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为建立鹅细小病毒(GPV)检测方法,本研究以兔抗GPV IgG为捕获抗体,抗GPV单克隆抗体为检测抗体,通过方阵试验确定了兔抗GPV IgG最适包被浓度为16 mg/L,抗GPV单克隆抗体最佳工作浓度为10.8 mg/L,酶标二抗最佳稀释倍数为1∶4 000,建立了检测GPV单抗双夹心ELISA方法,对GPV检测灵敏度达0.312 mg/L.用该法对延边某养鹅场疑似发生小鹅瘟病的252只病死鹅进行检测,结果阳性率为75.79%,与病毒中和试验方法的检测结果符合率迭91.11%.本研究建立的单抗双夹心ELISA方法为GPV的检测和区城流行病学调查提供了一种简便快速的血清学诊断方法. 相似文献
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制备了两种鹅霍乱菌苗，分别接种两组试验鹅。同时建立了ＥＬＩＳＡ检测免疫鹅血清抗体方法，并与攻毒试验进行了比较，结果表明，ＥＬＩＳＡ与攻毒试验结果基本一致，可用于鹅霍乱菌苗免疫效果的评价。 相似文献
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以纯化的鹅副黏病毒NP蛋白为包被抗原,建立了检测鹅副黏病毒NP蛋白抗体的间接ELISA方法,并确定了间接ELISA的最适反应条件：抗原包被浓度为1.0μg/mL,血清稀释度为1∶200,兔抗鹅IgG辣根过氧化物酶标记抗体稀释度为1∶2 000,抗原和血清、血清和二抗均于37℃反应1 h,底物于37℃显色15 min。此间接ELISA方法的特异性强、重复性好。应用该方法对试验鹅血清进行检测,以HI试验为参照。经统计学处理后,比较了两方法测得的抗体效价,分别建立了各组鹅群的回归方程。显著性检验证明,这两种方法检测的抗体效价呈显著相关关系。 相似文献
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鹅细小病毒PCR快速检测方法的建立及应用 总被引：1，自引：0，他引：1
鹅细小病毒病是由鹅细小病毒（Goose parvirus GPV）引起的雏鹅的一种急性或亚急性的败血性传染病,主要侵害4～20日龄的雏鹅,而且鹅细小病毒病有30日龄后发病的,发病日龄有所推后。关于鹅细小病毒的检测,现已建立了许多方法,并且得到了较广泛的应用。主要有琼脂扩散试验、ELISA、免疫荧光抗体试验、黄牛精子抑制试验、中和试验等方法。自1995年Zadori等人发布了鹅细小病毒B株的全基因组序列之后,关于GPV分子生物学的研究生要集中在小鹅瘟保守抗原基因片段的克隆表达的研究。PCR作为一种新的实验技术,在分子生物学研究和临床诊断上都发挥着极其重要的作用,该方法具有灵敏度高、快速特异、操作简便等优点。本研究旨在建立鹅细小病毒PCR快速检测方法。 相似文献
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小鹅瘟血清学和分子生物学诊断方法 总被引：2，自引：0，他引：2
小鹅瘟(goose plaque)又称鹅细小病毒感染(goose parvovirus infection,GPVI),是由鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)引起的主要侵害30日龄以内雏鹅的一种急性、高度接触性、败血性传染病,传染性强且死亡率高.小鹅瘟具有典型的临床特征和病理变化,临床上可根据病鹅的临床症状和病理变化作出初步诊断,但确诊需进行实验室确诊.目前,用于小鹅瘟病原或抗体检测的主要方法有病毒的分离与鉴定、中和试验、琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验、反向间接血凝试验、免疫酶琼脂扩散试验、免疫荧光技术和聚合酶链式反应等.本文主要对近年来上述诊断方法的研究状况进行了综述,为临床小鹅瘟病的诊断提供了有益的参考. 相似文献
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布鲁氏菌病的诊断主要采用细菌学和血清学方法,但因细菌学方法费时、费力、危险性高,血清学方法便成为布鲁氏菌病诊断的主要方法。本研究利用RBPT、SAT、CFT、i-ELISA和c-ELISA检测试剂盒对270份牛血清样品进行检测,评价不同检测方法对我国布鲁氏菌病的诊断价值。试验结果表明:RBPT检测为阳性的样品数量最多;SAT与CFT两种试验方法差异显著,漏检率可达23.17%~24.39%;i-ELISA、c-ELISA方法与RBPT的符合率、阳性检出率均高于SAT和CFT;i-ELISA、c-ELISA方法与SAT和CFT两种方法综合判定结果无显著差异;i-ELISA与c-ELISA两种检测方法无显著差异。 相似文献
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为建立鹅圆环病毒(GoCV)抗体的检测方法,本研究通过原核表达重组核衣壳(Cap)蛋白,将纯化的该重组蛋白作为ELISA检测的包被抗原,利用交叉反应性,以羊抗鸡IgG(HRP-IgG)作为二抗,经反应条件的优化,建立了检测鹅血清GoCV抗体的间接ELISA方法。确立的ELISA反应最适条件为:抗原包被浓度为2.05μg/mL,待检血清稀释度为1∶50,HRP-IgG稀释度为1∶2000,待测血清和二抗均于37℃反应1.5h,底物于室温显色10 min。经38份阴性血清检测确定阴阳性临界值为0.25。特异性试验结果显示,该方法与大肠杆菌、新城疫、禽流感H5和H9、小鹅瘟、鹅副粘病毒抗原阳性血清均无交叉反应;重复性试验结果显示,其批内和批间变异系数均小于10%。应用该方法检测了从4群GoCV PCR检测阳性种鹅群采集的血清,结果显示其血清阳性率在60.0%～90.9%。本实验建立的间接ELISA方法具有较好的特异性和重复性,为进一步开展GoCV流行病学调查提供了一种便捷可靠的手段。 相似文献
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HA/HI和ELISA方法检测金钱豹血中猫瘟热抗体的比较 总被引：1，自引：0，他引：1
猫瘟热(Feline d istemper)是由猫细小病毒引起的一种以发热、白细胞显著减少、呕吐和腹泻为主要特征的传染病。该病主要感染猫科和鼬科多种动物,具有高度接触传染性,其中以幼小易感动物的发病率和死亡率为最高。由于该病对野生动物的威胁不像犬瘟热那样有较大的危害,对该病的检测诊断手段报道也不多见。试验采用HA/HI和ELISA法对成都动物园12只金钱豹血中抗体进行了检测,现报道如下。1材料与方法1.1材料金钱豹血清样品,来自成都动物园;诊断抗原,由四川农业大学预防兽医系微生物实验室保存的猫瘟热病毒(Feline d istemper virus,FPV)… 相似文献
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伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是由疱疹病毒科的伪狂犬病毒引起的一种急性传染病,在世界各地广泛流行.在我国,本病对猪的危害很严重,引起仔猪的高发病率,成年猪症状轻微,常呈现隐性带毒,成为新的传染源,用血清学方法检测动物血清中伪狂犬病病毒抗体,在伪狂犬病的诊断和流行病学调查及疫苗的免疫效果上有一定意义.为了有效控制和消灭此病,急需快速、准确、敏感性高、特异性强、便于广泛推广应用的诊断方法和疫苗免疫效果的检测方法.本实验试图建立一种以ELISA试剂盒形式能检查出猪血清中伪狂犬病病毒抗体的方法,以便进一步调查猪伪狂犬病的流行情况和疫苗的免疫效果. 相似文献
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应用GPV VP3基因重组原核表达产物建立检测抗体的ELISA方法研究 总被引：5，自引：0，他引：5
利用鹅细小病毒（GPV）VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg／mL，其中间接-ELISA 100μL／孔、Dot-ELISA 5μL／点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅IgG的工作浓度是1：200，检测血清的最适稀释度是1：400，阳性判定标准为OD492≥0．20，且P／N≥2．0。用此方法检测弱毒疫苗免疫血清，其抗体滴度在1：400～1：51200。Dot-ELISA的结果与间接-ELISA的结果一致。 相似文献