油茶ISSR反应体系建立及优化     

温强  叶金山  雷小林  江梅  黄莉莉  江香梅  徐林初 《中南林业科技大学学报(自然科学版)》2006,26(6):22-26

以改进的CTAB高盐法提取油茶嫩叶总DNA,进行简单重复序列间扩增(ISSR)分析,分别测试了退火温度、模板DNA浓度、M g2+浓度、dNTP s浓度、T aqDNA聚合酶用量和是否加入去离子甲酰胺对反应结果的影响.油茶ISSR分析的最适反应体系为:在20μL PCR反应体积中,含20 ng模板DNA,2.5 mm o l.L-1M gC l2,0.2 mm o l.L-1dNTP s,1UT aqDNA聚合酶,0.5pm o l.μL-1引物,1%去离子甲基酰胺.扩增程序为:94℃预变性2 m in;94℃变性30 s,52℃退火30 s,72℃延伸90 s,反应38个循环;最后在72℃延伸7 m in.  相似文献   

濒危药用植物延龄草RAPD反应体系的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

梁薇  何正权  胡勇刚  李雪萍  陈发菊  姚伟  梁宏伟 《福建林业科技》2007,34(1):14-17,100

以濒危药用植物延龄草(Trillium tschonoskiiM.)的叶片为材料,采用改良的CTAB法提取基因组DNA进行RAPD扩增,优化了RAPD扩增反应的程序及模板、引物、dNTP、Taq酶浓度等参数。结果表明:适合延龄草的RAPD扩增程序为:94℃预变性5 min,然后执行40个循环,每个循环中94℃变性1 min,36℃退火1 min,72℃延伸2 min,最后72℃延伸10min;适宜的反应体系为:25μL总体积中含DNA模板50 ng,Mg2+2.5 mM,引物0.6μM,dNTP 0.2 mM,Taq DNA聚合酶3 U。  相似文献   

麻竹RAPD反应条件的优化   总被引：4，自引：0，他引：4       下载免费PDF全文

邢新婷  傅懋毅 《林业科学研究》2003,16(5):554-559

以麻竹DNA为模板,对影响麻竹RAPD扩增的重要参数进行了优化试验,以期建立麻竹RAPD反应的最适体系。最终得出的麻竹RAPD反应体系为:20μL反应体系,2μL10倍反应缓冲液,模板含量为50ng,2 5mmol·L-1的Mg2+,1 5U的Taq酶,dNTP为1 75mmol·L-1,引物浓度为0 4μmol·L-1。优化后的RAPD反应程序为:94℃3min→[94℃1min→37 5℃1min→72℃1min20sec]40个循环→72℃8min→4℃保持。  相似文献   

利用正交设计优化茶树ISSR反应体系   总被引：2，自引：0，他引：2  

卢莉  张强  王玉花  房婉萍  崔清梅  袁程晓  黎星辉 《经济林研究》2010,28(1):14-19

为优化茶树ISSR分子标记反应体系,对影响茶树ISSR反应较大的Mg2+浓度、dNTP浓度、模板DNA浓度、TaqDNA聚合酶浓度、引物浓度5个因素在4水平上进行优化试验,建立了适合于茶树ISSR-PCR(Inter Simple Sequence Repeats-Polymerase Chain Reaction)的最佳体系:20μL反应体系中,TaqDNA聚合酶0.75U/μL,10×buffer(含Mg2+)2.0mmol·L-1,模板DNA20ng,dNTP0.1mmol·L-1,引物0.3μmol·L-1。反应程序为:94℃预变性5min,94℃变性1min,50～60℃退火40s,72℃延伸90s,34次循环,72℃延伸7min,4℃保存。  相似文献   

七叶树RAPD反应体系的优化     

王绍文  时明芝  张建国  曹兴 《辽宁林业科技》2010,(2):18-20

以七叶树新鲜叶片为材料,研究了七叶树RAPD分析过程中的影响因素包括Taq酶、Mg2+、dNTP、引物、模板DNA浓度、变性时间、循环次数等,建立了适合七叶树RAPD反应的PCR体系。即20μl反应体系中含有dNTP 0.25 mmol/L,Mg2+2.5 mmol/L,Taq酶1.0U,引物0.8μmol/L,DNA模板50ng。扩增程序为:94℃预变性5min,然后40个循环(94℃变性30 s,33℃退火40 s,72℃延伸60 s),最后72℃延伸10min,4℃保存。  相似文献   

松口蘑与栎松口蘑RAPD反应体系的优化   总被引：5，自引：0，他引：5  

吴松权  全雪丽  傅伟杰  吴基日 《辽宁林业科技》2006,(5):5-8

以长白山松口蘑与栎松口蘑为材料,建立了松口蘑与栎松口蘑RAPD反应优化体系。即在20μl反应体积中,模板DNA 10ng,引物0.3μmol.L-1,dNTP 200μmol.L-1,MgCl22mmol.L-1,Taq DNA聚合酶1unit,1×Buffer;反应程序为预变性94℃5min,94℃45s、36.3℃60s、72℃90s共循环45次,最后72℃延伸7min。  相似文献   

漾濞核桃RAPD反应优化体系的建立     

杨恩  陈少瑜  张雨  范志远  习学良 《福建林业科技》2005,32(4):25-28,48

以漾濞核桃中的大姚三台核桃为实验材料,通过对影响RAPD扩增结果的主要因子Tag酶、Mg+2、引物、模板DNA、dNTPs等不同的浓度和组合的试验研究,确定了漾濞核桃的最适反应体系和扩增程序,即在25μL反应体系中,0.75 u.L-1Taq DNA聚合酶,3.0 mmol.L-1Mg+2,0.3 mmol.L-1引物,含1.6 mg.L-1模板,2.5 ul 10×Buffer,dNTPs各0.2 mmol.L-1。扩增程序为:94℃预变性300 s,94℃变性40 s,36℃退火60 s,72℃链延伸120 s,45次循环后,72℃延伸600 s。  相似文献   

八角RAPD-PCR反应体系的建立及引物筛选研究     

陈海云  陈少瑜  宁德鲁  吴涛  耿树香  谷丽萍  白平  李勇杰 《西部林业科学》2012,(4):65-69

在提取高质量八角基因组DNA的基础上,通过对其RAPD反应体系的Taq DNA聚合酶、dNTPs浓度、Ｍg2+浓度、引物浓度等因子的优化,建立了稳定、重复性高的八角RAPD-PCR反应体系.研究结果表明,在25 μL PCR反应体系中,含1.0 UTaq DNA聚合酶,0.15 mmol·L-1 dNTPs,2.0mmol·L-1 Mg2+,2.0 μmol·L-1引物,20～ 80 ng模板.最佳反应程序为,94℃预变性5 min,扩增后94℃变性30 s,31 ～37℃退火30 s,72℃延伸30 s,35个循环;72℃完全延伸7 min,4℃保存.在建立RAPD-PCR反应体系的基础上,从240条RAPD引物中筛选出15条扩增条带清晰、稳定性好的引物,并通过各引物的退火温度梯度实验,确定了各引物的最适退火温度.  相似文献   

鹅掌楸ISSR-PCR反应体系的建立及优化   总被引：2，自引：0，他引：2  

占志勇  徐刚标 《中南林业科技大学学报(自然科学版)》2010,30(6)

为建立鹅掌楸简单序列重复区间扩增ISSR的PCR优化反应体系,以鹅掌楸叶片基因组DNA为材料,系统地测试了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2+浓度、TaqDNA聚合酶用量及退火温度对ISSR-PCR反应体系的影响。结果表明:优化的PCR反应体系为:20μL总体系中,含30 ng模板DNA,0.3μmol.L-1随机引物,0.2 mmol.L-1dNTPs,1.4 mmol.L-1Mg2+,0.8 UTaqDNA聚合酶;最佳退火温度为60℃;PCR反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,60℃退火45 s,72℃延伸2 min;45个循环;72℃再延伸7 min。  相似文献   

红花石蒜ISSR-PCR反应体系的建立   总被引：9，自引：2，他引：9       下载免费PDF全文

杨志玲  冯刚利  谭梓峰  栾启福  王承南 《林业科学研究》2006,19(4):509-512

以红花石蒜叶片基因组DNA为模板,分析了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2 的浓度及Taq DNA聚合酶的用量对ISSR-PCR扩增结果的影响.建立了石蒜ISSR分析最优化的反应体系及应用程序:即25 μL反应体系中,有20 ng模板DNA、0.5 μmol·L-1随机引物、150 μmol·L-1 dNTPs、2.0 mmol·L-1 Mg2 、1.0 U Taq DNA聚合酶.反应程序为:94 ℃预变性5 min;然后45个循环:每个循环94 ℃变性45 s,55 ℃退火60 s,72 ℃延伸2 min;循环结束后72 ℃延伸7 min.  相似文献   

桉树随机引物PCR反应体系优化研究     

邓紫宇  张照远  项东云  唐庆兰  陈健波  卢翠香  叶露 《广西林业科技》2012,(1):23-26

以桉树DNA为模板,采用单因素试验方法研究dNTP浓度、Mg2＋浓度及退火温度对桉树随机引物PCR反应结果的影响。试验结果表明,最优的反应体系为：20μL的PCR反应体积中,10×Buffer2.0μL,Mg2＋（25 mmol/L）1.28μL,dNTP（10 mmol/L）0.4μL,Primer（10μmol/L）2.0μL,Taq（5 U/μL）0.2μL,DNA2.0μL;最优扩增程序：94℃预变性2 min,然后进行35个循环（94℃变性30 s,36℃退火30 s,72℃延伸2 min）,最后72℃延伸10 min。  相似文献   

濒危珍稀植物七子花落叶的分解特性   总被引：1，自引：0，他引：1  

张崇邦  金则新  李均敏 《福建林业科技》2003,30(3):1-4

研究了亚热带地区濒危植物七子花落叶在不同网袋中的分解速率及其与土壤微生物和土壤环境因子的关系。结果表明:七子花落叶在不同网袋中的分解速率均呈单峰曲线变化。其中0 5cm网袋中的分解速率的峰值出现在9月份,分解速率达2 73mg·g-1d-1。0 2cm和0 1cm网袋中的分解速率的峰值出现在10月份,分解速率分别达3 61mg·g-1d-1和3 65mg·g-1d-1。七子花群落的土壤微生物和土壤净呼吸速率的旺盛期也发生在9～10月份。通径分析表明,在0 5cm的网袋中,七子花落叶分解的主要影响因素为土壤真菌、土壤净呼吸速率、土壤含水量。在0 2cm和0 1cm网袋中,主要影响因素为土壤温度、土壤净呼吸速率和放线菌的数量。各环境因素与土壤净呼吸速率之间的相互作用对七子花落叶分解速率产生的间接影响相对较大。  相似文献   

赤松外生菌根ITS-PCR体系的建立及优化     

马大龙  杨国亭  穆立蔷  李淳 《林业科技》2010,35(5):25-28

以CTAB法提取的赤松外生菌根DNA为模板,应用单因子试验及L16（4^5）正交试验,系统的分析了DNA模板、Mg^2＋、dNTPs、引物和Taq酶对ITS-PCR扩增结果的影响,并建立了赤松外生菌根rDNA ITS扩增反应的优化体系,最优反应体系为：20μL体系中,1×PCR buffer 2μL、DNA模板30 ng、Mg^2＋2.0 mmol/L、dNTPs0.2 mmol/L、引物0.2μmol/L、Taq酶0.5 U。  相似文献   

松口蘑SRAP反应体系的优化     

吴松权  朴炫春  全雪丽  金美玉 《辽宁林业科技》2009,(5):13-14

以松口蘑为材料,建立了松口蘑SRAP反应的优化体系。即在20μL反应体积中,模板DNA 10ng,引物浓度0．3μmol／L,dNTP 250mmol／L,MgCl 22．5mmol／L,Taq DNA聚合酶0．5U,1×Buffer;反应程序为：94℃预变性5min,94℃变性1min,35℃退火1min,72℃延伸1min,共5个循环;94℃变性1min,50℃退火1min,72℃延伸1min,共35个循环：72℃延伸5min。  相似文献   

Optimizing SSR-PCR system of Panax ginseng by orthogonal design   总被引：1，自引：0，他引：1  

Yang Tian-tian  Mu Li-qiang  Wang Jun 《林业研究》2007,18(1):31-34

An orthogonal design was used to optimize SSR-PCR amplification system using Panax ginseng genomic DNA as template. Four levels of five factors （DNA template, Taq DNA polymerase, Mg^2＋, primer, and dNTP） and annealing temperature have been tested separately in this system. The results demonstrated the reaction efficiency was affected by these factors. Based on the results, a stable, productive and reproducible PCR system and cycling program for amplifying a ginseng SSR locus were obtained： 20 μL system containing 1.0 U Taq DNA polymerase, 2.0 mmol·L^-1 Mg^2＋, 0.2 mmol·L^-1 dNTPs, 0.3 μmol·L^-1 SSR primer, 60 ng· μla^-1 DNA template, performed with a program of 94℃ for 5 min, 94℃ for 30 s, annealing at 56.3℃ for 30 s, 72℃ for 1 min, 37 cycles, finishing at 72℃ for 7 min, and storing at 4℃.  相似文献   

粗皮桉 ISSR-PCR 反应体系优化     

陈升侃  项东云  邓紫宇  梁建新  蓝必布  李昌荣  梁机 《桉树科技》2015,(1):1-8

为建立粗皮桉 ISSR-PCR 优化反应体系,先通过单因素试验确定影响粗皮桉 ISSR-PCR 5个因素(Mg²⁺、dNTP、Taq DNA 聚合酶、DNA 模板、引物)的较适宜浓度范围,在此基础上进一步通过正交试验对5个因素4个水平进行优化,并用 DPS 软件分析试验结果。结果表明粗皮桉 ISSR-PCR 的优反应体系为：在25μL 反应体系中,10×PCR buffer 2.5μL、MgCl 2.0 mmol·L^-1、dNTPs 0.3 mmol·L^-1、Taq DNA 聚合酶1.25 U、DNA 模板60 ng、引物0.8μmol·L^-1。通过梯度试验确定的扩增程序为：94℃预变性5 min,然后按94℃变性1 min,51℃退火3 min,72℃延伸2 min,进行35个循环,最后72℃延伸5 min,4℃保存。  相似文献   

山茶ISSR扩增条件的优化     

谈探  金则新  李钧敏  潘仙鹏 《福建林业科技》2007,34(2):24-27

以山茶基因组DNA为材料,测试山茶ISSR扩增的最适退火温度,并采用单因素试验,测试了模板DNA量,Mg2+浓度,dNTP浓度,BSA浓度,引物用量,Taq酶用量等6个因素对山茶ISSR扩增的影响。结果显示:山茶ISSR扩增的最适退火温度为56.3℃;适宜的扩增体系为:10μL PCR反应体积中,1×Taq酶配套缓冲液(10 mmol.L-1Tris.HCl pH 9.0,50mmol.L-1KCl,0.1%Triton X-100),2 mmol.L-1MgCl2,0.6 mmol.L-14×dNTP,2 mg.ml-1BSA,16 ng模板DNA,10 pmol引物,0.5 U Taq酶。  相似文献