家蚕微孢子虫PCR检测的研究   总被引：8，自引：5，他引：3  

蔡平钟  徐兴耀 《蚕业科学》1997,23(4):207-210

根据家蚕微孢子虫（Nosemebombycis,N．b）孢子的DNA序列，设计合成一对引物，对家蚕微孢子虫孢子及其近缘种孢子的DNA进行PCR检测。结果表明只有家蚕微孢子虫孢子DNA获得特异性扩增区带，大小为317bp，可以区别于Nosemasp.MG1和MG2、柞蚕微孢子虫、Vairimorphanecatrix及Pleistophoraanguillarum等。对N.b孢子DNA检测灵敏度达1ng水平。  相似文献   

柞蚕微孢子虫单克隆抗体的研制及诊断   总被引：3，自引：0，他引：3  

唐啸尘  宁波 《蚕业科学》1999,25(4):221-224

研究报告了柞蚕微孢子虫Nosemaantheraeae(简称N .a)单克隆抗体制备及免疫胶体金银染色法 (IGSS)诊断的结果。用抗N .a的单抗结合间接免疫胶体金银染色法 (IGSS)对 6种微孢子虫进行检测 ,在光学显微镜下柞蚕微孢子呈现特异的褐色 ,能与包括家蚕微孢子虫在内的其它 5种微孢子虫加以区别。  相似文献   

家蚕微孢子虫诊断新技术的研究     

邱宝利  徐兴耀  卢铿明  周鹏 《广东蚕业》1998,(3)

为了正确诊断家蚕微孢子虫(Nosema bobycis, N.b),共征集了11种微孢子虫作为诊断的材料。根据N.b.孢子(日本株)的DNA序列,设计一对引物,以N.b.DNA为模板进行PCR扩增得到一个约317bp的片段,将此片段克隆到大肠杆菌DH5 α中,提取重组质粒、酶切、回收目的片段,经地高辛标记为探针,对N.b.等11种微孢子虫DNA进行核酸杂交检测,只有N.b.DNA呈阳性反应。检测灵敏度均达到1ng DNA水平。  相似文献   

用铬变素2R法对家蚕微孢子虫孢子染色的研究   总被引：4，自引：1，他引：3  

唐顺明  张志芳  李奕仁  何家禄 《蚕业科学》2002,28(1):72-74

采用铬变素 2R法 (Chromotrope 2R)染色家蚕微孢子虫 (Nosemabombycis,N .b)孢子和绿僵 (Nomuraearile yi)孢子、曲霉 (Aspergillusflavus)孢子、花粉粒 (Pollengranule)等与N .b孢子形状相似物 ,结果表明 :Chromotrope 2R法特异性地将N .b孢子染成粉红色 ,绿僵孢子、曲霉孢子、花粉粒未被染成红色 ,初步认为Chromotrope 2R法可应用于母蛾镜检的N .b鉴定 ,能明显提高N .b的检出率与准确性 ;染色N .b孢子的最佳时间与温度为 4 0min ,30℃。鉴于本染色法的条件、技术操作简便 ,染色特异性强 ,因而具有良好的应用前景  相似文献   

家蚕微粒子病的PCR诊断技术研究   总被引：16，自引：6，他引：10  

陈秀  庄敏 《蚕业科学》1996,22(4):229-234

在ＤＮＡ水平上，以聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｏｎ，ＰＣＲ）技术检测家蚕微孢子虫的结果。设计、合成了两对引物，其中引物Ⅰ是针对家蚕微泡子虫（ＮｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓＮ．ｂ．）引物Ⅱ是针对变形孢子虫（ＶａｉｒｉｍｏｒｐｈａｎｅｃａｔｒｉｘＶ．ｎ，）的。用这两对引物分别对“桑尺蠖微孢子虫”孢子ＤＮＡ和Ｎ．ｂ．（镇江株）的纯孢子及其感染的幼虫、蛹及蛾的ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增，均获得预期的阳性条带；对不同引物扩增的产物进行了ＤＮＡ序列分析。初步认为引物Ⅰ可作为家蚕微孢子虫Ｎ．ｂ．特异性较高的检测引物，而引物１是微孢子虫共有的检测引物。进一步讨论了对家蚕微孢子的检测及分类上的问题。  相似文献   

模拟感染家蚕微粒子病的蚕卵、蚕蛾PCR检测的初步研究   总被引：4，自引：2，他引：2  

刘吉平  曹阳  Smith J E  徐兴耀 《蚕业科学》2004,30(4):367-370

在比较研究不同浓度家蚕微孢子虫 (Nosemabombycis,N .b)孢子与模拟染毒N .b孢子蚕卵、蚕蛾的模板DNA制备方法的基础上 ,选用MP1/MP2和V1F/ 5 30R两对引物进行PCR扩增检测。结果为 :碱性条件预处理N .b孢子后再抽提的DNA ,其得率略高于常规方法抽提的DNA ,但两者的模板质量相同 ;MP1/MP2和V1F/ 5 30R两对引物均可有效地检出N .b孢子DNA ,前者的检测灵敏度为 1μL 3× 10 6mL-1以上浓度的N .b孢子DNA ,后者为 1μL 3× 10 5mL-1以上浓度 ;对不同浓度N .b孢子DNA与蚕蛾DNA混合后进行PCR检测 ,V1F/ 5 30R引物的检测灵敏度为1μL 3× 10 6mL-1N .b孢子DNA。  相似文献   

山东省病原性家蚕微孢子虫的初步研究   总被引：4，自引：2，他引：2  

王彦文  牟志美  高绘菊  房德文 《蚕业科学》2002,28(1):67-71

从山东省境内家蚕成虫体内分离到 4种病原性家蚕微孢子虫 ,与N .b比较研究结果表明 ,4种微孢子虫的大小、形态、极丝圈数及倾斜角与N .b相比均存在差异 ,但血清学反应及在蚕体内的发育过程与N .b相同。初步认为该 4种病原性微孢子虫为N .b的同属微孢子虫。这 4种微孢子虫对家蚕具有极强的食下感染率和胚种传染力。  相似文献   

家蚕病原性微孢子虫极丝蛋白的研究   总被引：2，自引：1，他引：1  

高永珍  黄可威  常智杰 《蚕业科学》2001,27(2):128-130

从家蚕微孢子虫 (Nosemabombycis,简称N .b)和蓝萤叶甲微孢子虫 (MPa)中抽提了极丝蛋白 (PTP) ,进行SDS PAGE分析。并选择性分离、纯化了N .b孢子中主要极丝蛋白 ,经氨银染色法鉴定其纯度较纯。将N .b孢子中该主要极丝蛋白免疫家兔制备多克隆抗体 ,用酶联免疫法 (ELISA)测定其效价 ,滴度为 1∶10 2 40 0。利用制得的抗体进行胶体金标记免疫电镜定位观察 ,发现所纯化蛋白确实存在于极丝上。  相似文献   

家蚕微孢子虫孢子DNA的提取、克隆及部分DNA序列分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

章新愉  卢铿明  庄楚雄  胡维民  徐兴耀  黄自然  陈火胜 《蚕业科学》1995,21(2):1-95

报道家蚕微孢子虫（Ｎｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓ简称Ｎ．ｂ）孢子ＤＮＡ的提取、克隆及部分ＤＮＡ序列测定的结果。采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ将孢子破碎，用苯酚一氯仿法提取孢子的ＤＮＡ。将Ｎ．ｂ孢子ＤＮＡ与ｐＴＺ１８Ｒ质粒重组，转化于大肠杆菌ＤＨ５，获得４个阳性克隆株：ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ１，插入片段为１ｋｂ；ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ２，为１．２ｋｂ；ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ３为１．８ｋｂ及ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ４为１．９ｋｂ，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，证实插入的ＤＮＡ片段为家蚕Ｎ．ｂ孢子所特有。与ＭＧ１（Ｎｏｓｅｍａｓｐ．），蓖麻蚕微孢子虫、蓝萤叶甲微孢子虫及蚕卵的ＤＮＡ均无同源性。用双脱氧链终止法测定４个克隆株插入片段的部分ＤＮＡ的序列，经检索尚未发现同源性的基因序列。讨论了ＰＣＲ技术诊断家蚕微孢子虫孢子与近缘种的问题。  相似文献   

家蚕微粒子病血清学诊断的研究:玻片凝集反应   总被引：8，自引：3，他引：5  

李达山 《蚕业科学》1985,(2)

利用微孢子虫种间孢壁抗原的差异性,用本法制取的抗N.bombycis孢子血清,对N.bombycis孢子有特异性凝集反应.凝集效价为2048.应用玻片凝集法试验表明,抗Nb血清对同源微孢子虫的反应明显,对异种微孢子虫无反应,用2%KOH(10小时)、2%HCOH(10小时)、高温(100℃2小时)处理N.bombycis孢子,其孢壁抗原性未受破坏.应用玻片凝集法鉴别蚕微孢子虫,有特异性强、反应快、设备简单、操作方便等特点,有一定实用意义.  相似文献   

广消威对家蚕微孢子的消毒效果及机理研究     

王彦文  牟志美  高绘菊  李卫国 《蚕业科学》2002,28(2):164-167

研究了含氯消毒药剂广消威对家蚕微孢子的杀灭效果。结果表明 ,广消威可有效杀灭家蚕微孢子 ,并且具有药效稳定、对金属腐蚀性弱等优点。对广消威的消毒机理进行了探讨 ,认为广消威不仅可以破坏家蚕微孢子的结构 ,而且还可使微孢子的可溶性糖大量外渗和蛋白质结构受到破坏 ,从而使微孢子失去致病能力  相似文献   

鲤吉陶单极虫免疫原性的研究     

杨振国  陶增思  卢强  周玉  汪建国  徐广宏  刘子  李德昌 《中国兽医学报》2002,22(2):143-145

以鲤吉陶单极虫孢子的可溶性抗原 ,采用 B淋巴细胞杂交瘤融合技术制备了 4A8、6 B8、7B93株杂交瘤细胞 ,并用该抗原免疫新西兰白兔制备了高免血清。通过对虫体进行抗原检测、定位和 Western- blot试验 ,结果发现 :4A8、6 B8、7B9和多抗经间接 EL ISA可检出抗原的最低质量浓度分别为 0 .14、0 .2 0、0 .32和 0 .86 mg/ L;IFA定位显示 ,单、多抗检出的抗原都定位于虫壁 ,其中 4A8的抗原主要位于虫体后部 (胚核附近 ) ,6 B8和 7B9的抗原主要位于虫体前部 (极囊附近 )和极丝 ;Western- blot试验表明 ,4A8结合的抗原相对分子质量为 72 0 0 0 ,多抗结合的抗原相对分子质量分别为 5 80 0 0、70 0 0 0、880 0 0 ,3株单抗和多抗均为抗 T.kitauei的抗体 ,4A8具有明显的种、期特异性 ;自然感染该虫的鲤鱼血清中查不到循环抗体。  相似文献   

核酸免疫制备抗猪流感病毒HA单克隆抗体     

李越  王伟  赵颖慧  周长良  臧凤霞  冉多良  孟庆文  陈洪岩 《中国畜牧兽医》2014,41(7):35-39

为制备H1N1猪流感病毒HA蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),本试验利用表达猪流感病毒A/Swine/Guangdong/2004(H1N1)毒株HA蛋白的表达质粒pVAX1-HA肌注股内肌免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合;通过间接ELISA方法筛选和有限稀释法克隆,获得9株稳定分泌抗HA单克隆抗体的杂交瘤细胞。中和试验结果显示,单克隆抗体4D5株对H1N1流感病毒起中和作用,该单克隆抗体杂交瘤细胞培养上清的效价为1∶1024。这株单克隆抗体与哈尔滨兽医研究所国家重点实验室保存的H3N2流感病毒、H5N1流感病毒均不发生交叉反应,显示出了很好的H1特异性;间接免疫荧光试验结果显示,这株单克隆抗体能与H1N1流感病毒发生特异性反应。制备的特异性抗HA单克隆抗体为建立H1N1流感病毒免疫学检测方法和单链抗体抗病毒复制研究奠定了基础。  相似文献   

整合进禽反转录病毒长末端重复序列的马立克氏病病毒的分离鉴定     

周祥  韦平  滕丽琼 《畜牧与兽医》2007,39(8):22-26

应用鸭胚成纤维细胞(DEF)从曾免疫过CVI988/Rispens株疫苗的患马立克氏病(MD)肿瘤的三黄鸡中分离到一株马立克氏病病毒(MDV,命名为GXY2株。用禽肿瘤病聚合酶链式反应(PCR)鉴别诊断技术对患鸡的肿瘤组织病料及克隆纯化毒株的DEF培养物进行检测,结果均扩增到MDV-1强毒株的132-bpr特异性带和网状内皮组织增殖病病毒(REV)的长末端重复序列(LTR)。用基于抗MDV-1的gB蛋白单克隆抗体BA4、MEQ蛋白单克隆抗体3G12E6和抗REV的单克隆抗体11B118分别对毒株的培养物进行间接免疫荧光试验(IFA),结果样品只与抗MDV-1的单克隆抗体呈现阳性反应,而与抗REV的单克隆抗体呈现阴性反应。应用PCR技术扩增并测定了毒株的致瘤相关基因meq的核苷酸序列,并与其他MDV-1参考毒株的序列进行比较分析,结果发现其序列与我们之前分离鉴定的MDV-1野强毒株G2和YL040920高度同源。研究的结果表明,分离株GXY2为整合有REVLTR片段的重组MDV强毒株。  相似文献   

用单抗研究T细胞与牛流行性白血病发生的关系     

潘耀谦  夏志平  高丰  冈田幸助 《动物医学进展》2001,22(4):75-78

本试验对10头患流行性白血病病牛的不同器官的肿瘤组织，用8种单克隆抗体（McAb),TH14B、BAQ44A、PIg45A、BIg715A、PIg501E、cAct105、MM1A、AHCC125染色进行了观察。结果：病牛经临床病理学和免疫琼扩试验而诊断为EBL，通过免疫组织化学检测，在10个病例中发现有9个病例的肿瘤组织对B细胞属性的McAb有很强的染色反应，证明其来源于B细胞。仅有1个病例对B细胞属性的McAb着色很淡，而对T细胞属性的McAb着色很深，呈强阳性反应，说明其来源可能与T细胞有关。  相似文献   

Use of a monoclonal antibody in the diagnosis of infection by Dermatophilus congolensis     

S J How  D H Lloyd  J Lida 《Research in veterinary science》1988,45(3):416-417

A monoclonal antibody (McAb) to Dermatophilus congolensis was produced from murine hybridoma cultures and purified by affinity chromatography. Species specificity was demonstrated using indirect immunofluorescent staining; the McAb was shown to react with 10 D congolensis isolates but not with 10 Nocardia species isolates, a Rhodococcus and a Streptomyces species isolate. The McAb was used to demonstrate D congolensis in clinical material from confirmed bovine and ovine cases and presumptive equine cases of dermatophilosis by indirect immunofluorescent staining.  相似文献   

1株抗欧洲型和美洲型PRRSV核衣壳蛋白单克隆抗体的制备与鉴定     

王晓丰  李玉峰  王先炜  王海燕  姜平 《畜牧与兽医》2010,42(12)

利用RT-PCR方法扩增出欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)SS-6毒株的核衣壳(N)蛋白基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-6p-1上,构建了重组表达质粒pGEX-N,并将其转化到大肠杆菌BL21中,在诱导剂IPTG的诱导下获得高效表达,重组蛋白的分子量约为40 ku。用纯化的重组N蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体。经细胞融合获得一株可稳定分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株,命名为1 B6,将其连续培养20代后仍能稳定分泌抗体。亚型鉴定结果为IgG1型,其轻链为κ链;间接免疫荧光试验和免疫印迹试验均证明,1B6单抗既能与欧洲型PRRSV反应,也能与美洲型PRRSV反应;ELISA检测杂交瘤细胞培养上清抗体效价为1:640,腹水的效价为1:256 000,为猪繁殖与呼吸综合征的诊断奠定了基础。  相似文献   

不同来源微粒子孢子间血清学关系的比较研究   总被引：5，自引：4，他引：1  

郭锡杰  黄可威 《蚕业科学》1994,20(3):154-157

应用玻片凝集法和酶标抗体法比较了几种不同来源微粒子孢子间的血清学关系，包括本所保存的家蚕微粒子孢子（ＢｍＮ．ｂ），从安徽绩溪和江苏东台的饲养蚕中收集到的微粒子孢子和从四川收集到的蓝叶虫（ｐｈｙｌｌｏｂｒｏｔｉａｃａｒｍａｔａＢａｌｙ）微粒子孢子。结果表明，绩溪、东台微粒子孢子与ＢｍＮ．ｂ之间具有相同的血清学关系，而蓝叶虫微粒子孢子与ＢｍＮ．ｂ之间无血清学关系。  相似文献