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1.
用6～7日龄奶牛胚胎进行超低温冷冻保存试验。有10个胚胎在1.5MDMSO中以1℃/分从室温降到-7℃,诱发结晶后,以0.3℃/分降温到-60℃,然后放入液氮内保存373～375天。解冻时从液氮取出,以4℃/分的速率(-50℃到-10℃)升温到-10℃,直接放入20℃水中。除去DMSO后,有5个形态正常。把8个(其中3个异常)移给4头受体后,有2头妊娠,1头生下1对双胎(1母1公),另1头产1母犊。试验比较了不同冷冻保护剂和不同方法冷冻保存奶牛胚胎后的结果。40个胚胎在1.5M DMSO中用缓慢冷冻—解冻方法冷冻保存2-375天后,有17个形态正常(42.50％)。把20个胚胎移给13头受体,有2头妊娠(15.38％),63个胚胎在1.0M甘油中用快速冷冻—解冻方法冷冻保存1-297天后,找回的57个中有30个形态正常(52.63％)。把29个胚胎移给22头受体没有1头受孕。试验表明,奶牛胚胎在1.5M DMSO中用缓慢冷冻—解冻方法冷冻保存1年后仍然存活。解冻后正常胚胎的百分率和在1.0M甘油中用快速冷冻—解冻方法冷冻保存的胚胎解冻后的正常胚胎百分率没有显著差异。但后一种冷冻方法冷冻的胚胎移植后没有成功。应再进一步试验研究。 相似文献
2.
家兔胚胎的快速冷冻与解冻 总被引：1，自引：0，他引：1
将2～3日龄的兔胚,在1.5M—DMSO的PB1溶液中,用快速法冷冻。胚胎在液氮(-196℃)内保存23～106天。快速解冻后,经鉴定216个胚胎中,形态正常的有129个(占59.7％)。把102个胚胎移植给9头受体兔,有7只妊娠,生出27只小兔。受体妊娠率为77.7％,产仔率为26.4％。还在体外培养了73个胚胎,1～2天后,有32个(43.8％)发育到囊胚期。将26个解冻后培养到囊胚期的胚胎移植给2只受体,有1只生出6只小兔。试验表明,快速冷冻的胚胎在液氮中保存106天,快速解冻后仍有活力,而且桑椹期的胚胎比8～16细胞期胚胎更抗冻。 相似文献
3.
哺乳动物胚胎冷冻技术自建立以来,已进行了一些重大改进。其主要进展有: 1.缩短冷冻时间:提高慢速(0.3℃/分钟)降温操作的中止温度,至到较高的零下温度(-30～-40℃)或者快速降温,降到一定低温便保持此温度一段时间(两步冷冻法)。这样做虽然时间缩短了,但胚胎仍含有水分,这些水分在胚胎投入液氮的急剧降温过程中,便形成小冰晶或者不太稳定的玻璃态。因此,需快速解冻,以防止升温过程中形成有损于胚胎的冰晶。 2.缩短解冻后脱除低温保护剂时间:用非渗透剂(蔗糖)一步稀释,以避免保护剂脱出后胚胎发生渗透性膨胀。 3.玻璃化冷冻法(Vitrification):这是前不久研究出的一种新冷冻方法。其设计根据是,保护剂的稀释液在急剧降温到很低温度时,能被浓缩,而不会形成冰晶。作者已试验成功用两种浓度的低温保护剂,作为胚胎内液(10％甘油和20％丙二醇混合液)和外液(25％甘油和25％丙二醇混合液),且均能达到玻璃化。用此法冷冻的小鼠和牛的晚期桑葚胚已移植成功并产仔。 相似文献
4.
牛胚胎两步冷冻 总被引：1，自引：0，他引：1
8枚61/2～71/2日龄黑白花奶牛胚胎,采用两步冷冻和细管包装法进行了冷冻。同时配合使用甘油抗冻剂,即以1℃/分钟的速度由室温降至-5℃;在-5℃下诱发结晶并在投入液氮前以0.3℃/分钟的速度降温至-36℃。胚胎在液氮中贮存4天～7个月后,直接在17℃温水中解冻。除去甘油后,用评定胚胎形态的方法进行胚胎存活的鉴定,6枚形态评为优和良的胚胎,用凯苏式输卵器非手术分别移入6头同期受体母牛。其中2头妊娠,1头妊娠母牛在孕后第四个月流产,另1头于1983年元月26日产1公犊,犊牛初生重为45公斤。试验结果证明,采用两步冷冻法冷冻的牛胚胎移植后可以成活。 相似文献
5.
猪冷冻（—20℃）胚胎在我国移植成功 总被引：5，自引：0，他引：5
实验Ⅰ将129枚猪胚胎,用于冷冻-解冻-体外培养研究。以含有1.5M甘油的PBS液为冷冻液,以1℃/分的速率从35℃降至-7℃,在-7℃自动诱发给冰,然后以0.3℃/分的速率降至-35℃,再以0.1℃/分的速率降至-36℃,立即投入液氮(-196℃);胚胎解冻在37℃水浴中进行、分步脱出甘油后以改进的mBMOC-Ⅱ为培养液进行体外培养。结果,囊胚、扩张囊胚、刚孵出囊胚和孵化出后期囊胚、解冻后体外培养存活率分别为0％(0 /2)、64％(16/25)、0％(0/9)。在液氮中(-196℃)保存80～103天,扩张囊胚、刚孵出囊胚和孵出后期囊胚解冻后,体外培养存活率分别为41.6％(5/12)、63.7％(7/11)和0％(0/70)。结果表明,在液氮温度(-196℃)保存下,刚孵出囊胚有较高的耐冻性和存活能力。实验Ⅱ进行猪冷冻胚胎解冻后体内发育能力研究。96枚扩张囊胚和刚孵出囊胚,分批冷冻和保存在-20℃、-35℃和-196℃。解冻后移植3头受体,其中2头返情,1头妊娠并于1990年7月31日产仔2头,公母各1头,初生重均为1.35kg,妊娠期为116夭。该结果为我国首例猪冷冻(-20℃)胚胎移植成功,并为今后开展猪胚胎超低温(-196℃)冷冻保存技术研究奠定了基础。 相似文献
6.
绵羊冷冻胚胎移植成功 总被引：3，自引：0，他引：3
以成年寒羊母羊做供、受体。使用 FSH(300单位)和 LH(150单位),进行供体超数排卵,并在发情周期的第6～8天(发情开始当天=0天)用杜氏磷酸盐缓冲液(PBS)+5%失活犊牛血清,冲洗子宫角手术采卵。只有形态正常的胚胎用于冷冻。胚胎冻前分6步(0.25M、0.5M、0.75M、1.0M、1.25M 和1.5M,每种浓度停留7～10分钟)添加抗冻剂(DMSO)。解冻后也分6步(1.5M、1.25M、1.0M、0.75M 和0.25M,每种浓度停留10分钟)除去 PBS 液中的 DMSO。胚胎在盛有0.25～0.3毫升 PBS 液(Whitting-ham,1971)的安瓿(容量1.0毫升)中冷冻,PBS 液含1.5M 的 DMSO。自1979年8月24日至12月27日,胚胎的冷冻和移植试验分三批进行。第一批胚胎是按 Willadsen(1976)冷冻羊胚胎的方法冷冻的,并降温至-120℃时将安瓿移入液氮。安瓶从-80℃--5℃,以12℃/分钟的速度解冻,从-5℃放入手中快速升温解冻。第二和第三批,胚胎是按 Willadsen(1978)所述及的牛胚胎冷冻和解冻方法进行的,并降温至-60℃将安瓿直接投入液氮。将安瓶放入-50℃的酒精浴中,以4℃/分钟的速度解冻至-10℃。从-10℃将安瓿放入手中快速解冻。第三批试验的受体根据母羊的健康和繁殖情况进行了挑选。共49个胚胎(47个形态正常的和2个形态异常的)移入23只受体,4只母羊妊娠。其中一只受体早产,羔羊死亡;一只受体母羊产了3只羊羔,共产了五只羊羔。三批试验的受体妊娠率和胚胎成活率分别如下:0%(0/8)、0%(0/18)、11.1%(1/9)、6.2%(1/16)和50%(3/6)、33.3%(5/15)。 相似文献
7.
山羊胚胎简易冷冻试验 总被引：3，自引：0，他引：3
用RPE冷冻器冷冻20枚山羊桑椹胚和囊胚。冷冻液为1M甘油杜氏磷酸盐缓冲液(PBS)。胚胎装于0.25ml塑料细管内,0℃时置入冷冻器。以1℃/分降温,-6.5～-7℃诱发结晶,再以0.5℃/分(0.3～0.8℃/分)降温至-30℃,然后投入液氮保存5～12天。35℃水浴解冻。20枚胚胎冻后形态正常率为65％(13/20)。将13枝形态基本正常的胚胎移植给5只受体羊,结果4只受体羊妊娠,产羔7只,冻胚存活率为35％(7/20)。除1只冻胚羔产下后90分钟死亡外,另6只冻胚羔生长发育正常。 相似文献
8.
为了研究山羊胚胎冷冻贮藏的快速方法,以二甲亚砜(DMSO)和甘油作为防冻剂采用两步法将80个16-细胞胚进行冷冻。在液氮中贮存30天,并以50℃/分进行融解。将在 DMSO中冷冻的41个胚胎和在甘油中冷冻的20个胚胎 相似文献
9.
<正> 徐州市家畜良种站兔胚胎移植研究小组,在取得鲜胚移植成功的基础上,又开展了兔胚冷冻的研究。1988年3月该实验组用自制简易胚胎冷冻仪,用Tc-199作培养液,甘油作胚胎冷冻保护剂,冷冻速度保持每 相似文献
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为了探讨新西兰兔精液超低温冷冻保存的最佳方法,试验采集新西兰成年公兔精液,采用0.25 mL细管冷冻法进行超低温冷冻,以解冻后精液活率、质膜完整性、顶体完整率为指标,研究距离液氮面不同高度和冷冻保护剂种类对冷冻保存兔精液品质的影响。结果表明:冷冻精液距离液氮面3 cm,其精液活率、质膜完整性和顶体完整率明显优于1 cm和5 cm;在冷冻稀释液中添加甘油相对于其他冷冻保护剂对精液品质的保护效果好,甘油浓度为3%时相对其他浓度效果较好。说明了距液氮面3 cm冷冻,冷冻稀释液中添加3%甘油对兔精液的保存效果较好。 相似文献
11.
牛体外受精胚胎一步脱防冻剂冷冻方法的研究 总被引：7，自引：1，他引：7
为了研究适合于牛体外受精胚胎的一步除防冻剂的冷冻方法，特进行两个试验。试验１分别用１．５Ｍ甘油＋０．２５Ｍ蔗糖、１．５Ｍ乙二醇和１．５Ｍ丙二醇作防冻剂冷冻体外受精后第７天，已发育至囊胚阶段的牛胚胎。使胚胎降温至－７℃后，植冰，然后以０．３℃／分的速率降温至－３０℃，立即将胚胎投入液氮中冷冻保存。在３７℃水中解冻胚胎后，使其直接在含１５％胎犊血清（ＦＣＳ）的磷酸缓冲液（ＰＢＳ）中脱去防冻剂。经体外培养７２ｈ后，３组胚胎的孵化率分别为７７．２７％（１０２／１３２）、７３．２４％（１０４／１４２）、４７．９０％（５７／１１９），第１、２组的孵化率极显著高于第３组（Ｐ＜０．０１），说明用１．５Ｍ丙二醇溶液冷冻的胚胎，在解冻后不宜直接在ＰＢＳ中脱防冻剂。试验２比较用不同浓度（１．０Ｍ０１．５Ｍ，２．０Ｍ）的乙二醇和不同投液氮温度（－２５℃，－３０℃，－３５℃）冷冻胚胎的效果。结果表明乙二醇浓度和投液氮温度对胚胎孵化率均无显著影响（Ｐ＞０．０５），各组胚胎的孵化率变动于７４．４４％－８５．４８％之间。 相似文献
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牛体外受精胚胎冷冻与解冻孵化试验报告 总被引：3，自引：0，他引：3
用添加 5 %犊牛血清 (FCS)的HEPES缓冲TCM 199,用共培养法获得牛体外受精胚胎。冷冻保护液组成为 :18%FCS、72 %PBS、10 %( 1.4mol)甘油、0 .1g/ml蔗糖。冷冻程序为 :①从 -7℃开始冷冻 10分钟 ,第二分钟植冰 ;② 0 .5℃ /分缓慢冷冻 3 2分钟至-2 3℃ ;③最后以 -2 3℃冷冻 10分钟后投入液氮。冷冻保存 6h～5d的胚胎解冻存活率为 90 .0 %;用 2 0 %FCS +80 %HamF1 0 孵化2 4、48h存活率分别为 77.8%、5 1.9% 相似文献
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在25℃室温和37℃恒温台条件下，利用玻璃化冷冻溶液EFS30、EFS40、EDFS30或EDFS40，对小鼠4-细胞胚胎进行玻璃化冷冻保存．以解冻后培养72h的囊胚发育率为其体外发育能力的考核指标，同时对解冻后培养1～3h的胚胎进行移植以判定其体内发育潜力。开放式拉长塑料细管（OPS）二步法冷冻保存，即胚胎首先移入预处理液（10％EG或10％EG＋10％DMSO）中平衡30s，再移入玻璃化溶液中洗涤后吸入OPS管中，分别经35、30或25s后直接投入液氮中冷冻保存。一步法冷冻保存则无需预处理液处理。结果表明，小鼠胚胎4-细胞一步法和二步法冷冻后囊胚最高发育率分别为87．7％和88.6％，与对照组（93.0％）差异不显著（P〉0．05）。利用最佳冷冻组获得的143枚胚胎移植于12只假妊娠50～60h的受体母鼠，结果有4只妊娠产仔17只，妊娠产仔率为42．5％（17／40），与对照组59．4％（19／32）差并不显著（P〉0.05）。 相似文献
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通过比较不同冷冻保存方法和冷冻保护剂对小鼠耳皮肤成纤维细胞冷冻-解冻复苏后细胞存活率、48h贴壁率和细胞生长曲线的影响,筛选适宜的小鼠耳皮肤成纤维细胞冷冻保存方法和冷冻保护剂。结果表明,以100mL/L二甲基亚砜(DMSO)作为冷冻保护剂进行小鼠耳皮肤成纤维细胞冷冻保存时,方法3处理组解冻复苏后细胞存活率和培养48h细胞贴壁率均高于方法2处理组(P>0.05),并分别极显著高于方法1和方法4。采用方法3进行冷冻保存时,以100mL/L DMSO作为冷冻剂的细胞贴壁率显著高于100mL/L甘油(GL)组(P<0.05),且冷冻解冻后的细胞呈现正常的分裂增殖生长模式。因此,宜选择100mL/L胎牛血清(FBS)+100mL/L DMSO+DMEM作为冷冻保护液,采用方法3进行小鼠耳皮肤成纤维细胞的冷冻保存。 相似文献
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冷冻一解冻胚胎成活力的评价方法有多种,常用的是解冻后的形态学观察和体外培养法,但能够表明其进一步发育能力的最好方法是将其移植入一个假妊娠受体。据报道,冷冻一解冻兔胚胎的移植成活率通常低于非冷冻胚胎。冷冻与非冷冻兔胚胎的这种差异可能是冷冻—解冻胚胎与子宫之间没有同步化所致。冷冻和解冻可延迟胚胎正常代谢和合成作用的恢复。 相似文献
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比较了3种不同浓度的甘油（1.4,1.0,0.7mol/L）和投液氮温度（-25℃、-30℃和-35℃）对牛体外受精胚胎冷冻效果的影响。结果发现,最终投液氮温度为-25℃时,胚胎冻后存活率以1.4mol/L甘油组为最高,同1.0mol/L甘油组相比,差异显著（78.5%vs 64.5%,P〈0.05）;与0.7mol/L甘油组相比,差异极显著（78.5%vs53.5%,P〈0.01）。以1.0mol/L的甘油冷冻,-30℃投液氮的效果优于-25℃的,它们之间冻后胚胎的孵化率差异显著（77.1%vs 64.5%,P〈0.05）。用0.7mol/L甘油冷冻,投液氮温度以-30℃的为最好,冻后胚胎的孵化率（73.3%）极显著（P〈0.01）高于-25℃的（53.5%）。用1.4mol/L甘油冷冻,以-25℃投液氮为最好,冻后胚胎的孵化率（78.5%）显著（P〈0.05）高于-35℃的（65.7%）。结果表明,不同的甘油浓度和投液氮温度对牛体外受精胚胎的冷冻效果有显著的影响。 相似文献
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根据液氮罐内汽相区存在的温度梯度,可逐渐达到降温的原理而研制成功的简易冷冻器,已在全国17个省、市、自治区推广应用。采用该仪器及与其配套的胚胎冷冻—解冻技术方法,对小鼠、绵羊、奶牛、黄牛胚胎进行冷冻试验,取得小鼠冷冻胚胎解冻后培养成活率率为90.7％,孵化膨胀率为77.2％;绵羊和奶牛冷冻胚胎解冻后,形态恢复正常的胚胎比例分别为76.2％和69.4％,移植成功率分别为50％和30％。 相似文献