高效提取越橘成熟组织基因组DNA的方法   总被引：4，自引：0，他引：4  

张鲁杰  夏秀英  徐娜  贺建华  徐品三 《华北农学报》2008,23(Z2)

为从越橘成熟组织中提取高质量DNA,对CTAB法进行改良,并与常规CTAB法及快速CTAB法的提取效果进行比较。结果表明:改良方法提取获得的DNA产量大、纯度高,DNA产量平均为192μg/g,OD260/OD280在1.75~1.85之间,所得DNA能被限制性内切酶完全消化,以其为模板进行SRAP-PCR扩增,能得到清晰、稳定的条带,证明改良方法适于越橘成熟组织DNA的提取。  相似文献   

一种高效提取鹧鸪茶基因组DNA的方法   总被引：2，自引：2，他引：0  

李娟玲  刘国民  贾媛  兰云峰 《中国农学通报》2010,26(8):69-73

本研究在常规的CTAB法基础上,对其中某些步骤和所用药品进行改良,以寻求一种能简便快速地排除多酚类、蒽醌类和甾体类化合物等物质干扰的方法。应用该改良CTAB法所得鹧鸪茶总DNA鹧鸪茶总的DNA长度接近21kb,OD260/OD280在1.8左右。以此DNA为模板可获得条带清晰、重复性好的ISSR-PCR扩增结果。  相似文献   

枫香ISSR-PCR反应体系的优化及引物筛选     

黄敏  黄旭萍  李斌奇  张毅智  林龙  陈发兴 《分子植物育种》2023,(9):2991-2998

为探索最适的枫香叶片DNA提取方法、最优ISSR引物和最佳ISSR-PCR扩增反应体系,本试验采用改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、十二烷基硫酸钠(SDS)法、高盐低pH法和试剂盒法提取枫香叶片DNA;采用三因素五水平(DNA模板用量,2×Taq Master Mix用量引物浓度)正交试验构建并优化枫香的ISSR-PCR反应体系;对100条ISSR引物进行筛选及其退火温度优化。结果表明：改良CTAB方法提取的DNA浓度高,且电泳条带清晰无污染;SDS和试剂盒方法提取DNA的浓度低,电泳条带亮度低;高盐低pH值法提取的DNA的电泳条带模糊且降解拖尾现象严重。DNA模板浓度为20 ng、Taq Master Mix用量为10μL、引物浓度为0.6μmol/L、ddH₂O为7.8μL时扩增程序的条带最清晰、多态性最好。筛选出17条重复性强、条带清晰明亮、多态性高的ISSR引物及其最适退火温度,其中扩增位点数最多的为引物UBC-834、UBC-836和UBC-853,扩增位点均为13个,以UBC-878为ISSR引物时的扩增反应中,当退火温度在46.9℃的时候能够扩...  相似文献   

利用改良CTAB法提取澳洲坚果成熟叶片高质量DNA   总被引：1，自引：0，他引：1  

郭凌飞  邹明宏  曾辉  杜丽清  陆超忠 《分子植物育种》2007,5(Z1):187-190

澳洲坚果的成熟叶片中次生物质含量很高,因此给DNA的提取造成很大困难.CTAB法可有效去除多糖等杂质,但常规CTAB法的提取效果并不好.为此,我们在此基础上进行改进.采用改良后的CTAB法提取了7个澳洲坚果样品的总DNA.结果表明:使用CTAB free缓冲液进行前处理可去除大部分的杂质.所获得的DNA纯度较高,OD260/OD280均在1.7～1.9之间,RNA消化彻底,DNA无明显降解,进行ISSR分析(UBC-835)条带清晰,多态性好.说明该方法获得的基因组DNA适合于进行以PCR为基础的DNA多态性的研究.  相似文献   

一种适于PCR检测病毒诱导基因沉默番茄植株的微量DNA提取方法     

何秀霞  于源华  果鸿宇  张淑华 《中国农学通报》2007,23(12):85-87

【研究目的】为了寻找一种适用于病毒诱导的基因沉默番茄叶片PCR检测的快速、简单、成本低的DNA提取方法。【方法】笔者根据PCR反应的要求,用改良的CTAB法,实现了微量番茄叶片基因组DNA的快速提取。【结果】提取基因组DNA所用的组织量虽少,所得的DNA经过电泳检测虽有降解,但足以用于PCR检测,以其作模板扩增中国番茄黄化曲叶病毒诱导的硫黄素酶(Su)基因沉默植株中病毒组分中的DNAmβ和1.7A,片段大小分别为500bp、1300bp。测序结果证明是相应基因的部分片段。【结论】该方法的材料不需要使用液氮,可以单人大批量提取,并在基因沉默的番茄植株中能稳定而准确的规模化PCR检测。  相似文献   

小桐子基因组DNA的提取及ISSR-PCR反应体系的优化   总被引：3，自引：0，他引：3  

欧文军  李开绵  王文泉 《中国农学通报》2008,24(5):409-413

为从小桐子嫩叶中提取高质量的基因组DNA.采用改良CTAB法提取的基因组DNA通过OD260/OD280比值测定,琼脂糖凝胶电泳和ISSR-PCR扩增检测,结果表明改良CTAB法提取的DNA纯度高.可作为ISSR分子标记的模板.同时,采用正交设计的方法,对影响小桐子ISSR-PCR反应体系中的4个因素(引物、Taq DNA Polymerase、10xBuffer(含Mg2 )、dNTPs)在3个水平上进行优化试验.建立了适合小桐子的既稳定又能扩出最多数量谱带的ISSR最优反应体系,即20μl的反应体系中含有30ng模板DNA、0.2mmol/L dNTP、0.3 U Taq酶Polymerase、0.8μmol/L Primer、3.0hanoi/L10×Buffer(含Mg2 ).  相似文献   

新疆贝母DNA提取及ISSR-PCR体系的建立与优化     

王果平  樊丛照  李晓瑾  朱军 《种子》2012,31(8):27-30,35

目的:从新疆贝母干叶片中提取高质量的DNA,建立ISSR-PCR体系并进行优化。方法:通过改进的CTAB法提取基因组DNA;综合利用单因素实验和L9(34)正交实验2种方法,对镁离子、dNTP、模板DNA含量、TaqDNA聚合酶量、引物浓度等因素进行优化,并采用温度梯度筛选引物的退火温度。结果:新疆贝母20μL ISSR-PCR最适反应体系dNTP为0.3 mmol/L,Mg2+为2.0 mmol/L,模板浓度为40～100 ng/(20μL),引物为1.2 mmol/L,Taq DNA聚合酶为1.0 U/20μL,引物UBC 859的最适退火温度为50.7℃。结论:此提取方法得到的DNA纯度高,ISSR-PCR扩增效果显著,为新疆贝母种质资源鉴定、遗传多样性分析奠定研究基础。  相似文献   

苦瓜基因组DNA的提取及ISSR扩增体系的优化   总被引：2，自引：1，他引：1  

田丽波  谷幸幸杨衍商桑  司龙亭 《中国农学通报》2013,29(4):88-93

为了快速获取高质量的苦瓜基因组DNA,以便进行苦瓜白粉病抗性基因分子标记研究,比较了不同的DNA提取方法、不同部位的苦瓜叶片提取基因组DNA的产量和质量,探究了苦瓜基因组DNA提取的最佳方法和叶片的最适部位;研究了ISSR-PCR的退火温度,并采用正交设计法对影响ISSR-PCR的Mg²⁺、dNTPs、Taq酶、模板DNA以及引物浓度等5个因素进行了优化。结果表明,采用改良CTAB法从苦瓜顶端嫩叶中提取的基因组DNA OD260/OD280值在1.8~1.9之间,OD260/OD230值为2.0左右,对DNA样品进行琼脂糖凝胶电泳检测,主带清晰,降解较少,产量和纯度均较高,效果较好。优化后的ISSR-PCR反应体系为：2.5μL 10×PCR buffer,2.5 mmol/L MgCl₂,250μmol/L dNTPs,10 ng模板DNA,0.75 U Taq酶,引物浓度0.7μmol/L,反应总体积为25μL,引物UBC826最佳退火温度为53℃。该体系在多次重复中均能获得良好的扩增结果。苦瓜基因组DNA提取的最佳方法为改良CTAB法,最适合的部位为顶端嫩叶。  相似文献   

基于SRAP分析的盘龙参DNA提取     

李家敏  周秀玲  喻鹏 《种子》2012,31(12):32-34,46

以盘龙参为材料,采用CTAB法提取基因组DNA,探讨SRAP-PCR反应体系中模板DNA浓度对扩增的影响。结果表明:该CTAB法提取基因组DNA的OD260/OD280为1.81,浓度为4.35μg/μL。该CTAB法提取的基因组DNA纯度好,片段完整,无降解;在20μL反应体系中,模板DNA浓度为3.0 ng/μL时,重复性和稳定性较好,适于SRAP-PCR技术。  相似文献   

珍珠黄杨DNA的提取方法比较及ISSR反应体系的优化   总被引：4，自引：1，他引：3  

吕乐燕  季孔庶  黄焱 《分子植物育种》2007,5(1):145-149,150

为从珍珠黄杨幼叶中提取高质量的总DNA,比较了1%CTAB、2%CTAB、4%CTAB和1.5%SDS 4种DNA提取方法.结果表明:2%CTAB提取的DNA A260/A280值最好,ISSR-PCR扩增效果最佳,是有效提取珍珠黄杨基因组DNA的方法.并在此基础上,以(CT)8G为引物,采用单因素实验法,确立了适合珍珠黄杨的ISSR-PCR反应体系:在总体积20 μL的反应体系中,含30 ngDNA模板,2.0 mmol/LMg2 ,0.30μmol/L引物,0.20 mmol/L dNTPs,1 U Taq酶.  相似文献