双梯度超薄胶PAGE分离DNA及其银染与回收   总被引：1，自引：0，他引：1  

朱新产  王宝维  张涌 《西北农业学报》2002,11(1):20-23

双浓度梯度超薄胶PAGE分离DDRT－PCR扩增产物表明，在30cm长的凝胶板上能清晰分辨长度仅差1bp的DNA，清楚地显示100多条分离谱带，并可直接从银染PAGE胶中回收DNA谱带。简便节省，是基因表达分析的有效方法。  相似文献   

甘薯AFLP扩增产物的PAGE胶快速银染方法     

靳容  后猛  马代夫  谢世清  李强 《江苏农业科学》2013,41(2)

对目前6种常用的PAGE银染方法的成本、时间及染色效果等进行比较.结合笔者所在实验室的具体情况,用简易强碱法对甘薯AFLP扩增产物进行银染,分析银染过程中漂洗时间、次数,银染用水对银染效果的影响,建立了甘薯AFLP扩增产物的PAGE胶快速银染方法,可以批量生产银染AFLP扩增产物,银染效果较好.  相似文献   

mRNA差异显示中特异条带回收方法的改进     

秦岭  张春雷  张斌 《山东农业科学》2007,(6):106-107

聚丙烯酰胺凝胶电泳的银染显色具有灵敏度高、显色速度快、无放射性等优点,在mRNA差异显示中应用广泛。由于银染过程中要经过酸、碱的处理,从中回收DNA条带有一定困难。本研究对回收方法进行了改进,回收后的条带经PCR重扩增得到了清晰的特异条带。  相似文献   

甘蓝型油菜微卫星标记PAGE及银染的高效检测   总被引：1，自引：0，他引：1  

赵亚军  王灏  王晓东  赵卫国  王爱娜  罗斌  李保军 《陕西农业科学》2011,57(5):44-47

一方面对甘蓝型油菜微卫星标记（SSR）的小垂直板聚丙烯酰胺变性凝胶电泳体系做了两点优化：①在制胶方面,确定了在不同温度下的最佳催化剂使用量,可保证顺利凝胶和不缩胶,②在保证电泳带型质量的前提下适当提高电泳电压,可缩短电泳时间,提高效率;另一方面对PAGE胶中DNA的银染方法做了简化：省略固定处理,简化为制胶前用乙醇擦净玻璃板、用纯水漂洗胶片后银染及降低染色液的AgNOs浓度,该简化可减少操作步骤,显著提高效率,并可节约药品。  相似文献   

花生叶片DNA快速提取方法的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

王蕾  赵新涛  许梦琦  宿烽  任艳  李双铃  石延茂  袁美  王传堂 《山东农业科学》2014,(7)

以花生幼叶为试材,对高通量DNA提取法、SDS简易法、TPS法以及TENP法4种不同的DNA提取方法进行比较和优化。结果表明,与其他3种改良方法比较,改良TPS法具有不需液氮磨样、提取速度快、试剂种类少、成本低、DNA溶解速度快、质量较好的优点,提取的DNA可用于花生SSR分析。  相似文献   

一种新的微卫星PAGE的DNA显带方法   总被引：2，自引：0，他引：2  

刘梦培  田敏  傅大立  傅建敏  王彩霞 《湖南农业科学》2010,(17)

提出了一种新的微卫星聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)显带方法,即微卫星PAGE荧光染料显带法,与琼脂糖凝胶荧光染料显带法和PAGE银染显带法相比,该法具有简单易行、快速高效、分辨率高、背景清晰等特点,是一种成功的DNA显带技术。  相似文献   

PAGE凝胶制备方法和银染方法的改进   总被引：4，自引：0，他引：4  

胡建斌  李静  袁鸣  胡深  李建吾 《江西农业大学学报》2009,31(4)

PAGE凝胶分析技术已广泛运用于小分子量PCR产物的分离,但因操作环节多、耗时长,不利于大规模分子标记分析工作的开展.对PAGE凝胶的制备和银染方法作些改进,省去常规凝胶制备中亲和硅烷/剥离硅烷处理过程,以及常规银染过程中的固定和定影两步骤.与常规方法相比,该方法操作简便、耗时短、带谱的分辨率高,可代替常规方法用于SSR等标记的PCR产物的分离.  相似文献   

柑橘苗期SSR鉴定分析体系的优化及初步应用   总被引：4，自引：0，他引：4  

韩国辉  魏旭  向素琼  汪卫星  何波  梁国鲁 《西南农业学报》2011,24(2)

本文以柑橘幼苗微量叶片(3～5 mg)为材料,改进柑橘基因组DNA提取方法,并对3种PAGE凝胶浓度和3种银染色方法进行了筛选和优化,建立了一种经济,高效的柑橘苗期SSR分析体系.试验结果表明:该微量叶片提取方法需材少,用时短,所提取基因组DNA质量好、纯度高,完全适用于SSR-PCR扩增反应.9%的PAGE凝胶浓度最适合柑橘SSR标记的电泳检测,扩增出的条带清晰,分散良好.改进的两种快速银染方法相对于传统的染色方法染色效果较好,且更加经济.初步对两个柑橘杂交幼苗群体进行了遗传鉴定和分析,2对引物从24株沙田柚与强德勒柚杂交幼苗中鉴定出17株杂种,4对引物在沙田柚与红江橙杂交群体中扩增出14条多态性条带,占总条带数的70.0%.表明所建立的SSR优化体系可为柑橘分子辅助育种提供技术参考.  相似文献   

中华桫椤DNA提取及ISSR分析     

应站明  黎桂芳  王海舟 《安徽农业科学》2009,37(32):16180-16181

[目的]研究中华桫椤总DNA的提取方法。[方法]采用SDS法和改良CTAB法提取中华桫椤总DNA,通过电泳检测方法进行比较。[结果]用改良CTAB法得到的DNA浓度和纯度都较高,基本上无蛋白质、多糖等杂质。用改良CTAB法得到的总DNA进行ISSR-PCR扩增,谱带清晰,获得较好的效果。[结论]为提取高质量的DNA样品奠定了基础,并为探讨中华桫椤自然居群的遗传多样性和种群遗传结构及进一步保护和利用中华桫椤提供了分子遗传学依据,  相似文献   

几种内生真菌DNA提取方法的比较     

吴发红  黄东益  黄小龙  周鑫  程文杰 《勤云标准版测试》2009,29(8)

通过3种内生真菌DNA提取方法的比较,即CTAB法、SDS法、改良的CTAB法,结果表明三种方法都能得到目的DNA,而且得率都较好,但改良的CTAB法效果最好,不仅DNA纯度高且质量也好.用改良的CTAB法所提取的DNA作为模板,进行PCR扩增,得到了清晰的、单一的扩增普带,完全可用于酶切、测序等后续实验.  相似文献   

快速提取玉米DNA方法的研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

曾桂萍  戴保威  余显权 《安徽农业科学》2007,35(23):7110-7111,7116

[目的]为了探索一种快速、简便,能够用于SSR分析的玉米DNA提取法。[方法]采用改进的常规DNA提取法和DNA快速提取法提取玉米种子胚和黄化苗叶片中的DNA,进行SSR分析,通过琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳对SSR产物进行检测。[结果]用常规法提取时,用氯仿∶异戊醇(24∶1)抽提1次就可获得质量好和浓度高的DNA;无须抽提,直接吸取上清液,可得到高浓度的DNA,也能满足SSR分析的需要;同样的提取法,SDS的提取效果比CTAB好。对快速提取法进行分析表明,相同的提取液和提取方法,采用种子胚提取的DNA浓度和质量明显高于叶片DNA。[结论]该研究为SSR在玉米种质及纯度鉴定上的应用提供了技术上的保证,有利于该项技术的普及和推广。  相似文献   

小麦春溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳（A-PAGE）方法的优化与改良及其应用     

王祖华  杨瑞先  姬云波 《勤云标准版测试》2009,29(20)

为了形成一套适合实际情况的小麦醇溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)方法和谱带分析技术;依据国际种子检验协会1986年公布的标准小麦醇溶蛋白A-PAGE方法,结合国内实验室的实际情况,摸索出了适合中国试剂和仪器的小麦醇溶蛋白A-PAGE的改良方法.该方法克服了标准方法中的胶韧性差、剥胶困难、分辨率不高、谱带识别繁琐、实验效率较低的限制.该方法适合中国小麦品种纯度的快速鉴定、血缘关系分析、遗传育种种质材料的选择等.  相似文献   

三角梅总DNA提取方法比较研究     

黄彦晶  吴少华  李房英  曾黎辉 《现代农业科技》2012,(24):166-168

为了选择一种快速、有效、简单的三角梅总DNA的提取方法,分别采用DNA提取试剂盒法、CTABmini法、改良SDS-KAC法、CTAB大量法提取三角梅嫩叶片的总DNA,用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳对所提取的总DNA进行检测。结果表明：CTABmini法提取的三角梅总DNA纯度高,浓度高,并且简单省时。CTABmini法是较为理想的三角梅总DNA提取方法,该法提取的总DNA适用于三角梅的分子生物学研究。  相似文献   

山楂PCR-SSCP反应体系与反应条件的优化     

撒云俐  那冬晨 《农业科学与技术》2017,18(3)

[目的]优化山楂PCR-SSCP反应体系与反应条件.[方法]以山楂为研究材料,采用改良的CTAB法分步提取叶绿体DNA和核DNA.从8对候选引物中分别筛选适合对叶绿体DNA和核DNA进行PCR扩增的引物,同时进行PCR-SSCP反应体系和反应条件的优化.琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测变性后的PCR扩增产物.[结果]筛选出ropB、ropL、rpoC1、ITS2和psbA-tmH五对引物适用于山楂的PCR-SSCP分析.电泳时,上样缓冲液(不含甘油)与PCR产物等量混合,98℃碱(1％NaOH)变性15min,采用6％的聚丙烯酰胺凝胶(交联度29∶1),电泳缓冲液0.5×TBE,在4℃恒温和200 V恒压的条件下,电泳3～4 h,可得到较好的山楂PCR-SSCP电泳图谱.[结论]建立了山楂PCR-SSCP最优反应体系与反应条件,为山楂SSCP分析奠定基础.  相似文献   

聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的改进及其在cDNA-AFLP分析中的应用     

曹蕾  徐波  朱万里  张国华  黄木坤  应辰哲  何水林 《福建农林大学学报(自然科学版)》2007,36(4):389-391

利用电解质梯度变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统对稻纵卷叶螟取食的水稻叶片进行cDNA-AFLP分析,结果表明产生的cDNA条带比普通变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统大约增加30%,解决了传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳在同一块胶板中大片段DNA条带堆积而小片段DNA条带间距过大,且读带数量有限的问题..  相似文献   

两种检测扁桃基因组RAPD扩增产物方法的比较分析   总被引：1，自引：1，他引：0  

乔霞  高疆生  吴婷  胡学林 《新疆农业科学》2008,45(5):839

通过2;(w/v)的琼脂糖凝胶和8;(w/v)的聚丙烯酰胺凝胶电泳对扁桃品种基因组DNA的RAPD检测.结果表明:8;(w/v)聚丙烯酰胺凝胶优于2;(w/v)琼脂糖凝胶,主要表现在,8;聚丙烯酰胺凝胶对长度相差100 bp以下的DNA分子的分离较2;的琼脂糖凝胶电泳效果好;且8;聚丙烯酰胺凝胶的分辨范围广,在线性DNA分子(0.1～2.0 kb)范围内也能得到很好的分离效果;用8;的聚丙烯酰胺凝胶分离扁桃品种基因组DNA的RAPD扩增结果,表现出在扁桃品种间DNA水平上差异大,运用此方法提高了扁桃品种的鉴别能力.  相似文献   

砂生槐单粒种子DNA的快速提取及RAPD检测     

石梦菲  拉多  张勇群 《黑龙江农业科学》2014,(8):35-38

为探讨快速提取种子DNA的有效方法,以砂生槐单粒种子为试验材料,在传统CTAB法基础上建立一种快速提取DNA的方法,并通过紫外分光光度法、凝胶电泳和RAPD-PCR检测所提基因组DNA。结果表明:快速法提取得到了质量较好、浓度及纯度较高的DNA,可以满足分子生物学实验的要求。此方法操作方便、快捷,是一种有效的砂生槐种子的DNA提取方法。  相似文献   

适于SSR-PCR的农作物基因组总DNA高通量提取方法的建立     

梁俊  张妍  陈忠良  莫璋红  范业赓  吴凯朝  李鸣  李杨瑞 《南方农业学报》2012,43(11):1621-1625

[目的]建立一种新的、通用、快速的农作物基因组总DNA提取方法,为应用分子标记技术研究遗传多样性及变异提供方便.[方法]分别从甘蔗、水稻、玉米、花生和大豆5种作物中提取基因组DNA,用琼脂糖凝胶电泳对所提取的DNA质量进行检测,然后每种作物分别选取两对SSR引物进行PCR扩增,用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增结果.[结果]采用该提取方法,不同作物产生的纯DNA在100.0~160.0 g/g,提取DNA的A260/A280比率在1.80~1.95.此外,电泳凝胶未出现可见的RNA污染,每个作物基因组DNA单一条带非常清晰,DNA结构完整,质量较高,适用于分子标记的研究.应用SSR分子标记进行PCR扩增,重复性、稳定性好,经琼脂糖凝胶电泳检测,条带清晰且分辨率较高.[结论]建立的DNA提取方法为直接将叶片剪碎后装入EP管中,加入提取缓冲液进行DNA提取,省去了用液氮研磨的过程.与传统的DNA分离方法相比,新建立的DNA提取方法具有高通量、简单、快速、经济效益高等优点.  相似文献   

从大体积的PAGE凝胶中纯化长链寡核苷酸的新方法     

杜晓华  李新峥  刘海妮  陈会娜 《西北农业学报》2010,19(2):168-171

通过比较从大体积的PAGE凝胶中回收寡核苷酸的不同方法,提出回收未银染的长链寡核苷酸的最佳方案:用12 cm×1.5 cm的PAGE凝胶柱分离DNA,然后将凝胶切成长约0.5 cm的胶条,通过PCR反应挑选含有寡核苷酸的胶条。用2 mL的寡核苷酸洗脱缓冲液回收寡核苷酸,反复提取3次。用装填30 mg硅胶的C18 Sep-Pak反相层析柱进行纯化,最后经过离心冻干后即得到纯化的寡核苷酸,该方法的回收率可达(28.7±2.0)%。  相似文献   

TRIS饱和酚一步法提取食用菌DNA   总被引：1，自引：0，他引：1  

赵春喜  马利华  杨同文 《安徽农业科学》2008,36(28)

[目的]为探索食用菌子实体DNA的快速提取方法。[方法]以4种广泛栽培的食用菌子实体为材料,采用改进的TRIS饱和酚法提取食用菌基因组DNA,并用琼脂糖凝胶电泳和PCR技术检测提取DNA样品的质量。[结果]获得的食用菌DNA质量较好,能够满足PCR等后续分子生物学试验。[结论]TRIS饱和酚法是一种简单、快速提取食用菌DNA的方法。  相似文献