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1.
斑点叉尾(鱼回)血清免疫球蛋白纯化及其结构分析 总被引：2，自引：0，他引：2
通过饱和硫酸铵分步盐析结合柱层析纯化温和气单胞菌免疫的斑点叉尾(鱼回)血清免疫球蛋白(Ig),结果表明,斑点叉尾(鱼回)血清Ig主要分布在35%～55%的硫酸铵沉淀区间;而在Sepharose-4B凝胶柱和DEAE-52阴离子交换柱层析纯化的Ig均出现在第1个蛋白质峰.SDS-PAGE分析表明,纯化后的血清Ig纯度提高.通过变性还原、变性非还原和非变性非还原3种条件下的免疫印迹(Western blot)试验对血清Ig的结构进行初步分析,发现SDS变性还原条件下血清Ig重链分子量为72 kD,轻链有3条,其分子量分别为21 kD、23.5 kD和26 kD;在变性非还原条件下血清Ig则出现多种结构形式,主要条带的分子量分别为760 kD、525 kD、330 kD和230 kD;而在非变性非还原条件下Ig仅出现一种结构形式,分子量约为870 kD. 相似文献
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斑点叉尾鮰血清免疫球蛋白纯化及其结构分析 总被引：2，自引：0，他引：2
通过饱和硫酸铵分步盐析结合柱层析纯化温和气单胞菌免疫的斑点叉尾鮰血清免疫球蛋白(Ig)，结果表明，斑点叉尾鮰血清Ig主要分布在35％～55％的硫酸铵沉淀区间；而在Sepharose-4B凝胶柱和DEAE-52阴离子交换柱层析纯化的Ig均出现在第1个蛋白质峰。SDS—PAGE分析表明，纯化后的血清Ig纯度提高。通过变性还原、变性非还原和非变性非还原3种条件下的免疫印迹(Westernblot)试验对血清Ig的结构进行初步分析，发现SDS变性还原条件下血清Ig重链分子量为72kD，轻链有3条，其分子量分别为21kD、23．5kD和26kD；在变性非还原条件下血清Ig则出现多种结构形式，主要条带的分子量分别为760kD、525kD、330kD和230kD；而在非变性非还原条件下Ig仅出现一种结构形式，分子量约为870kD。 相似文献
3.
[目的]探讨犬血清IgG的纯化方法。[方法]采用硫酸铵盐析法结合SephadexG-200凝胶柱层析提取纯化犬血清IgG,利用SDS-PAGE电泳和免疫印迹法鉴定所得产品的纯度和免疫活性。[结果]获得的纯化犬血清IgG的SDS-PAGE图谱中存在2条蛋白条带,表明获得了高纯度的犬血清IgG;重链分子量为58kD,轻链分子量为27kD,IgG分子量为170kD。特异性检测发现犬血清IgG重链和轻链都能与鼠抗犬血清IgG抗体结合,表明纯化犬血清IgG具有免疫原性和反应原性。[结论]硫酸铵盐析法结合SephadexG-200凝胶柱层析可获得纯度高、活性好的纯化犬血清IgG,为犬血清IgG相关的免疫学试验提供了高质量的免疫材料。 相似文献
4.
为了探索鸡分泌型免疫球蛋白A(SIgA)分离、纯化及鉴定方法,以新鲜的鸡胆汁为材料,采用硫酸铵盐析法从鸡胆汁中粗提纯鸡SIgA,应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定和纯化SIgA重链,用纯化的鸡SIgA重链蛋白免疫Balb/C小鼠。结果表明,SIgA重链分子量为67~70kD,轻链为26~28kD。免疫Balb/C小鼠抗血清针对SIgA重链的间接ELISA效价可达1∶16000。为进一步研究SIgA生物学特性、单克隆抗体制备和黏膜免疫状况检测提供了技术支持。 相似文献
5.
4个品系罗非鱼血清免疫球蛋白的分离纯化及分子量测定 总被引：1，自引：0，他引：1
利用A蛋白柱亲和层析法分离纯化了4个品系罗非鱼血清的免疫球蛋白(Ig)。优化的分离纯化条件为:进样量1.0mL血清,4℃结合3.5 h,流速1.3 mL/min。通过标准曲线法测定分离得到的免疫球蛋白最高浓度在1.87～2.95 mg/mL之间。绘制洗脱曲线,比较A蛋白柱亲和层析法分离纯化4个品系罗非鱼血清Ig的效果。SDS-PAGE电泳检测发现,4个品系罗非鱼血清Ig重链、轻链的分子量分别在80、30 ku左右。表明A蛋白柱亲和层析法可用于罗非鱼血清Ig的快速分离纯化。 相似文献
6.
为了获得敏感性和特异性高的TFL1多克隆抗体,本研究构建了GST-TFL1和His-TFL1原核表达载体并转入大肠杆菌表达菌株BL21中。经IPTG诱导和蛋白纯化,成功获得了分子量约为46kD的GST-TFL1和22kD的His-TFL1融合蛋白。利用纯化的融合蛋白His-TFL1作为抗原免疫,获得了TFL1的多克隆抗体血清。抗体血清经偶联了GST-TFL1融合蛋白的纯化基质进行免疫亲和纯化获得了纯化的TFL1多克隆抗体。免疫印迹检测抗体敏感性和特异性发现,纯化后的抗体不仅能特异地识别细菌内纯化的GST-TFL1和His-TFL1融合蛋白,也能与拟南芥中TFL1蛋白发生特异性反应。该研究结果为深入研究TFL1抑制植物开花的分子机制提供了有力的工具。 相似文献
7.
研究目的为制备E.wenyoni特异性诊断抗原及研制高效附红细胞体疫苗提供基础进行试验;方法从自然感染温氏附红细胞体(E.wenyoni)的牛血液中纯化附红细胞体后,采用SDS-PAGE和免疫印迹技术分析E.wenyoni抗原蛋白组分;结果SDS-PAGE结果显示,E.wenyoni全蛋白分子量范围为24kD￣150kD,主要的9种蛋白质分子量分别为141.34kD,107.27kD,86.03kD,68.05kD,56.21kD,44.30kD,32.99kD,28.89kD,24.59kD;免疫印迹筛选出3特异性蛋白质,分子量分别为147.31kD,49.03kD,35.72kD;结论E.wenyoni主要由九种类抗原蛋白组成,3种特异性蛋白质,可作为E.weny-oni特异性诊断抗原及附红细胞体疫苗的保护性抗原。 相似文献
8.
采用蛋白 A 亲和层析法对健康美洲黑石斑鱼血清中的免疫球蛋白(IgM)进行分离纯化。实验结果表明,蛋白 A亲和层析法一步纯化即可得到电泳纯IgM,其重链和轻链的分子量约 74.1 ku和26.0 ku。用纯化的黑石斑鱼IgM免疫实验兔,获得效价高达1∶128 000的兔抗黑石斑鱼IgM血清。Western-blot和间接ELISA 检测证明,本工作制备的兔抗美洲黑石斑鱼IgM血清具有较高的特异性,为后续的黑石斑鱼免疫学研究奠定了基础。 相似文献
9.
从人工接种感染黄矮病毒(Rice Yellow Stunt Virus,RYSV)的水稻茎杆中提取得到了部分纯化的RYSV制品,病毒制品经Tricine-SDS-PAGE得到分子量分别为84 kD,60 kD,31 kD和29.5 kD的4条主要蛋白带和分子量为170kD和43kD的两条次要蛋白带。根据弹状病毒结构蛋白命名法,按分子量大小依次命名为L,G,N,NS,M_1和M_2蛋白。从电泳凝胶上切下G和N蛋白带,制成抗原免疫BALB/C小鼠;制得G和N蛋白小鼠腹水抗体。经Dot-blot试验测得N蛋白抗体效价为1:1000,G蛋白抗体效价为1:400。 相似文献
10.
猪血免疫球蛋白G提取及分子量测定 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]纯化猪血免疫球蛋白IgG,并测定其轻链与重链的分子量。[方法]采用分步硫酸铵盐析法粗提猪血浆中的免疫球蛋白G,透析袋脱盐后用DEAE-SephadexAS0对IgG进行纯化,对纯化后的免疫球蛋白进行SDS-PAGE电泳,采用AlphaEaseFC凝胶分析软件对凝胶图像进行分析。[结果]3份样品中免疫球蛋白的浓度分别为2．712、2．679、2．489mg／ml;电泳后每泳道均出现2条蛋白带,说明所提免疫球蛋白的纯度较高;2条蛋白带分别为IgG的重链（H链）与轻链（L链）,与标准蛋白Marker进行比较可知,H链的分子量约为57KDa,L链的分子量约为26KDa。[结论]得到了高纯度的猪IgG,并进一步确定了IgG轻链与重链的分子量。 相似文献
11.
罗非鱼和斑点叉尾鮰血清IgM的纯化及兔抗血清的制备 总被引：1，自引：0，他引：1
为深入了解罗非鱼和斑点叉尾鮰免疫机理及建立相关免疫检测方法,采用rProtein A Sepharose亲和层析一步法纯化罗非鱼和斑点叉尾鮰血清免疫球蛋白（IgM）,并制备其兔抗血清.结果表明,rProtein A Sepharose亲和层析法可以较好地分离获得高纯度的罗非鱼和斑点叉尾鮰血清IgM,通过SDS-PAGE电泳检测,发现罗非鱼血清IgM重链和轻链分子量分别为88.0、21.0 kDa,斑点叉尾鮰血清IgM重链分子量为101.0 kDa.以纯化的罗非鱼和斑点叉尾鮰血清IgM为抗原,制备其兔抗血清,间接ELISA检测其效价分别为1∶32000和1∶16000;Western blotting检测分析,发现罗非鱼和斑点叉尾鮰的兔抗血清分别在88.0和101.0 kDa附近各出现1条反应条带,说明其兔抗血清具有免疫活性. 相似文献
12.
采用Protein A亲和层析法对鲫Carassius auratus血清中的IgM进行快速分离纯化,所得产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和免疫印迹（Western blotting）进行分析检测。结果表明：采用Protein A亲和层析法可以很好地分离到高纯度的鲫血清IgM,电泳条带中重链和轻链清晰可辨,重链、轻链的相对分子质量分别为85 000、25 000左右,无明显杂带;利用纯化的鲫血清IgM免疫小鼠,获得了高效价抗IgM抗血清,可以特异性识别鲫血清和黏液中IgM重链。应用间接ELISA方法对浸泡免疫后的鲫血清和皮肤黏液中抗体的动态进行检测,结果显示：鲫皮肤黏液中的抗体滴度在免疫后第6天达到峰值,血清中抗体滴度在免疫后第15天达到峰值,前者高峰期出现较早,但持续时间短,后者高峰期出现较晚,但持续时间较长。本试验中所建立的Protien A亲和层析法为鱼类抗体制备、病原检测及免疫学相关研究提供了一种便捷的方法。 相似文献
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欧洲鳗鲡免疫球蛋白阳性细胞的组织化学定位与分布特点 总被引：4，自引：3，他引：1
采用蛋白A亲和层析法分离纯化欧洲鳗鲡(Anguilla anguila,欧鳗)血清免疫球蛋白(Ig),制备其特异性兔抗血清,并运用免疫组织化学技术研究了嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染的试验组鳗鲡和未经感染的对照组鳗鲡脾脏、肾脏和肝脏Ig阳性(Ig )细胞定位与分布特点.结果表明:纯化后的Ig经SDS-PAGE检测含有分子质量约68 ku重链和26 ku轻链的2条清晰蛋白条带,由其制备的兔抗Ig血清效价达1:51 200.对照组欧鳗脾脏Ig 细胞数较少,肾脏相对较多,肝脏未发现.试验组欧鳗脾脏Ig 细胞数量明显比对照组增多,肾脏中有所增多但不明显,肝脏中未发现.在试验组和对照组中,黑色素巨噬细胞在脾脏和肾脏中均见明显聚集并与淋巴细胞形成黑色素巨噬细胞中心(melano-macrophage centres,MMCs),其中脾脏MMCs多数位于血管附近,脾脏Ig 细胞均主要分布在MMCs及其周边,且在试验组中数量多而密集,而肾脏Ig 细胞在对照组中明显分布于MMCs及其周边,但在试验组不明显.与对照组相比,试验组中脾脏和肾脏黑色素巨噬细胞数量和体积均有明显增多.试验结果说明欧鳗肾脏和脾脏是具有Ig 细胞的重要免疫器官,其中黑色素巨噬细胞数量和体积变化与免疫应答过程密切相关. 相似文献
14.
经硫酸铵盐析沉淀并经 DEAE_(32)—纤维素枉色谱分离粗制 IgM,再经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)进一步分离纯化鸡血清 IgM。然后用木瓜蛋白酶水解IgM,经 DEAE_(32)—纤维素柱色谱纯化 IgMFc 重链,再用 IgMFc 重链免疫家兔制取兔抗鸡 IgMFc 重链抗血清。 相似文献
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吴斌 《福建农林大学学报(自然科学版)》2017,46(2)
制备了"新吉富"罗非鱼血清免疫球蛋白IgM单克隆抗体(McAb)并进行了特性分析,以血清IgM McAb为基础,建立了IgM捕获ELISA检测方法.采用亲和层析法纯化健康"新吉富"罗非鱼IgM,纯化蛋白经SDS-PAGE检测,重链、轻链的相对分子质量分别为75~78、23~25 ku;以纯化的IgM为抗原制备IgM McAb,制备McAb杂交瘤细胞株系3株,分别命名为2H5、2D4、2B11,抗体亚型均为IgM,小鼠腹水效价分别为1.0×10~(-5)、1.0×10~(-4)、1.0×10~(-5),对IgM敏感度测定表明,2H5、2D4、2B11检测灵敏度分别为31.25、125.00、62.50 ng.以抗罗非鱼IgM McAb包被酶标板,建立IgM捕获ELISA检测方法.以无乳链球菌灭活疫苗免疫罗非鱼,受免血清按建立的IgM捕获ELISA方法检测特异性抗体,结果表明,建立的IgM捕获ELISA检测方法可应用于免疫应答抗体水平分析. 相似文献
16.
用山羊IgG注射欧洲鳗鲡背部肌肉后,采用山羊IgG-琼脂糖亲和层析柱对欧鳗血清免疫球蛋白（IgM）进行分离纯化,并通过SDS-PAGE电泳对纯化后的IgM进行检测,同时制备兔抗欧鳗IgM血清,运用间接ELISA检测正常欧鳗血清（第0天）以及山羊IgG注射欧鳗后第7、14、21、28、35、42天的血清抗体水平,同时利用荧光定量PCR测定了第0天至第28天的欧鳗肾脏、脾脏和鳃中IgM基因表达水平变化.结果表明：纯化后的欧鳗IgM经SDS-PAGE检测含有一条分子质量约68 ku的重链,以及分子质量分别为26 ku和28 ku的两条轻链,获得的兔抗欧鳗IgM血清效价达1/51 200;欧鳗血清抗体水平在第28天达到峰值,脾脏IgM基因表达水平在第14天达到峰值,肾脏和鳃均在第21天达到峰值,血清抗体水平以及三种组织器官IgM基因表达水平的变化规律均为先升高、达到峰值后再降低. 相似文献
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为了建立检测水产品中抗水霉药物甲霜灵残留的快速初筛方法,采用基于单克隆抗体技术的胶体金标记检测水产品中甲霜灵残留。甲霜灵单克隆抗体为IgG1,Kappa型;重链50 ku,轻链20 ku,分子质量约为150 ku;亲和力常数为2.46×109 L/mol;IC50为59.57 ng/mL。利用甲霜灵单克隆抗体作为金垫,甲霜灵-牛血清白蛋白偶联物及羊抗鼠IgG作为检测线与质控线,制备了甲霜灵胶体金免疫层析试纸条。测定结果显示:胶体金试纸条在甲霜灵质量浓度为5 mg/mL时可检出,与恩诺沙星、磺胺甲恶唑、氟苯尼考、呋喃唑酮、吡喹酮、强力霉素、孔雀石绿和亚甲基蓝等8种药物均无交叉反应。利用试纸条对草鱼(Ctenopharyngodon idella)、花蛤(Ruditapes philippinarum)、凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)等水产品样品进行测试,在草鱼、凡纳滨对虾样品最低检测限可达2 mg/kg,花蛤样品最低检测限可达1 mg/kg。利用高效液相色谱法验证试纸条检测甲霜灵残留,主要数据验证结果一致。基于单克隆抗体的胶体金免疫条快速、灵敏、特异性强,适合作为水产品组织中甲霜灵残留检测的初筛方法。 相似文献
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Min ZHANG Xueqian CHENG Dan CHU Jingwen LIANG Yi SUN Li MA Beilei XU Min ZHENG Meili WANG Liming REN Xiaoxiang HU Qingyong MENG Ran ZHANG Ying GUO Yunping DAI Robert AITKEN Ning LI Yaofeng ZHAO 《农业科学与工程前沿(英文版)》2014,1(2):158
In this study, we introduced the bovine immunoglobulin μ heavy-chain gene (the orphaned gene on BTA11) into mouse germline cells. Bovine IgM was highly expressed in selected transgenic lines, and it largely inhibited rearrangements of the endogenous immunoglobulin heavy chain (IgH) genes in these lines. The forced expression of bovine IgM resulted in reduced numbers of pro- and pre-B cells but increased the number of immature B cells in the transgenic mice. Bovine IgM-expressing B cells can migrate from the bone marrow to the spleen, but most of the cells are arrested at the T1 transitional B cell stage, leading to a significantly lower number of T2 transitional and mature B cells in the spleen. Although the serum concentrations of endogenous IgM and IgG in the transgenic mice were significantly decreased, the IgA levels were slightly increased compared to the WT mice. The bovine IgM level in the serum was only one-tenth to one-fifth of that of endogenous mouse IgM, suggesting that most of the serum immunoglobulin were contributed by endogenous IgH gene-expressing B cells. These transgenic mice also exhibited a lower frequency of unique complementarity determining region 3 (CDR3) sequences in their VH repertoire and Vκ repertoire but exhibited an increased frequency of unique CDR3 in their Vλ repertoire. Compared to the WT mice, the transgenic mice had a significantly higher percentage of mouse IgM-expressing B cells that expressed λ chains. Finally, we showed that the transgenic mice were deficient in a specific antibody response to antigen stimulation. 相似文献
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为研究猪肌生成抑制素(myostatin,MSTN)蛋白的功能及为制备此蛋白的单克隆抗体提供材料,将原核表达菌种MSTN-PGEX-4T-1-BL21进行融合表达,用亲和层析的方法对GST-MSTN和MSTN C-端成熟蛋白进行分离纯化。12%SDS-PAGE结果表明,纯化后的GST-MSTN在38 kD得到清晰目的带,薄层扫描分析显示,目的蛋白质纯度达86.1%。每升菌液提取约4.5 mg融合蛋白。15%SDS-PAGE结果表明,MSTN C-端成熟蛋白功能区在12 kD有明显条带出现。每升菌液提出约1.3 mg MSNT C-端成熟蛋白,占融合蛋白表达量的29%。 相似文献