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胚盘下腔是禽类胚胎发育到囊胚时出现的特有腔室,通过向禽类胚盘下腔注射外源细胞或基因是常用的制备嵌合体和转基因禽类的方法。本试验通过制备石蜡切片,验证胚盘下腔显微注射效果的方法。以白来航鸡种蛋为模型,向胚盘下腔中微注射少量的标记物,经过琼脂糖包埋脱水后制作石蜡切片,获得完整的鸡胚Ⅹ期胚盘切片。经过HE染色,可以观察到鸡胚Ⅹ期胚盘的上下胚层及胚盘下腔,鉴定标记物是否准确注入胚盘下腔中。结果表明利用本方法可以获取完整胚盘各个切面,准确检验胚盘显微注射效果,为改进显微注射方法和提高转基因禽类制备效率提供新的有利途径。 相似文献
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背主动脉注射是生产转基因鸡的经典方法,该方法不需换壳培养,但壳内注射技术难度大,并且无法实时观察后期胚胎发育情况。本实验对背主动脉注射法进行了改进,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)腺相关病毒(Adeno-associated Virus,AAV)壳外注射至150枚HH 14~16期(Hamburger-Hamilton Stage 14~16)鸡胚背主动脉中,再进行换壳培养,继续孵化至出壳,观察和分析改良背主动脉注射法与传统背主动脉注射法和胚盘下腔注射法对发育8、14、18、21 d鸡胚存活率、孵化率以及EGFP阳性检出率的影响。结果表明:改良背主动脉注射组鸡胚存活率均高于传统背主动脉注射组与胚盘下腔注射组(P<0.05或P<0.01);改良背主动脉注射组的鸡胚孵化率(37%)高于传统背主动脉注射组(16%)与胚盘下腔注射组(28%)(P<0.01);荧光蛋白手电筒检测显示,改良背主动脉注射组鸡胚EGFP阳性率(17%)明显高于传统背主动脉注射组(13%)与胚盘下腔注射组(12%)(P<0.01)。综上,背主动脉壳外注射结合换壳培养提高了转基因鸡胚胎孵化率和EGFP阳性检出率,对提高转基因鸡效率具有重要价值。 相似文献
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实验性的以呼肠孤病毒，禽流感病毒和传染性喉气管炎病毒分别污染ＮＤ疫苗，经特异性ＮＤ抗血清中和之后接种鸡胚。经血清中和未污染的疫苗对照鸡胚全部生存，所在死亡的被实验性污染病毒疫苗的鸡胚都按其污染的病毒出现其特有的病理变化。作者认为应用此种方法可以检出活疫苗中污染的外源病毒。 相似文献
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正1采血用品5 m L一次性注射器、试管、试管架、75%酒精棉球、干棉球、标签、记号笔、采样箱、冰袋、冷藏容器、相关表格及个人防护用品等。2采血方法采血部位与采血方法应根据试验方法、检测项目、所需血量以及鸡的日龄等确定。用血量较少的,如制血液涂片,可刺破鸡冠,以吸管或毛细吸管直接取血;采中等血量可从鸡翼下静脉血管采血,如检测血清中禽流感、新城疫抗体效价;采血量较多的,可从心脏采血,如配 相似文献
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乌骨鸡早期胚胎发育的研究 总被引：5，自引：2，他引：3
在鸡产蛋后，不同时间获取受精卵，观察早期胚胎发育变化规律，依据胚盘形态的变化，可将鸡胚在体内发育过程分为两个时期：（1）距前一个蛋产出后5.5h(0-1h子宫龄）至15.5h(10-10.5h子宫龄）为鸡胚的卵裂期，卵裂的结果形成厚约6－7层细胞的胚盘。（2）距前一个蛋产出后17.5h（12－12.5h子宫龄）至明区形成期，即鸟类的囊胚期晚期，结果在胚盘中央形成透明的明区和周围不透明的暗区。乌果骨受精卵第一次分裂发生在产蛋后5h（0－0.5h子宫龄），桑椹期在产蛋后11.5h(6-6.5h子宫岭），囊胚期在产蛋后15.5h(10-10.5h子宫龄）。 相似文献
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四氯联苯对鸡胚生殖新月原始生殖细胞分布的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
为了探索四氯联苯(2,2′,5,5′)对鸡胚生殖新月原始生殖细胞(PGCs)分布的影响,本试验将四氯联苯注入种蛋的胚盘(第X期)处,在38℃,相对湿度60%,每2h45度转蛋的条件下孵化至原条期,通过不同方法检测原条期生殖新月明区、暗区及血液循环中的PGCs,探讨四氯联苯对胚盘生殖新月区PGCs分布的影响。结果表明,四氯联苯明显降低了原条期明区和血液中PGSs的数量(P<0.01),但对暗区PGCs的数量影响不明显。这说明四氯联苯对血液中PGCs的影响是由于降低了生殖新月明区PGCs的缘故,和暗区的PGCs无相关性。 相似文献
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鸡胚制活病毒疫苗中霉形体污染的研究 总被引：3，自引：1，他引：2
对32个鸡胚,80组(每20个鸡胚液混合物为一组)未加抗生素的新城疫疫苗半成品和14批成品疫苗(其中冻干苗12批和液体苗2批)的样品进行了霉形体污染的检查。结果从一个接种了新城疫病毒 LaSota 弱毒株的鸡胚中,9批半成品疫苗中和10批成品疫苗的样品中分离出了霉形体。共20个分离物,对其中12个进行了种属鉴定,12个分离物中有4个含有两种霉形体,因此共含有16株霉形体,即鸡毒霉形体8株,滑液霉形体7株和一株不属于这两种的霉形体。随机选出3个分离物进行了链霉素敏感性测定。测定结果表明这些菌株的抗药性大为增强,链霉素的最小抑制量为对照株的几十百倍,因而能抵抗疫苗中链霉素的作用而污染了疫苗。建议在产品检验中增加霉形体检测项目。在未能使用 SPF 鸡胚生产疫苗以前应尽速进行消灭污染的研究。 相似文献
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为了探讨悬浮培养和鸡胚尿囊液培养得到的H9亚型禽流感病毒(AIV)抗原制备的疫苗的免疫效力,试验用3株H9亚型AIV株分别接种微载体悬浮培养的MDCK细胞制备3种悬浮培养的细胞疫苗抗原,以3株H9亚型AIV株接种10日龄SPF鸡胚制备3种鸡胚尿囊液抗原,测定6种抗原液HA效价和鸡胚半数感染量(EID50);分别使用6种抗原液制备灭活疫苗,免疫21日龄SPF鸡,并在免疫后第21天采血测定HI抗体水平,采血后进行攻毒并在攻毒后第5天进行病毒分离试验。结果表明:两种方式制备的AIV抗原HA效价为7~9 lb,鸡胚半数感染量为1×106.9~7.9EID50,疫苗免疫后第21天用同源毒株作为工作抗原测定的免疫鸡HI效价差异不大,用异源毒株测定时有一定差异;两种方法得到的抗原制备的疫苗均能获得很好攻毒保护。 相似文献
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《畜牧与饲料科学》2017,(7)
为了有效解决血液涂片制作过程中染色前后的载玻片、染色必用药品和物品侵占实验平台空间及涂片染色后染色废液对环境的污染等问题,研制了一种血液涂片染色架。该血液涂片染色架主要由支撑架、若干隔板和由下至上依次设置在支撑架上的废液槽、染色平台以及放置平台组成。使用时将涂有血膜的载玻片均匀摆放在染色平台上染色,涂片染色后将隔板移动至上面的放置平台,使得染色和晾干等步骤可以同时进行;而涂片晾干时的残余液体能够顺利流动至废液槽中,不会直接滴落。通过使用该血液涂片染色架提高了血液涂片制作的质量,节省了在制作过程中等待晾干的时间,染色废液集中收集处理利于生物安全,节约了实验平台空间。 相似文献
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鸡胚胎干细胞是一种多能性干细胞,从X期胚盘分离胚盘细胞或早期鸡胚的生殖嵴分离原始生殖细胞,经体外长期抑制分化培养可得到鸡胚胎干细胞。为维持细胞在培养过程中的未分化状态,需要采用饲养层细胞培养,同时设计合理的培养液配方并添加多种抑制分化或促进增殖的细胞因子。通过碱性磷酸酶活性检测、胚胎表面特异性抗原检测、分化试验及嵌合体试验等方法,可对鸡胚胎干细胞进行准确鉴定。文章主要就鸡胚胎干细胞的分离、培养与鉴定方法的研究进展及其应用前景进行简要综述,为进一步发展更高效的鸡胚胎干细胞培养体系并应用于生产实践提供一定的借鉴。 相似文献
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禽用胚苗,系采用鸡胚、鸭胚等作为主要原材料生产的禽用疫苗.由于鸡胚产量大,供应足,价格低,取材广泛,生产周期短等优点,大多数禽用胚苗采用鸡胚作为主要原料.禽用病毒疫苗的生产,一般是以无特定免疫原性的鸡胚作为病毒繁殖的寄主,经孵化病毒扩增后,收获胚内病毒含量较高的部分用来制造疫苗.可见,在疫苗生产过程中需要用到大量的鸡胚.鸡胚成活率、外源物质对终产品的影响,是决定疫苗生产成本及品质的两个关键因素.其中,影响鸡胚成活率的一个重要原因是鸡胚外表面的细菌污染.为了寻找更适合实际生产的鸡胚外表面灭菌方法,提高鸡胚孵化成功率,降低生产成本,我们设计了如下试验:采用连续80余批次种胚,采用不同的消毒方式对鸡胚外表面进行处理,取得比较明显的效果.现报告如下: 相似文献
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为初步调查SPF鸡感染鹦鹉热嗜性衣原体状况及相关SPF鸡胚源疫苗是否出现污染,本试验通过采集不同日龄的SPF鸡血清70份、SPF种蛋卵黄膜30份,收集市场上销售的SPF鸡胚源疫苗共41支,利用国产间接血凝试剂盒检测抗体,进口免疫荧光试剂盒分别测定其抗体、抗原阳性率,以评价SPF鸡鹦鹉热嗜性衣原体的流行状况和相关疫苗的污染状况。本试验结果显示,SPF鸡血清阳性率分别为31.4%(荧光法)、5.7%(间接血凝法);SPF种蛋阳性率33.3%,SPF鸡胚源疫苗平均阳性率31.7%。SPF鸡已经感染了鹦鹉热嗜性衣原体,且发现经鸡胚卵黄膜而传播病原的新途径,进而造成SPF鸡胚源疫苗出现衣原体污染。因此,加强SPF鸡鹦鹉热嗜性衣原体监测已势在必行。 相似文献
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利用HI和AGP方法检测普通种蛋中ND和IBD的卵黄抗体水平,利用HA和EID50检测方法比较多种病毒(如NDV、IBV、IBDV及AEV)在SPF鸡胚与普通鸡胚上繁殖性能的差异。研究结果表明:普通种蛋中ND及IBD的卵黄抗体水平普遍较高,在SPF鸡胚上新城疫LaSota病毒繁殖量是普通鸡胚的5～20倍,尿囊液血凝效价平均高2.0～2.5滴度。MA5毒株在SPF胚病毒液EID50为普通鸡胚的10倍以上熏且每次检测的结果比较接近。IBDV、AEV等病毒在普通鸡胚上几乎不能增殖。 相似文献
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利用HI和AGP方法检测普通种蛋中ND和IBD的卵黄抗体水平，利用HA和EID50检测方法比较多种病毒(如NDV、IBV、IBDV及AEV)在SPF鸡胚与普通鸡胚上繁殖性能的差异。研究结果表明：普通种蛋中ND及IBD的卵黄抗体水平普遍较高，在SPF鸡胚上新城疫La Sota病毒繁殖量是普通鸡胚的5～20倍，尿囊液血凝效价平均高2.0～2.5滴度。MA5毒株在SPF胚病毒液EID50为普通鸡胚的10倍以上，且每次检测的结果比较接近。IBDV、AEV等病毒在普通鸡胚上几乎不能增殖。 相似文献
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鸡传染性法氏囊病活疫苗在对鸡的传染性法氏囊病免疫上广泛应用 ,其特点是使用方便 ,免疫效果好。但在其效力检验上 ,我国目前使用的方法与国外一些国家使用的方法存在着差异。为此我们对鸡传染性法氏囊病活疫苗进行了效力检验对比试验 ,现报告如下。1 试验材料ＳＰＦ鸡胚 :由黑龙江化血研生物技术有限公司ＳＰＦ鸡场提供ＳＰＦ种蛋 ,本实验室自行孵化。鸡胚成纤维细胞 :由ＳＰＦ胚自行制备的鸡胚成纤维细胞(ＣＥＦ)。鸡传染性法氏囊病活疫苗 :由黑龙江省生物制品一厂提供(批号 :2 0 0 0 5 2 ) ,每瓶 10 0 0羽份。由某合资公司提供 (批号 :… 相似文献