用单层分化法进行胚胎干细胞神经分化的研究     

蒙超衡  韦精卫  黄奔  韦力  石德顺 《中国兽医学报》2004,24(5):494-498

用单层分化法研究了 ES细胞从 0～ 316 h(第 14天 )的神经分化过程。无饲养层培养的 ES细胞在无血清的N2 B2 7培养基中开始神经分化。从 72 h开始 ,神经外胚层的特异性转录因子 Sox1表达 ,在克隆的边缘逐渐出现向外迁移的细胞 ,形状呈圆形或椭圆形 ,有 1～ 2个细胞突起。在 191h(第 8天 )之后 ,细胞可迁移至克隆边缘的 2 0 0 μm之外 ,这些有细长突起的细胞表达神经元特异性蛋白 Tau。以后 ,迁移细胞的突起开始交叠成网状。 316 h(第 14天 )时 ,细长的纤维可跨越在不同的克隆之间 ,长达上千微米。此时 ,免疫染色的结果表明 ,在克隆的中央有较多的圆形 Nestin阳性细胞 ,而克隆的边缘有大量的 β- tubulin 阳性细胞 ,它们交织成复杂的网状图像。阶段性表达基因的表达时序研究表明 ,ES细胞的特异性转录因子 Oct4开始减弱时 ,Sox1表达开始 ,此时细胞由全能状态进入早期神经分化状态 ;Tau的表达是 Sox1表达的下游事件。这一时序与胚胎发育中神经发生的时序相符。单层分化法能直观地展示 ES细胞的神经分化过程 ,可作为研究细胞分化、胚胎发育及药物筛选的体外模型  相似文献   

体细胞因子对牛卵母细胞体外受精的影响     

石德顺  卢克焕 《广西农业生物科学》1994,13(1):37-42

  相似文献   

水牛精子在胞质内注射后的早期形态变化   总被引：1，自引：0，他引：1  

孟凡丽  韦精卫  石德顺  卢晟盛 《中国兽医学报》2004,24(6):609-612

应用胞质内精子注射 (intracytoplasmic sperm injection,ICSI)技术探讨了水牛卵母细胞胞质与注射精子间的相互作用以及 ICSI精子的形态变化。ICSI后 13h,5 9.4 %的精子头部已膨大 ,且有 18.8%的精子进入解聚状态。雌雄原核发育不同步 ,雄原核在 ICSI后 16 h和 19h的形成率分别为 3.2 %和 4 0 .0 % ;雌原核在 ICSI后 13h已达到 71.9% ,16 h时提高到 90 .3%。经离子霉素与 6 - DMAP联合激活 ,ICSI后 19h产生的胚胎核型以 2 PN PB1 为主 ,其雌原核形成 (激活 )率为 91.3% ,雄原核形成率为 4 0 .0 % ,5 1.3%为孤雌胚。用 5 mm ol/ L 的 DTT预处理精子 1h,可提高精子的解聚率 (30 .9%比 12 .7% ,P<0 .0 5 ) ,但对雄原核的形成率无显著影响 (33.3%比 32 .7% ,P>0 .0 5 )。结果表明 ,水牛精子 ICSI后的雄原核形成时间晚于卵子雌原核形成时间 ,且其比率低于卵子 ,DTT处理精子能提高其解聚率 ,但对雄原核形成无影响  相似文献   

马MC1R基因多态位点与毛色相关性分析     

赵珊珊  肖宁  李志鹏  潘庆杰  李桢  石德顺  刘庆友 《畜牧兽医学报》2018,(8)

旨在研究马MC1R基因多态位点与马毛色的关联性,为马的毛色育种提供重要的理论参考依据。本研究采集了10种不同毛色共132匹马的颈静脉血,提取基因组并应用PCR技术克隆MC1R基因编码序列,通过限制性长度多态性(RFLP)分析和测序分析,对马MC1R基因多态性与毛色进行关联分析,并预测了SNPs对其编码蛋白结构的影响。构建和分析了MC1R基因的系统发育树。结果发现,马MC1R基因存在3个多态位点,其中c.G102A为同义突变,c.C248T和c.G250A为错义突变。c.C248T造成MC1R蛋白的第83个氨基酸由极性亲水丝氨酸变为非极性疏水苯丙氨酸,预测突变后该位点氨基酸与第三跨膜区的第127个氨基酸(丝氨酸)之间的氢键消失而改变了MC1R的蛋白构象,该突变导致MC1R基因出现EE、Ee和ee 3种基因型。错义突变c.G250A导致其翻译的氨基酸由天冬氨酸变为天冬酰胺,该位点突变后与邻近氨基酸及跨膜域作用力复杂,推测比只出现c.C248T突变对MC1R蛋白功能的影响要小,该位点突变导致出现基因型ee~a。综合NCBI中的马MC1R基因型数据(共571匹)与其毛色性状进行相关性分析发现,在骝毛马和黑毛马群体中存在EE和Ee两种基因型,青毛马群体中存在EE、Ee、ee和ee~a基因型,栗毛中存在ee和ee~a两种基因型。黑毛和骝毛马的基因型分布差异极显著(P0.01),呈现Hardy-Weinberg不平衡,等位基因E为优势等位基因;在栗色马中未检测到E等位基因,e为优势等位基因。MC1R基因系统发育树分析显示,EE基因型个体与家马、普氏野马相似性最高。本研究结果显示,马MC1R多态位点产生的不同基因型与马的骝毛、黑毛、栗毛及以这3种毛色为基础毛色的花马毛色存在相关性,骝毛马与黑毛马中不存在基因型ee,栗毛马中则不存在等位基因E。为应用基因型对马的毛色进行定向选择育种奠定了基础。  相似文献   

水牛卵泡颗粒细胞对卵母细胞体外成熟的影响     

张俊  石德顺  陆凤花 《中国兽医学报》2021,(1):162-168

为了系统研究颗粒细胞对水牛卵母细胞体外成熟的影响,使用颗粒细胞条件液处理或单层颗粒细胞和卵母细胞共培养的方法,探讨颗粒细胞共培养对水牛卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的影响。结果显示,添加颗粒细胞传代接种第2天收集的20%颗粒细胞条件液到水牛卵母细胞成熟液中能显著提高水牛卵母细胞体外成熟率和囊胚发育率(P<0.05);然而单层颗粒细胞却显著抑制水牛卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育(P<0.05)。结果表明,与单层颗粒细胞共培养相比,与颗粒细胞条件液共培养更有利于水牛卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育。本研究为水牛卵母细胞体外成熟培养体系的完善提供一定理论依据。  相似文献   

山毛豆草粉颗粒料对肉兔的饲用价值评定   总被引：1，自引：0，他引：1  

蔡小艳  赖志强  石德顺  刘庆友 《草地学报》2013,21(4)

为探讨山毛豆(Tephrosia candida)草粉对肉兔的饲用价值,将60只新西兰青年肉兔分为5组,分别添加0％(对照),10％,20％,30％和40％的山毛豆草粉制成全价颗粒饲料,饲喂90 d后测定各组饲料的营养成分及肉兔采食量、日增重、料重比和屠宰性能.结果表明:山毛豆营养生长期粗蛋白含量为17.77％,肉兔对山毛豆中粗蛋白的消化率为78.09％,山毛豆的可消化总养分为56.18％.与对照组相比,添加20％草粉日增重达到20.80 g·d-1(P＜0.01);料重比为4.45∶ 1(P＜0.05)；屠宰率为57.78％(P＜0.01)；单位kg增重平均最低饲料成本差异显著(P＜0.05).因此,添加20％山毛豆草粉制成全价颗粒饲料可显著提高肉兔的生产性能和养殖效益.  相似文献   

水牛卵母细胞去核方法的比较     

陈自洪杨素芳  谢英李日聪  韦精卫石德顺 《中国兽医科技》2006,36(6):493-496

水牛卵母细胞体外成熟22h后，分别用盲吸法、点击法和纺锤体成像系统（Spindle—View System）去核。结果，三者的去核率分别为65．1％、81．8％和95．0％，差异极显著（P〈0．01）。以水牛胎儿成纤维细胞为供体，通过核移植构建的重构胚的融合率、分裂率和囊胚发育率，在上述3种方法之间均没有显著差异（P〉0．05）。认为点击法是一种较为简单、实用和有效的去核方法。  相似文献   

不同细胞因子对水牛原始生殖细胞传代培养的影响     

黄奔 李童王志强  王晓丽杨素芳 农微汪博  石德顺 《中国兽医科技》2007,37(4):350-353

为探讨不同细胞因子对水牛原始生殖细胞（PGCs）传代培养的影响，将PGCs分别采用A、B、C、D、E、F和G共7种培养基进行培养，即A组：基础液＋10ng／mL白血病抑制因子（LIF）＋10ng／mL碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）；B组：基础液＋20ng／mL LIF＋20ng／mL bFGF；C组：基础液＋20ng／mL LIF＋10ng／mL bFGF；D组：基础液＋20ng／mL LIF；E组：基础液＋20ng／mL LIF＋20ng／mL bFGF＋20ng／mL干细胞因子（SCF）；F组：基础液＋20ng／mL LIF＋40ng／mL bFGF＋40ng／mL SCF；G组（对照组）：基础液。将机械法分离的PGCs小集落接种到水牛胎儿成纤维细胞（BEF）饲养层上进行传代培养。结果，原代时，A、B、C、D、E和F组的克隆数目都显著高于对照组（P％0．05），其中E和F组的克隆数目显著高于A组（P〈0．05），而与B、C、D组差异均不显著（P〉0．05）；1～8代时，B、C、D、E、F组的克隆数目显著高于A组（P〈0．05）；对照组传代数仅为2代，A组为5代，而B、C、D、E和F组均为8代以上。结果表明，在传代过程中，LIF起主要作用，20ng／mL的LIF浓度可以满足水牛PGCs传代培养的需要。  相似文献   

EGF和IGF-1对水牛卵母细胞体外成熟培养的影响     

王晓丽  农垚峰  冯贵雪  石德顺  韦精卫  周红英 《中国畜牧兽医》2007,34(5):57-59

作者研究了在培养液中添加不同浓度的EGF、IGF-1以及EGF联合IGF-1对水牛卵母细胞体外成熟的影响。结果表明：①添加各种浓度的EGF都可以提高水牛卵母细胞的成熟率，其中50 ng/ml EGF有显著影响(P＜0.05)。②10、20 ng/ml的IGF 1对水牛卵母细胞体外成熟无显著影响(P＞0.05)； 30 ng/ml的IGF-1能显著提高水牛卵母细胞体外成熟率(P＜0.05)。③添加20 ng/ml EGF+30 ng/ml IGF-1组卵母细胞体外成熟率高于添加30 ng/ml的IGF-1组，显著高于添加20 ng/ml EGF组和对照组(P＜0.05)。可见，EGF和IGF-1对水牛卵母细胞体外成熟有协同作用。  相似文献   

猪卵母细胞体外成熟和孤雌培养体系的建立和优化     

黄雅琼  石德顺  谭世俭  陆凤花  韦精卫 《中国畜牧杂志》2007,43(7):13-16

试验系统探讨了猪卵母细胞的体外成熟和孤雌激活方法。结果表明:在成熟液中分别添加FSH(促卵泡素:0.1ng/mL)和hMG(人绝经期促性腺激素:0.01IU/mL)的卵母细胞成熟率差异显著,但2组间的分裂率和囊胚率差异不显著。在成熟液中添加0、10、30、50、70ng/mL或90ng/mL的EGF(表皮生长因子),50ng/mLEGF组的分裂率达到84.90%,囊胚率达到30.20%,显著高于其余各组。分别使用以TCM-199和NCSU-23为基础液的成熟液来成熟培养猪卵母细胞,NCSU-23组的分裂率,成熟率和囊胚率均高于TCM-199组。使用离子酶素激活方法和电激活方法进行对比,离子酶素激活后孤雌胚胎发育效果好,差异极显著(P<0.01)。  相似文献