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介绍蛋白质组学的概念,双向电泳技术在水稻蛋白质组学中的应用,双向电泳技术的一些优化步骤以及其局限性和对未来的展望。 相似文献
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双向电泳技术在蛋白质组学研究领域中处于核心地位。从样品制备、第一向等电聚焦电泳及第二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、蛋白检测等关键环节方面对双向电泳技术的研究进展作了详细综述,并简要分析评价了以经典双向电泳为基础发展起来的差异凝胶电泳;同时重点介绍了双向电泳技术在农业生物蛋白质组学研究领域中的应用范围,为进一步开发利用提供参考;最后对双向电泳技术的发展前景作了展望。 相似文献
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双向电泳(2-DE)技术是研究蛋白组学的有效途径和重要手段,而在双向电泳第一向中使用不同pH梯度的IPG胶条,是对双向电泳技术研究的深入。利用改良的TCA/丙酮与Tris-饱和酚提取法,提取纯度更高的绿竹叶片全蛋白,并在双向电泳中使用不同pH梯度的IPG胶条,检测其对绿竹叶片双向电泳图谱的影响。结果表明,蛋白样品上样量为20μg时,在7 cm的pH3-10L、pH3-10NL、pH5-8L 3种胶条中,pH5-8L的胶条在双向电泳的凝胶图谱上显现的蛋白点数目最多,约有400个,而且蛋白点的分布较其他2个胶条的结果更为均匀,清晰度更高;pH3-10NL的胶条的图谱上显现的蛋白点要比同一跨度的pH3-10L的胶条更多;通过3种胶条的对比可以使绿竹叶片双向电泳的分辨率显著提高。对于在pH5-8L显现出来的4个蛋白点进行MALDI-TOF-MS质谱分析,成功鉴定出4个蛋白点,其中3个蛋白点在pH3-10L胶条的双向电泳中是没有显现出来的,这些蛋白对于植物生物功能的发挥具有意义。试验表明了对于一些低丰度蛋白及小分子量蛋白的检测和鉴定,可以利用pH梯度较小的固化胶条进行双向电泳试验。 相似文献
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林木抗逆机制的研究是林木抗逆育种的重要基础。为了解旱柳Salix matsudana 耐盐机制,实验采用蛋白质双向电泳技术研究盐碱胁迫前后旱柳蛋白表达变化,分离鉴定旱柳耐盐相关基因,建立一套适合于旱柳根系蛋白质的双向电泳技术体系是蛋白质组学的基础。用改进的酚抽法抽提旱柳根总蛋白,此方法不仅能很好地分离蛋白,而且能有效去除样品中的盐分。通过比较分析了双向电泳不同条件对电泳结果的影响,确立了900 μg·胶条-1的最佳上样量,10 min平衡时间以及10万 V·h 的聚焦时间的双向电泳条件。还比较了氯化钠胁迫后双向电泳图谱差异,发现了39个差异表达蛋白,其中15个下调,24个上调（11个新诱导表达）,为下一步通过质谱鉴定分析旱柳耐盐分子机制及抗性基因分离奠定了基础。图9参23 相似文献
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双向电泳技术研究进展 总被引：14，自引：0，他引：14
双向电泳是蛋白质组学研究中最常用的技术，具有简便、快速、高分辨率和重复性等优点。本文重点介绍了双向电泳的基本原理、样品制备、胶条水合、等电聚焦、聚焦后胶条平衡、第二相SDS—PAGE和分离蛋白质的检测与匹配分析。同时对当前双向电泳技术面临的挑战和发展前景进行了讨论。 相似文献
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双向电泳技术在植物蛋白质组研究中的应用 总被引：2，自引：1，他引：1
双向电泳技术是获得细胞、组织或器官等蛋白表达图谱的主要手段,是蛋白质组学研究的核心技术之一。综述了双向电泳技术的原理、主要操作方法及其在植物蛋白质组研究中的应用。 相似文献
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水稻种子胚乳蛋白的双向电泳分析技术 总被引：8，自引：2，他引：8
为探讨水稻灌浆期间与籽粒充实相关蛋白表达的变化，建立了一套适于水稻种子胚乳蛋白双向电泳分析技术，探讨了胚乳蛋白的提取、纯化以及双向电泳的一些关键技术．结果表明，通过乙醇铵沉淀、高压等电聚焦和两步平衡等方法可以获得较好的分析结果，获得胚乳蛋白斑点数约350个，等电点范围在3．0～9．0，其中大部分集中在4．0～7．0． 相似文献
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通过蛋白样品、上样量、聚焦时间、重复性等多个方面的优化,建立了桔小实蝇蛋白质双向电泳技术体系,并分析了双向电泳技术在口岸检疫中的运用前景.结果显示使用bio-rad公司的Readyprep 2-D净化试剂盒可以使图谱质量提高;上样量采用300μg,等电聚焦时间60 000VH最佳,可以用于后续的蛋白质组学研究.而利用双向电泳技术对检疫性病虫害、医学媒介生物进行分类鉴定,是一种准确性高、重复性好、不限制于样本形态的方法,极大地扩充了生物的分类鉴定技术.随着技术的进一步提高,双向电泳将在口岸检疫性病虫害和医学媒介生物的鉴定中发挥更大的作用. 相似文献
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蛋白质双向电泳是蛋白质组学研究方法之一,但蛋白质双向电泳技术体系却因物种不同而有所差异,因而蛋白质双向电泳体系的建立是进行蛋白质分离、鉴定的首要步骤。本文对福建柏叶片蛋白质提取方法、IPG胶条、等电聚焦参数设定、丙烯酰胺分离胶浓度等因子进行单因素分析,对福建柏双向电泳技术进行优化。结果表明,采用三氯乙酸-丙酮提取福建柏叶片的蛋白点多且图像清晰,p H4~7的IPG胶条最适合福建柏叶片蛋白的分离,等电聚焦参数设定为20 000 Vh,浓度为10%的分离胶进行福建柏双向电泳最好。本研究初步建立了福建柏叶片蛋白质双向电泳体系,为深入研究福建柏蛋白质组学提供依据。 相似文献
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水稻胚乳双向电泳技术体系的优化分析 总被引：1，自引：0，他引：1
为比较同一杂交组合不同直链淀粉含量后代在灌浆期胚乳内蛋白表达差异,文章建立了一套适合灌浆期水稻胚乳蛋白的双向电泳技术,探讨了胚乳蛋白的提取、等电聚焦上样量的选择、胶条转移等双向电泳的一些关键技术。结果表明,一次溶解蛋白样品,TCA-丙酮法优于酚法蛋白提取,300μg上样量为最适上样量,能得到清晰、分离效果好、蛋白点数较多的图像。 相似文献
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小麦叶片蛋白质双向电泳的改良方法 总被引：5，自引：0，他引：5
以普通小麦叶片为实验材料，在原有双向电泳基础上通过对样品制备、样品溶解、等电聚焦电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳以及染色方法等关键步骤进行改进和优化，在小麦叶片可溶性蛋白的分析中获得了满意的双向电泳图谱。 相似文献
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ISO-DALT双向电泳方法的优化与改进 总被引：13，自引：0，他引：13
通过对ISO-DALT双向电泳技术进行优化与改进,建立了一套适合于UV-B胁迫下水稻蛋白质组分析的双向电泳技术.用此方法对经低剂量UV-B辐射处理的水稻品种IR64的叶片蛋白进行双向电泳,可以分辨出1200-1300个蛋白(肽)点,等电点(pI)在3.5-9.3之间,相对分子质量在10-120 ku之间,分辨率较高,且重复性较好. 相似文献