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1.
为筛选有开发价值的抗结核中草药,本研究通过MABA(Microdilution MABA Assay)与试管法分别测定蛇床子素和8-甲氧基补骨脂素对结核分支杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的体外抗菌活性,即最低抑菌浓度(MIC),同时比较两种方法的检测结果;并以MTT法研究蛇床子素和8-甲氧基补骨脂素对Balb/C小鼠的脾细胞和肝细胞的细胞毒性试验。蛇床子素和8-甲氧基补骨脂素对这两种结核菌的最低抑菌浓度分别均为32μg/mL和128μg/mL,并且对BALB/c小鼠的脾细胞和肝细胞均无毒性。MABA法与试管法相比较,完全符合率为90%(9/11),具有较好的一致性。本研究为蛇床子素和8-甲氧基补骨脂素作为抗结核药物的开发及它们的抗菌机制研究奠定了基础。 相似文献
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选取传统中药提取单体化合物α-倒捻子素和8-甲氧基补骨脂素,通过2种药物敏感性实验方法MABA(Microdilution Alamar Blue Assay)分析与试管法分别测定了两种化合物对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的体外抗菌活性,同时还测定了9种阳性抗结核药物对这两种结核菌的最低抑菌浓度(MIC),比较2种方法的检测结果。结果表明:α-倒捻子素对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的最低抑菌浓度均为6.25μg/mL,而8-甲氧基补骨脂素对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的最低抑菌浓度均为128μg/mL。Alamar B1ue法与试管法相比较,完全符合率是90%(9/11),具有较好的一致性。本研究结果表明Mamar B1ue法是一种快速、简便测定药物对结核分枝杆菌MIC的方法。本研究为α-倒捻子素和8-甲氧基补骨脂素的进一步开发利用和抗分枝杆菌机制研究打下了基础。 相似文献
3.
中药单体化合物光甘草定的体外抗菌活性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
选取传统中药甘草提取单体化合物光甘草定,通过MABA药物敏感性实验方法研究其对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)的体外抗菌活性,并通过NCCLS标准方法测定了光甘草定对金黄色葡萄球菌ATCC25923和ATCC29213、粪肠球菌ATCC29212和大肠杆菌ATCC25922的最低抑菌浓度(MIC)。结果表明:单体化合物光甘草定对结核分枝杆菌H37Rv(ATCC27294)和H37Ra(ATCC25177)有很好的抗菌活性,最低抑菌浓度均为25μg/m;光甘草定对实验中检测的金黄色葡萄球菌、粪肠球菌和大肠杆菌也有抗菌活性,并且对革兰氏阳性杆菌的抗菌活性高于革兰氏阴性杆菌。本研究为光甘草定的进一步开发利用和抗菌机制研究打下了基础。 相似文献
4.
《中国兽医学报》2018,(11)
BSN-37是从牛脾脏分离鉴定的含有37个氨基酸的新抗菌肽。为了阐明该抗菌肽的生物活性,本试验检测了其对大肠杆菌(ATCC25922)、鸡白痢沙门菌(BNCC124693)、金黄葡萄球菌(ATCC25923)、白色念珠菌(ATCC90029)及5株临床大肠杆菌和7株临床鼠伤寒沙门菌的最低抑菌浓度(MICs);同时,测定其对兔血红细胞悬液的溶血性和对Vero细胞、小鼠腹腔巨噬细胞(RAW264.7)和鸡成纤维细胞(CEF)的细胞毒性。结果表明,BSN-37对大肠杆菌ATCC25922、鸡白痢沙门菌(BNCC124693)MICs值分别为33.33和25.00mg/L;对所检测的临床耐药大肠杆菌(卡那霉素MICs≥320.00mg/L)和鼠伤寒沙门菌的MICs值均低于50.00mg/L;对金黄葡萄球菌和白色念珠菌的MICs值均大于100.00mg/L。400mg/L的BSN-37与兔血红细胞体外37℃恒温孵育1h后,红细胞溶血率仅为1.34%;50mg/L的BSN-37与RAW264.7细胞作用后,细胞存活率为96.3%,当BSN-37质量浓度为100,200和400mg/L时,ERO、RAW264.7和CEF 3种细胞的存活率均大于100.00%。以上结果证实,BSN-37对革兰阴性肠道菌有较强抑菌活性,溶血性很低且无细胞毒性,具有良好的临床药物开发前景。 相似文献
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抑制鹿源多药耐药结核菌中药的筛选 总被引：1，自引：0，他引：1
为了筛选对鹿源多药耐药结核菌有效的中药耐药抑制剂,通过MABA法检测24种中药的水和乙醇提取物对多药耐药结核菌及标准菌H37Rv的体外抗菌效果,将筛选出的抗菌效果好的黄连醇提物和黄连水提物采用紫外分光光度法进行活性成分含量测定,同时以MABA法与标准品比较体外抗结核菌活性。结果显示,黄连、独活和侧柏叶有明显的抗结核活性,其中黄连水粗提物和乙醇粗提物效果最佳,测得它们活性成分即总生物碱含量分别为22.74%和35.23%,并显示二者与小檗碱的体外抗结核作用相同。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2015,(15)
为了研究齐墩果酸和熊果酸对成骨细胞作用机制,试验以MC3T3-E1细胞为模型,采用一定浓度的齐墩果酸(或熊果酸)、雌激素受体(ER)、蛋白激酶C(PKC)和核因子κB(NF-κB)通路抑制剂(ICI 182780、RO 318220和PDTC)及齐墩果酸(或熊果酸)加抑制剂的混合药液作用细胞72 h后,用CCK-8法和ELISA法检测细胞活性及细胞上清液中骨保护素(OPG)蛋白水平。结果表明:与对照组相比,齐墩果酸(或熊果酸)组和齐墩果酸(或熊果酸)+PDTC混合组细胞活性显著上升,齐墩果酸(或熊果酸)+ICI 182780混合组、齐墩果酸(或熊果酸)+RO 318220混合组和三种抑制剂组细胞活性显著下降,PDTC组细胞活性无显著变化。齐墩果酸(或熊果酸)组的OPG蛋白水平显著上升,三种抑制剂组的OPG蛋白水平均显著下降,齐墩果酸(或熊果酸)+三种抑制剂混合组的OPG蛋白水平显著下降;而且ICI 182780与熊果酸联合使用会显著下调OPG蛋白分泌水平。说明齐墩果酸和熊果酸可通过ER和PKC通路发挥促MC3T3-E1细胞增殖的作用,通过ER、PKC和NF-κB通路发挥细胞OPG蛋白表达的作用。 相似文献
8.
为探究大环内酯类药物替米考星对胞内金黄色葡萄球菌的抗菌活性,本试验以金黄色葡萄球菌ATCC 29213为靶细菌,以小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)为载体细胞,构建金黄色葡萄球菌胞内感染体系,绘制胞内金黄色葡萄球菌的生长曲线,测定替米考星对胞内金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度、最低杀菌浓度、防突变浓度、耐药突变选择窗、抗菌后效应和杀菌曲线。结果显示,胞内金黄色葡萄球菌在0～4、4～18、18～24和24～48 h分别处于迟缓期、对数期、稳定期和衰亡期。最低抑菌浓度、最低杀菌浓度、防突变浓度和耐药突变选择窗分别为4、8、12.8和4～12.8μg/mL。抗菌后效应和杀菌曲线结果显示,替米考星对胞内金黄色葡萄球菌的杀菌特点表现出明显的时间依赖性。结果表明,替米考星对胞内金黄色葡萄球菌表现出较强的抗菌活性,可为治疗由胞内金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳腺炎制定合理给药方案提供参考依据。 相似文献
9.
抗新城疫病毒糖蛋白单克隆抗体的研制及在免疫组化中的应用 总被引：1，自引：0，他引：1
应用纯化的新城疫病毒(NDV)La Sota野毒株免疫Balb/c小鼠,最后一次免疫后3 d取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选到3株分泌抗NDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,对各株单克隆抗体免疫球蛋白亚类及ELISA效价进行测定.结合单克隆抗体反应结果,鉴定出抗NDV NP蛋白的单克隆抗体,利用该单克隆抗体s3e1做免疫组化试验,用rLa Sota(重组La Sota第2代毒株)免疫2日龄雏鸡,接种后第5天检测到肝脏的部分肝细胞呈阳性反应. 相似文献
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牛分枝杆菌特异性PCR检测方法的建立及初步应用 总被引：12，自引：0，他引：12
根据已发表的牛分枝杆菌的pncA的基因序列，设计和合成了一对可扩增294bp目的片段的引物，建立了特异性检测牛分枝杆菌的PCR方法。对牛分枝杆菌国际参考株和国内分离株成功扩增出294bp的特异性基因片段；对人结核分枝杆菌、副结核分枝杆菌、鸟胞内分枝杆菌和草分枝杆菌DNA的PCR扩增结果均为阴性。本PCR方法检测的敏感度可达到50pg。对10份牛分枝杆菌培养阳性和10份阴性样品的DNA分别进行了PCR检测，结果10份阳性样品中有9份样品为PCR扩增阳性，阳性符合率为90％（9／10）；而10份阴性样品则PCR扩增全部为阴性，阴性符合率为100％（10／10）。本方法可做为牛分枝杆菌的快速检测和流行病学调查的工具。 相似文献
12.
结核分支杆菌分子量为65ku的热应激蛋白(HSP65)是一种非常重要的抗原，为了研制结核病核酸疫苗，构建编码HSP65DNA，并将其分别克隆到原核和真核载体中进行了表达。以标准结核分支杆菌H37Rv基因组DNA为模板，用PCR法扩增出HSP65基因，经限制性内切酶消化后，插入真核表达栽体pJW4303中，获得重组质粒pJW-HSP65。同时将HSP65基因插入原核表达栽体pET-22b( )，获得重组质粒pET22b-HSP65。将pET22b-HSP65重组质粒转化大肠杆菌蛋白酶缺陷型菌株BL21(DE3)／PolysS，用IPTG诱导，进行蛋白表达。结果表明，经酶切鉴定和序列测定证实插入片断为目的基因HSP65，构建成功了真核重组质粒pJW-HSP65即可作为结核病DNA疫苗。经SDS-PAGE检验证明可以在大肠杆菌细胞中高效表达，将表达蛋白进行纯化，作为保护性结核杆菌抗原以便检测HSP65DNA疫苗的免疫效果。 相似文献
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Vaccination has been identified as a promising control strategy for tuberculosis in both humans and cattle. Recent heterologous prime-boost approaches combining BCG vaccination with subunit boosts have shown considerable promise in both fields. However, the identification of further protective antigens is still a research priority. In this paper we have established the response hierarchy in Mycobacterium bovis infected or BCG vaccinated cattle of 6 Mycobacterium tuberculosis-derived proteins that were protective against M. tuberculosis in the guinea pig aerosol challenge model. Two of these proteins, Rv1806 and Rv3812, were recognised most frequently in cattle and therefore constitute potential subunit vaccine candidates that merit further evaluation in cattle. Their epitopes were mapped in infected cattle and were shown to be located primarily in the non-conserved regions of these PE/PE-PGRS protein family members. The aim of this study was to ascertain the presence of any correlation between the immunogenicity of defined antigens in different animal species. A weak association between guinea pig immunogenicity (as measured by protection) and antigenicity in M. bovis infected or BCG vaccinated cattle was found. 相似文献
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为获得新的鉴别诊断结核杆菌感染的候选抗原,根据Gene Bank中登录的结核杆菌H37Rv的TB 9.7基因序列设计1对引物,以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增得到TB 9.7基因DNA片段。将该扩增片段克隆于PMD18-T载体中,得到载体PMD18-T-TB9.7。分别将pET32a质粒和PMD18-T-TB 9.7质粒用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,并将纯化的TB 9.7基因亚克隆至pET32a中,获得重组表达质粒pET32a-TB 9.7。将其转化E.coli BL21 IPTG诱导后,经SDS-PAGE、Western blot分析鉴定,可见约30ku的外源蛋白带。表明TB9.7基因在大肠杆菌中得到了表达。用Ni-NTA Agarose试剂盒进行蛋白纯化,获得纯化的TB9.7融合蛋白,建立间接ELISA诊断方法,检测了30份结核病人的痰检阳性血清,120份健康人的血清,敏感性为56.6%,特异性为97%,与痰检结果的符合率为84%。 相似文献
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低分子质量蛋白抗原Mtb8.4是一种非常重要的结核分支杆菌抗原,为了研制结核病核酸疫苗和进行结核病的诊断,分别将其构建到原核和真核载体中进行表达。以结核分支杆菌标准菌株H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增目的基因Mtb8.4,扩增产物酶切后分别克隆到真核表达载体pJW4303和原核表达载体pGEX-4T-1中,构成重组真核表达载体pJW-Mtb8.4和重组原核表达载体pGEX-Mtb8.4,用限制性内切酶消化,PCR扩增及DNA序列分析等多种方法鉴定;并将正确构建的原核表达载体转入E.coliBL21(DE3)plysS中,IPTG诱导表达。结果表明,重组真核表达载体pJW-Mtb8.4和重组原核表达载体pGEX-Mtb8.4构建成功。构建的真核重组质粒pJW-Mtb8.4即可作为结核病DNA疫苗。原核表达载体pGEX-Mtb8.4在BL21(DE3)plysS中成功表达,将表达蛋白进行纯化,作为保护性结核分支杆菌抗原以便检测DNA疫苗的免疫效果。 相似文献
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Latent tuberculosis infection (LTBI) constitutes the main reservoir for reactivation tuberculosis. The finding of potential biomarkers for differentiating between TB and LTBI is very necessary. In this study, the immunological characteristics and potential diagnostic utility of Rv2029c, Rv2628 and Rv1813c proteins were assessed. These three proteins stimulated PBMCs from ELISPOT-positive LTBI subjects produced higher levels of IFN-γ in comparison with TB patients and ELISPOT-negative healthy subjects (p < 0.05). BCG vaccination and non-TB respiratory disease had little influence on the immunological responses of Rv2029c and Rv2628 proteins (p > 0.05). The LTBI diagnostic performance of Rv2029c was higher than Rv2628 and Rv1813c by ROC evaluation. But Rv2628 had much higher specificity than Rv2029c in active TB patients and uninfected healthy subjects. The IgG level against Rv1813c was higher in the TB group than in LTBI and uninfected healthy subjects (p < 0.05). These results suggest that T cell response to Rv2628 and antibody against Rv1813c might be applicable as biomarkers to distinguish TB from LTBI and uninfected individuals. 相似文献