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1.
芮荣 《农业生物技术学报》2008,16(2)
本研究旨在建立优化的猪精液冷冻保存方法。实验表明，采用ZO液对猪精液进行预稀释，室温平衡1h，加入冷冻I液后于5℃水浴平衡1.5 h，再加入冷冻II液平衡2 h后装入0.25 mL细管，液氮面上3 cm处平衡10 min投入液氮，解冻时采用37℃水浴30s，可获得最佳冷冻效果。采用该优化方案，猪冷冻精液解冻后的精子活力可达0.58。 相似文献
2.
本研究开始于1978年11月,结束于1980年12月。在精液制冻方面着重研究颗粒精液剂量的大小及平衡时间,以求制冻操作简便,使用方便;在解冻方面着重研究解冻液的配方、解冻温度及方法,以求精液解冻后在室温中能保存较久时间,便于在生产中应用。试验取公猪浓份精液用葡萄糖4克、蔗糖1.2克、新鲜牛奶30毫升、新鲜蛋黄10毫升、甘油3毫升、蒸馏水57毫升等配成的稀释液按1:1比例稀释,在8—10℃平衡,采用“浮盆法”制冻,在液氮中保存。试验表明:颗粒精液每颗剂量1.0毫升,质量并不受影响,这在实际应用时,就较小剂量方便得多。平衡时间以2小时的效果最好,解冻后精子活力0.34±0.049,精子复苏率45.2±6.236%。用葡萄糖30克、柠檬酸钠(二水)1.5克、蒸馏水100毫升、安钠加注射液2.0毫升等配成的解冻液解冻效果最好,解冻后精子活力0.37±0.061,精子复苏率47.2±4.578%,精子顶体完好率73.70%,精子顶体评分0.498;解冻后的精液在20—21℃保存4小时精子活力仍达0.34±0.067,精子顶体完好率51.92%,精子顶体评分0.957。解冻温度50℃较37℃好,解冻方法以先干后湿的效果较好。母猪输精试验先后进行8批,共输精母猪132头,情期受胎率71.21%。平均每窝产仔数10.19头。 相似文献
3.
带精浆直接稀释法探讨猪精液低温(4℃)保存的可行性 总被引：1，自引：0，他引：1
为研制更为简易、高效的保存稀释液配方及操作程序,探讨4℃条件下稀释保存猪精液的可行性,本实验首次采用带精浆直接稀释法对猪精液的低温保存技术进行了研究.结果表明,在4℃条件下,用Ⅱ液(葡萄糖-卵黄-蔗糖)和Ⅳ液(葡萄糖-卵黄-乳糖)保存猪精液,精子的存活时间和活率分别为144 h、0.517和132 h、0.510,而Ⅰ液(葡萄糖-卵黄-蔗糖-柠檬酸钠)和Ⅲ液(葡萄糖-卵黄-乳糖-柠檬酸钠)精子活率保持0.5以上不到24 h.随着保存时间的延长,四种稀释液中保存的精子活率和顶体完整率均逐步下降,其中Ⅱ液和Ⅳ液均分别在48 h和24 h内下降较快,以后则呈缓慢下降趋势.综上所述,在低温条件下,采用Ⅱ液和Ⅳ液稀释保存猪精液,其精子活率能分别在144 h和132 h内保持0.5以上;所研制配方(Ⅱ液和Ⅳ液)组分简单、配制方便;采用带精浆直接稀释法低温保存猪精液可行,且操作程序简易. 相似文献
4.
卢克焕 《广西农业生物科学》1982,(1)
本研究着重对公兔精液冷冻保存所用的防冻剂的选择及其用量、精液的稀释方法、平衡时间、降温速度及解冻温度等方面进行了一系列试验研究,最后进行输精试验,以验证试验效果。公兔采精用假阴道法,采精后立即检查精液一般性状,精子活率达0.7以上始供试验用。稀释液用 Tris 缓冲液为基础液,其成份为:Tris2.52克,葡萄糖1.05克,柠檬酸1.41克,蒸馏水84毫升,卵黄16毫升。稀释液中的防冻剂以 DMSO 和甘油并用效果较好。当 DMSO 最终浓度从0增至9%时,解冻后精子活率亦随之而提高;当甘油最终浓度为1.25、2.5和3.75%时,解冻后精子活率较好,三者间无明显差异(P>0.05),最终浓度为0和5%时,冻后精子活率则比以上三者有明显的下降(P<0.05)。解冻后精子顶体完好率则随着 DMSO 或甘油浓度的增加而下降。以冻后精子活率和顶体完好率这两个因素综合衡量,DMSO 和甘油的最终浓度分别以4.5%和1.25%效果较好。稀释精液时,采用两次稀释法的冷冻效果比一次稀释法的好。但两者差异不显著(P>0.05)。平衡时间以0.5—1小时效果较好,而2小时和3小时的效果较差。冷冻精液时,在-25—-50℃间的降温速度以每分钟下降3—8℃效果较好,如超过11℃,解冻后精子活率则有下降的趋势。颗粒冻精在40—50℃进行干解冻的效果比30℃和60℃的好。输精时,母兔先静注 HCG50—100单位以诱发排卵,输精量为0.5—0.8毫升。输精母兔230头,情期受胎率73.9%,平均每窝产仔数4.4头。 相似文献
5.
栉江珧(Atrina pectinata)和近江牡蛎(Crassostrea rivularis)是我国重要的海产经济贝类,建立其精子冷冻保存技术及精子冷冻库,对种质资源的保护和遗传育种具有重要意义.本研究对其精子冷冻保存过程中冷冻剂种类和浓度的选择、冷冻程序、平衡时间、保存体积、精液稀释方式、保存时间等多个影响因素进行了比较筛选,并利用显微镜直接检测和曙红Y(eosin Y)染色检测结合的方式检验精子存活率.结果表明,二甲亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)作为抗冻剂的保存效果要明显优于甘油(glycerol,Gly),终浓度为8％～10％的二甲亚砜保存效果最好,其栉江珧和近江牡蛎精子活率均可达60％以上,而甘油保护下精子活率小于40％.精液的稀释方式采用将抗冻液等分为3份,依次与精液混合,每次间隔8 min,整个过程约30 min;此种精液稀释方式与一次性混合方式相比,精子活率可提高约30％.稀释后精液需要在4℃下平衡15～25 min,平衡样品与直接冷冻样品相比,精子活率提高约50％.精液降温程序为在样品投入液氮前,于液氮面以上15 cm处停留5 min,5 cm处停留10 min,精子活率可达60％以上;而未经此降温程序直接投入液氮中的样品精子活率接近0.与此降温程序相对应的样品冷冻体积在1.0～1.4 mL范围内为宜.冷冻180 d内复苏的精子活率由90％左右(鲜精)下降至60％左右,180 d后精子活率下降至56％左右.研究结果为栉江珧和近江牡蛎精子超低温冷冻保存、双壳类种质保护和遗传育种提供了理论和技术依据. 相似文献
6.
为研制更为简易、高效的保存稀释液配方及操作程序,探讨4°C条件下稀释保存猪精液的可行性,本实验首次采用带精浆直接稀释法对猪精液的低温保存技术进行了研究。结果表明,在4°C条件下,用Ⅱ液(葡萄糖-卵黄-蔗糖)和Ⅳ液(葡萄糖-卵黄-乳糖)保存猪精液,精子的存活时间和活率分别为144 h、0.517和132 h、0.510,而Ⅰ液(葡萄糖-卵黄-蔗糖-柠檬酸钠)和Ⅲ液(葡萄糖-卵黄-乳糖-柠檬酸钠)精子活率保持0.5以上不到24 h。随着保存时间的延长,四种稀释液中保存的精子活率和顶体完整率均逐步下降,其中Ⅱ液和Ⅳ液均分别在48 h和24 h内下降较快,以后则呈缓慢下降趋势。综上所述,在低温条件下,采用Ⅱ液和Ⅳ液稀释保存猪精液,其精子活率能分别在144 h和132 h内保持0.5以上;所研制配方(Ⅱ液和Ⅳ液)组分简单、配制方便;采用带精浆直接稀释法低温保存猪精液可行,且操作程序简易。 相似文献
7.
哲罗鲑(Hucho taimen)是分布于额尔齐斯河和黑龙江等水域的冷水性珍稀鱼类,对其精子冷冻保存技术进行研究并建立精子冷冻库,对于哲罗鲑种质保存、人工繁殖发育、苗种培育及种群恢复都具有重要的意义.本研究利用生理盐水、葡萄糖、胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)等配制了9种精子稀释液(MPRS,RS,Hanks,ELS,EG1,EG2,Stein,SS-2和D1S),对哲罗鲑精子在稀释液中活力、加入抗冻剂后活力和液氮中冷冻后活力进行检测,发现精子在以上稀释液中均具较高活力(73.00±2.65)％～(96.67±2.08)％,加入二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)后活力下降,冷冻后仅在ELS和D15中具有极低活力(1.21±0.00)％和(1.1±0.00)％.进而利用ELS对甲醇、二甲基亚砜浓度进行筛选,发现精子在4％～12％甲醇中平衡20 min后活力仍为(79.00±6.52)％～(88.80±7.89)％,冷冻后仅在6％甲醇中具有相对较高活力(18.33± 10.61)％,但与鲜精活力相比显著下降(P＜0.05).精子在4％～12％ DMSO中平衡5 min后精子活力为(43.75± 11.09)％～(81.67±2.89)％,平衡20 min后精子活力极大下降(3.25±0.30)％～(45.00±5.77)％,冷冻后精子活力极低(1.00±0.00)％～(2.75±1.50)％(P＜0.05).以D15为基础液对葡萄糖浓度进行筛选,发现当葡萄糖浓度为30％(D30)时,冷冻后精子活力相对较高(17.80±2.59)％,但与鲜精相比活力显著下降(P＜0.05).另外对精子在D15、D30、Stein和ELs4种稀释液中短期保存的效果进行比较表明,Stein中精子存活在时间最长(45 h),D30次之(15h).综上所述,分别在ELS和D30中加入6％甲醇冷冻保存哲罗鲑精子具有一定活力,本研究结果为哲罗鲑精子大量冷冻保存和精子库建立等方面研究奠定了基础. 相似文献
8.
探讨了冷冻精液解冻后,精子不同贮存温度和时间对牛体外受特的影响。试验1表明,精子放置在25℃的环境下,其分裂率和囊胚率较放置在4℃和39℃的高;试验2,精子在25℃的环境下放置48h 后,其分裂率较放置8h 和24h 的显著降低,但其囊胚率无显著差异。因此,精子在25℃的环境温度下放置48h,仍可用来作体外受精。 相似文献
9.
以家兔为试验动物,从精液解冻后的精子活率和复苏率2个指标,分别对3种稀释液(1:T ris0.25 m o l/L 蔗糖0.1 m o l/L 柠檬酸钠83 mm o l/L 卵黄10% 二甲基亚砜(DM SO)15%;2:配方1 葡萄糖0.47 mm o l/L;3:T ris 0.29 m o l/L 葡萄糖0.71 mm o l/L 柠檬酸钠67 mm o l/L 卵黄20% 甘油4%)、两种抗冻剂(甘油4%、DM SO 15%)、4°C下平衡时间(30、60、120、180 m in)三个方面进行了比较试验。公兔采精用假阴道法,采精后立即检查精子活率,达0.60以上的供试验用。结果表明:(1)3种稀释液中,用稀释液2稀释的精液,精子解冻后活率和复苏率显著高于稀释液1和稀释液3(精子活率:0.153 vs 0.103、0.109;复苏率:0.205 vs 0.137、0.147,P<0.01),而稀释液1和稀释液3之间差异不显著(P>0.05);(2)在稀释液2中,分别用4%甘油和15%DM SO作防冻剂,两者的精子解冻后活率之间(0.193 vs 0.261,P<0.01),复苏率之间(0.250 vs 0.340,P<0.01)差异极显著;(3)在4°C下平衡30、60、120、180 m in,结果发现,在30~60 m in之间,解冻后精子活率之间(0.261 vs 0.249),复苏率之间(0.340 vs 0.325)差异均不显著(P>0.05),但是随着平衡时间(120~180 m in)的增加,精子活率明显降低,精子几乎死亡。结论:采用稀释液2的配方,在4°C下平衡30~60 m in,可获得较好的兔精液冷冻保存效果。 相似文献
10.
针对星斑川鲽(Platichthys stellatus)养殖群体中雄性个体较雌性小,产精液量低,限制了人工繁殖育苗和杂交育种开展等问题,本研究以性成熟的星斑川鲽为实验材料,对精子稀释液成分、稀释液渗透压、激活海水适宜温度和冷冻精液的适宜稀释比例等进行筛选,并用冷冻精液和鲜精分别与星斑川鲽卵进行受精和孵化实验,实验结果利用SPSS软件中单因素方差分析法和Student-Newman-Keuls进行比较分析。结果表明,利用Ts-2(37.65 g/L蔗糖+10.01 g/L KHCO3+1.21 g/L Tris碱)和SFs-4(60 g/L葡萄糖+10.01 g/L KHCO3+1.21 g/L Tris碱)冷冻保存的精子活力最高,分别为(56.67±5.78)%和(66.67±5.77)%。利用计算机辅助精子分析(computer assisted sperm analysis,CASA)系统对星斑川鲽精子进行分析,测定了用Ts-2和SFs-4保存的冷冻精液中精子运动方式的各项参数。结果显示,测定的各项参数(曲线运动速度(curvilinear velocity,VCL)、直线运动速度(straight line velocity,VSL)、平均鞭打频率(beat cross frequency,BCF)、运动的直线性(linearity,LIN)和运动的前向性(straightness,STR)表明,利用SFs-4保存的精子各项运动参数明显高于Ts-2。利用蔗糖、KHCO3和Tris碱配制不同渗透压稀释液中,在渗透压为319.94 Pa时,精子活力最高,为(61.67±5.00)%,与鲜精相比无显著差异(P0.05)。利用3~18℃海水激活精子,结果显示,当激活海水温度在12℃时精子活力最高,与鲜精相比无显著性差异(P0.05),而其他温度下显著低于鲜精活力(P0.05)。将解冻后的精液稀释10~40倍,与星斑川鲽卵受精,结果显示,在稀释20倍后冷冻精液的受精率最高。本研究利用Ts-2+20%二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)和SFs-4+20%DMSO对星斑川鲽精子成功进行冷冻保存,为星斑川鲽精子冷冻保存、种质库的建立和应用提供理论和技术依据。 相似文献