ,而且与 P4 3具有较高的同源性 ,并均编码 DNase 蛋白 ,因此 N5、N10具有参与旋毛虫包囊形成的潜在可能  相似文献   

柴油机微粒排放控制技术的研究进展     

卢强  孙平  顾勤  董彪 《拖拉机与农用运输车》2005,(6):43-46

分别从机内净化、排气后处理、改善燃油品质三个方面分析了近年来降低柴油机微粒排放的研究现状。  相似文献   

抗菌肽天蚕素B突变体ABP-S1基因在E.coli中的融合表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

卢强  刘维全  赵凤芹  刘明远  江禹  殷震 《中国兽医学报》2002,22(3):241-243

利用绿色荧光蛋白 (GFP)基因与天蚕素 B突变体 ABP- S1基因的融合基因 ,构建了 2个原核表达载体 p Am GS1和 p Bm GS1,转化表达宿主菌 E.coli BL 2 1(DE3)和 E.coli BL 2 1(DE3) p L ys S。结果 ,p Am GS1未能得到转化子 ,而p Bm GS1的转化子高效表达了融合蛋白 ,经 IPTG诱导 ,SDS- PAGE检查 ,融合表达产物最高可占菌体总蛋白的49.45 %。表达产物经包涵体复性 ,柱层析初步纯化 ,通过平板抑菌试验 ,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌以及鱼类重要的致病菌嗜水气单胞菌等多种革兰氏阳性、阴性菌表现出较强的抗菌活性  相似文献   

旋毛虫肌幼虫cDNA文库的免疫筛选及初步分析     

付宝权  原丽红  张亚兰  吴秀萍  李莲瑞  卢强  刘明远  陈启军  P.Boireau 《吉林农业大学学报》2004,26(3):323-325,333

用旋毛虫感染猪血清对旋毛虫肌幼虫cDNA文库进行了免疫筛选,从1 6×105个重组噬菌体中筛选出21个阳性克隆。阳性克隆的测序结果表明:有9个克隆为未曾报道过的新基因;有9个克隆不含有开放阅读框架(ORF),与旋毛虫线粒体DNA同源,编码核糖体大亚基RNA;3个克隆为旋毛虫已知基因,其中克隆ML12,34与Serineproteaseinhibitor[Trichinellaspiralis](AAF63473)同源性为99%,克隆ML42与HypotheticalOFR17 20[Trichinellaspiralis](AAB48489)同源性为99%,与21kDExcretory secretoryprotein[Trichinellapseudospiralis](AAF79206)同源性为90%,这为进一步研究基因重组抗原奠定了基础。  相似文献   

HRP直接标记属特异性基因探针检测沙门氏菌的研究   总被引：2，自引：2，他引：0  

卢强  林万明 《中国兽医学报》1994,14(1):48-53

以活化辣根过氧化物酶复合物（ＨＲＰ—ＰＢＱ—ＰＥＩ＋—ＮＨ３＋）直接标记沙门氏菌属特异性ＤＮＡ探针ｐＬＳ２和ｐＬＳ３，探针与靶ＤＮＡ杂交后催化发光底物，经增强型化学发光反应（ＥＣＬ），用普通Ｘ光胶片自显影（ＣＰＤ）检测沙门氏菌。经狭缝杂交（Ｓｌｏｔｂｌｏｔ），该法标记探针均可检测到０．１ｐｇ的纯质粒ＤＮＡ及１０３个未经培养的鼠伤寒沙门氏菌。Ｄｏｔ—ｂｌｏｔ杂交结果证明，ＨＲＰ标记的探针仅与沙门氏菌属细菌杂交，而与试验的其他肠道非沙门氏菌不杂交。本研究表明，ＨＲＰ直接标记基因探针化学发光自显影法检测沙门氏菌，安全、快速、简便，且有高度的敏感性和特异性，是一种有较大应用前景的非放射性标记探针杂交检测方法。  相似文献   

对加快辽阳市土地流转的思考     

郑健  郭明顺  卢强 《现代农业科技》2012,(10):391-392

对辽阳市农村土地政策落实、规模、形式等流转情况进行阐述和分析,围绕辽阳市现代农业发展目标,提出建立和完善土地流转市场、制订有利于土地流转的政策、发展经济等建议,以为辽阳市加快利用土地流转给予指导。  相似文献   

鲤鱼白细胞介素-8全长cDNA的克隆、鉴定及其差异表达分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

谭业平  孙晓义  卢强  李莲瑞  邓洪宽  付宝权 《中国兽医学报》2008,28(6)

用DD-RTPCR的方法获得差异显示片段A26,经地高辛标记作为探针对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库核酸杂交筛选,从0.8×104个重组噬菌体中,经过2轮筛选获得阳性克隆。序列分析表明该克隆含有1个大小为294bp编码98个氨基酸的完整开放阅读框,氨基酸序列含有Chemokine-CXC功能结构域,前体中含有22个氨基酸组成的引导肽,氨基酸序列比对显示成熟白细胞介素-8(IL-8)多肽中第12、13和14构成CXC基序,但之前无ELR基序。系统发生分析其与荷兰鲤鱼亲缘关系最近,氨基酸序列的同源性达89%。分离培养鲤鱼外周血白细胞,在不同条件下经LPS、PHA和ConA刺激后,提取总RNA,根据鲤鱼IL-8全长cDNA序列和β-ac-tin序列设计引物,利用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法对鲤鱼外周血白细胞IL-8进行差异表达分析,结果显示,经有丝分裂原刺激后前期(4h)白细胞中IL-8的表达量明显增大,但随着时间推移(12、24h)并不一直比同期正常白细胞表达量大,表达量趋势成峰形图。  相似文献   

农村环境中内分泌干扰物的现状、危害及处理     

吴二社张松林  刘焕萍刘在平 卢强 《中国农学通报》2011,27(14):282-285

农村环境中大量使用的化肥、农药、防腐剂、添加剂、洗涤剂、激素类药物等,很多属于内分泌干扰物,并且还是持久性污染物,其显著及潜在的危害很大。目前的研究还只是集中于浓度较高时,单种内分泌干扰物对环境和生态所造成的危害方面。而在农村环境中的这些内分泌干扰物（或称类激素物质）浓度却往往比较低、成分复杂、存在范围广,当前还研究较少。由于其中有些物质存在协同效应,在低剂量时既能够表现出毒理学效应,因此其危害不容忽视。笔者就其来源、存在状态、危害和处理措施等方面进行了较为深入地研究和总结,旨在引起对该领域研究和管理的重视。  相似文献   

4LZ—2.0型联合收获机割台模态分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

陈树人  韩红阳  卢强 《农业机械学报》2012,43(Z1):90-94

为建立准确的联合收获机割台有限元模型,获取完备的结构动态特性,进行碧浪4LZ-2.0型联合收获机割台的试验模态分析,利用ModalVIEW软件识别各阶模态参数,同时利用UG软件进行割台有限元模态分析,得到了各阶计算模态,计算了试验模态的MAC值,并通过所测模态数据对比验证了所建立割台有限元模型的正确性.  相似文献