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粘附素蛋白是金黄色葡萄球菌感染早期最重要的致病因子,研究根据金黄色葡萄球菌聚集因子A(clfa A)基因, 设计合成特异性引物,以国内奶牛乳腺炎临床分离株金黄色葡萄球菌基因组为PCR模板,进行clfa A基因的克隆,并连接入pMD18-T载体进行测序和序列分析,然后经BamHⅠ和XbaⅠ双酶切后构建真核表达载体并进行鉴定.结果表明,以金黄色葡萄球菌标准株为对照,国内分离株多数在990 bp处扩增到特异性条带,经测序鉴定,与Genebank发表的金黄色葡萄球菌clfa A序列同源性为99%;构建的真核表达质粒通过PCR和双酶切鉴定证明构建成功,为研究核酸疫苗奠定基础. 相似文献
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粘附素蛋白是金黄色葡萄球菌感染早期最重要的致病因子,研究根据金黄色葡萄球菌聚集因子A（c1fa A）基因,设计合成特异性引物,以国内奶牛乳腺炎临床分离株金黄色葡萄球菌基因组为PCR模板,进行c1fa A基因的克隆,并连接入pMD18-T载体进行测序和序列分析,然后经BamH I和Xba I双酶切后构建真核表达载体并进行鉴定。结果表明,以金黄色葡萄球菌标准株为对照,国内分离株多数在990bp处扩增到特异性条带,经测序鉴定,与Genebank发表的金黄色葡萄球菌c1fa A序列同源性为99％;构建的真核表达质粒通过PCR和双酶切鉴定证明构建成功,为研究核酸疫苗奠定基础。 相似文献
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为建立一种可准确、快速鉴定畜禽临床病例常见病原葡萄球菌和链球菌的双重PCR方法,本试验选取葡萄球菌的nuc基因和链球菌的EF-TU基因保守片段分别设计合成了1对特异性引物,构建可同时快速鉴别葡萄球菌和链球菌的双重PCR体系,并进行反应条件优化,筛选出最佳引物浓度和退火温度;应用该方法对其他73株革兰氏阳性临床分离细菌进行检测,评价该方法的特异性;将培养的葡萄球菌和链球菌倍比稀释计数后鉴定检测方法的敏感性;应用该检测方法对贵州省部分畜禽葡萄球菌和链球菌临床分离样本进行检测。结果显示,所建立的方法最佳引物添加量均为1μL,最佳退火温度为56℃;其他73株供试菌株检测结果均无扩增条带出现,所建双重PCR方法具有较好的特异性;敏感性试验结果显示,葡萄球菌和链球菌敏感度分别达1.50 ng/μL和1.44 pg/μL;临床样本复检结果显示,73株临床分离细菌中葡萄球菌40株(54.79%)、链球菌33株(45.21%),与传统细菌分离鉴定方法的符合率为97.26%。本试验建立了一种特异、敏感和快速鉴定贵州省畜禽葡萄球菌和链球菌病原的双重PCR方法,为临床病例快速诊断及流行病学调查提供了有效技术。 相似文献
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为建立一种可准确、快速鉴定畜禽临床病例常见病原葡萄球菌和链球菌的双重PCR方法,本试验选取葡萄球菌的nuc基因和链球菌的EF-TU基因保守片段分别设计合成了1对特异性引物,构建可同时快速鉴别葡萄球菌和链球菌的双重PCR体系,并进行反应条件优化,筛选出最佳引物浓度和退火温度;应用该方法对其他73株革兰氏阳性临床分离细菌进行检测,评价该方法的特异性;将培养的葡萄球菌和链球菌倍比稀释计数后鉴定检测方法的敏感性;应用该检测方法对贵州省部分畜禽葡萄球菌和链球菌临床分离样本进行检测。结果显示,所建立的方法最佳引物添加量均为1μL,最佳退火温度为56℃;其他73株供试菌株检测结果均无扩增条带出现,所建双重PCR方法具有较好的特异性;敏感性试验结果显示,葡萄球菌和链球菌敏感度分别达1.50 ng/μL和1.44 pg/μL;临床样本复检结果显示,73株临床分离细菌中葡萄球菌40株(54.79%)、链球菌33株(45.21%),与传统细菌分离鉴定方法的符合率为97.26%。本试验建立了一种特异、敏感和快速鉴定贵州省畜禽葡萄球菌和链球菌病原的双重PCR方法,为临床病例快速诊断及流行病学调查提供了有效技术。 相似文献
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金黄色葡萄球菌α-溶血素基因的克隆与序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
参考Gary S Gray和Michael Kehce在《传染与免疫》杂志上发表的关于金黄色葡萄球菌α溶血素蛋白的基因序列,设计合成1对引物,从分离自牛体的野生株金黄色葡萄球菌中提取细菌总DNA,对α溶血素蛋白基因进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳分析,呈现1条约960 bp的条带,回收纯化后,将其克隆至pMD18 T质粒载体中,进行核苷酸序列分析,然后与报道的α溶血素蛋白基因进行比较。结果表明:所鉴定的野生株金黄色葡萄球菌的α溶血素蛋白基因序列与报道的核苷酸的同源性高达99.99%以上,证实为金黄色葡萄球菌Wood 46株α溶血素蛋白基因。 相似文献
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根据GenBank已发表的猪葡萄球菌的6种脱落毒素基因序列,设计合成了6对相应的特异性引物,通过特异性、敏感性和重复性试验建立了可行的多重PCR检测方法。用该方法对临床分离到的9株猪葡萄球菌进行检测,均扩增出了与预期大小相符的23SrDNA（662bp）条带;同时,其中6株分别扩增出了EXHA（316bp,2株）、EXHC（525bp,2株）和Shet-A（814bp,2株）基因特异性条带;另外3株均未扩增出任何毒素基因特异性条带,鉴定为无毒力菌株,以上结果与生化鉴定及单一PCR检测测序结果一致。结果表明,本试验所建立的多重PCR方法不仅操作快速方便、节约试验成本,而且具有高度特异性、敏感性和良好的重复性,可用于仔猪渗出性皮炎的诊断和猪葡萄球菌的快速鉴定。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2017,(10)
为建立一种快速、准确检测黄颡鱼源维氏气单胞菌(A.veronii)的方法,本研究根据A.veronii菌株RC110724黏附素基因(Aha)和促旋酶B亚单位基因(gyrB)序列设计引物,经条件优化建立了A.veronii的双重PCR检测方法。结果显示该方法可以同时扩增出A.veronii 419 bp和745 bp两条特异性的片段,而对嗜水气单胞菌、迟缓爱德华菌、副溶血性弧菌、麦氏弧菌、荧光假单胞菌、金黄色葡萄球菌、柱状黄杆菌、肺炎克雷伯氏菌、无乳链球菌、舒伯特气单胞菌扩增结果为阴性;该方法对A.veronii标准株ATCC35624和RC110724基因组DNA和菌体检测下限分别为6.6×10~(-3)ng/μL和3.2×10~2cfu/mL。利用建立的双重PCR方法对30份临床样品进行检测,结果与细菌传统分离鉴定符合率为100%。同时,双重PCR可以检出菌株RC110724人工感染的黄颡鱼肝、脾和肾组织中的细菌DNA,对肝和脾脏组织的样品检测效果最好。本研究建立的双重PCR检测方法特异性好,具有较高的检测灵敏性,可用于黄颡鱼等A.veronii感染病例的快速诊断和流行病学监测。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2020,(12)
为了了解重庆市荣昌区、永川区和巴南区奶牛乳房炎葡萄球菌的种类和生物膜相关基因的流行现状,试验对从重庆市荣昌区、永川区和巴南区18个奶牛养殖场分离得到的127株葡萄球菌采用全自动生化鉴定和葡萄球菌特异性基因dnaJ扩增及测序分析法进行葡萄球菌种的鉴定,并采用多重PCR扩增法进行毒力基因检测。结果表明:从127株葡萄球菌中鉴定出20种葡萄球菌,其中表皮葡萄球菌占18.90%,溶血葡萄球菌占12.60%,阿尔莱特葡萄球菌占11.81%,金黄色葡萄球菌占3.15%;采用多重PCR方法检测127株葡萄球菌的eno、clfB和fib等14个毒力基因,其中eno基因检出率高达40.16%,clfB基因检出率高达18.11%,未检测到icaB和icaC基因。说明引起本地区奶牛乳房炎流行的葡萄球菌以凝固酶阴性葡萄球菌为主,而非金黄色葡萄球菌,应加强对表皮葡萄球菌等凝固酶阴性葡萄球菌的临床防控。 相似文献
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金黄色葡萄球菌和大肠杆菌是引起奶牛乳房炎的主要病原菌。选取金黄色葡萄球菌的Nuc基因和大肠杆菌16S-23SrRNA基因作为扩增靶基因序列,设计两对特异性引物。通过正交试验优化反应条件建立二重PCR检测体系,优化结果表明二重PCR扩增出两条特异性条带,大小与实验设计的249bp(金黄色葡萄球菌)和375bp(大肠杆菌)相符,而对其它奶牛乳房炎主要病原菌的PCR扩增结果均为阴性;敏感性测定结果表明,该二重PCR技术能同时检出14.6pg的金黄色葡萄球菌模板和26.0pg的大肠杆菌模板。使用该二重PCR检测29份临床奶样,发现其中17份携带相关基因,并分离得到相关致病菌。 相似文献
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对发酵产业稍有了解的人都知道,影响发酵企业成败有三个外部条件:一是原料供应情况,主要是大米、甜菜、糖蜜和玉米淀粉等农副产品的可供数量、质量及成本,因为原料占成本的比例在50%以上;二是能源供应情况,主要是电力和煤炭保障能力及成本,因为发酵企业一般耗能较大;三是气候环境,主要是温度及湿度,因为高温潮湿下菌群易受感染,冷却耗能增加. 相似文献