共查询到20条相似文献，搜索用时 125 毫秒
1.
《畜牧与饲料科学》2017,(4)
为提高新城疫病毒荧光RT-PCR检测灵敏度,对柱式提取法提取新城疫病毒核酸的裂解液(异硫氰酸胍)、洗液1(盐酸胍)浓度进行了优化;探索Triton-100和EDTA对病毒裂解效果的影响;采用荧光RT-PCR检测方法比较优化后的柱式提取法和Trizol经典法提取新城疫病毒核酸的效率。结果显示,柱式提取法提取新城疫核酸裂解液(异硫氰酸胍)的最佳浓度为5 mol/L,洗液1(盐酸胍)最佳浓度为5.5 mol/L;将20 mmol/L EDTA加入裂解液对新城疫病毒核酸的提取有抑制作用,将0.8%Triton-100加入裂解液能提高核酸提取效率;优化后的柱式提取法比经典Trizol提取法提取效率高。该试验优化了适合从新城疫病毒中高效提取核酸的方法。 相似文献
2.
为比较不同核酸提取方法检测禽流感病毒敏感性的差异,将 H5N1禽流感抗原做10－2～10－10稀释,分别用 Trizol 法、磁珠法和膜吸附法提取上述抗原稀释度核酸模板,采用荧光 RT-PCR 对其进行评价。结果表明,在不同稀释度的抗原的检测中,3种核酸提取方法以膜吸附法提取效率最高,其依次为磁珠法、Trizol 法,经方差分析,3种核酸提取方法之间存在显著性差异（P＜0．05）。说明 3种核酸提取方法提取效率存在显著差异,核酸提取效率的高低影响禽流感病毒荧光 RT-PCR 检测的敏感性,建议实验室根据实际情况选择核酸提取的方法。 相似文献
3.
为了解广东江门地区活禽交易市场禽流感隐性带毒情况,自2011年1月至201 3年12月,每月2次到活禽交易市场采集样品,应用实时荧光RT-PCR方法检测禽流感病毒核酸.结果显示,该地区活禽交易市场A型流感病毒核酸阳性率逐年增高,主要受低致病性禽流感病毒污染.低致病性禽流感隐性带毒现象主要发生在鸽、鹌鹑和鹧鸪等珍禽上. 相似文献
4.
5.
为监测河南省高致病性禽流感免疫抗体和野毒感染情况,笔者按照《河南省2022年动物疫病监测与流行病学调查计划》的要求,采用HI试验检测禽流感免疫抗体,采用荧光RT-PCR方法检测病毒核酸,在全省开展禽流感专项监测工作。结果表明,河南省高致病性禽流感免疫抗体群体合格率为93.2%,禽流感H5亚型平均个体抗体合格率为94.04%,H7N9亚型平均个体抗体合格率为96.32%。不同地区的禽流感H5亚型和H7N9亚型免疫抗体合格率均>90%,种禽场、商品代场和屠宰场采集的血清样本免疫抗体合格率均在92%以上。未检出H5亚型和H7亚型禽流感病毒核酸。共检出76份禽流感病毒H9亚型阳性样本,阳性率为2.07%。结果表明,河南省高致病性禽流感整体防控效果良好,免疫抗体水平均高于国家标准;未检出高致病性禽流感病毒,但有低致病性禽流感感染的现象。本次调查将为河南省进一步做好禽流感防控工作提供数据支撑。 相似文献
6.
《畜牧兽医科技信息》2015,(8)
为了验证荧光RT-PCR方法检测H7N9亚型禽流感病毒的可行性,应用建立的荧光RT-PCR方法检测H7N9亚型禽流感抗原、H9亚型禽流感抗原、H5亚型禽流感抗原、新城疫抗原评估检测方法的特异性,检测不同稀释度的H7N9亚型禽流感抗原,并用建立的方法检测采自三鸟批发市场100份泄殖腔、喉拭子。结果是建立的荧光RT-PCR方法,H7体系能检测出1:10-10抗原稀释度,N9体系能检测1:10-9抗原稀释度,对H9亚型禽流感抗原、H5亚型禽流感抗原、新城疫抗原无交叉反应;检出100份泄殖腔、喉拭子结果均为阴性。结果表明,荧光RT-PCR方法H7N9亚型禽流感病毒具有快速、灵敏、特异的特点,适合对禽类的大规模监测。 相似文献
7.
为了诊断昆明市某土杂鸡(阉鸡)养殖场疫病类型,采集病鸡喉气管、肺脏、脾脏等组织样品,混合研磨后提取病原核酸,通过RT-PCR对新城疫、禽流感、H5亚型禽流感、H9亚型禽流感、传染性支气管炎、传染性喉气管炎等家禽呼吸系统疫病病原核酸进行检测。检测结果为禽流感、H9亚型禽流感和鸡传染性喉气管炎病原核酸阳性,诊断该病例为H9亚型禽流感和传染性喉气管炎混合感染所致。 相似文献
8.
9.
2022年7月青海湖国家级自然保护区周边部分湿地内发现候鸟棕头鸥异常死亡,采样并经实时荧光定量RT-PCR方法检测诊断其死因为疑似H5亚型高致病性禽流感感染所致,国家禽流感参考实验室对病毒进行了分离培养,确诊候鸟因感染H5N1亚型高致病性禽流感而死亡。 相似文献
10.
致鸡产蛋下降禽病原的检测基因诊断芯片的研制及临床应用 总被引：1，自引：0，他引：1
本试验研究的目的是利用RT-PCR技术扩增出新城疫病毒(NDV)、低致病性禽流感病毒(AIV H9)、传染性支气管炎病毒(IBV)、减蛋综合征(EDS)、传染性喉气管炎病毒(ILT)、鸡毒支原体(MG)各一段保守序列,以纤维素酯膜作为生物芯片制作的基质,通过微量点样技术制作基因芯片(gene chip)。从可疑病料中提取组织核酸,通过掺入法bio-11-dUTP标记,对杂交信号的强弱检测来实现对生物样品的高效分析诊断。 相似文献
11.
本试验旨在提高鸡传染性法氏囊卵黄抗体防制鸡传染性法氏囊的效果,比较不同提纯方法对鸡传染性法氏囊高免卵黄抗体效价的影响。制备高免蛋并测定其效价,在实验室通过直接离心法、酸化水提取法、氯仿提取法、聚乙二醇法4种方法分别对高免卵黄抗体提取及抗体效价检测。试验结果表明,自制卵黄抗体效价为1:64;直接离心法的抗体效价为1:128,酸化水提取法的抗体效价为1:16,氯仿提取法抗体效价为1:256,聚乙二醇法的抗体效价是1:32。试验结果显示,使用氯仿提取法后检测的抗体效价最高,是临床提取抗体的常用方法。 相似文献
12.
13.
为建立一种直接从乳样中快速提取细菌DNA的方法,试验通过人工制备8个倍比稀释细菌的乳样,检测了Chelex-100法提取3种奶牛乳房炎主要致病菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌)DNA进行PCR扩增的敏感性,并与苯酚—氯仿法进行了比较分析。结果显示,以Chelex-100法提取乳样中细菌DNA进行PCR扩增具有较高的敏感性,所检测金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌的最小浓度分别为103、102、102 CFU/mL;而使用苯酚—氯仿法提取乳样中各细菌DNA的PCR敏感性均为104 CFU/mL。综上所述,Chelex-100法提取乳样细菌DNA的PCR敏感性可以满足临床检测奶牛乳房炎的需要,显现了简单快速、经济、无污染的优点,为从乳样中直接提取细菌DNA提供了新的思路,对PCR快速检测乳房炎致病菌具有重要意义。 相似文献
14.
15.
16.
高质量DNA的提取是开展分子生物学研究的重要环节。针对梨组织中含有大量多糖、多酚等影响DNA提取质量的次生代谢产物的特点,本研究以梨叶片、果皮和果肉为材料,开发了一种新的基因组DNA提取方法——N-月桂酰肌氨酸钠法,并分别与常用的试剂盒及CTAB法进行比较分析。对三种方法提取DNA的总量、浓度及OD值等进行检测分析,结果表明：相比试剂盒及CTAB法,N-月桂酰肌氨酸钠法不需水浴加热,步骤少,操作简单,提取的DNA纯度、浓度均有较大提高,并且适用于大片段DNA的提取。因此,N-月桂酰肌氨酸钠法是一种可靠的高效获得梨基因组高质量DNA的新方法。 相似文献
17.
本试验比较了几种提取微生物固体发酵代谢物的方法,旨在筛选出一种尽可能多保留了代谢物的方法.试验采用热带假丝酵母固体发酵棉粕源底物,以液相色谱串联质谱( LC-MS)为分析平台,分别采用50％冷甲醇溶液(甲醇法)、酸性甲醇-乙腈溶液(酸性甲醇-乙腈法)和50％乙腈溶液(乙腈法)提取发酵代谢物.结果表明:采用酸性甲醇-乙腈法、乙腈法和甲醇法分别提取出1 831、1 522和1 262种代谢物,提取效率表现为酸性甲醇-乙腈法＞甲醇法＞乙腈法.本试验中3种方法相比,酸性甲醇-乙腈法提取的代谢物种类最多,提取效率最佳,是微生物固体发酵代谢物提取的有效方法. 相似文献
18.
为快速获得高质量的柑橘黄龙病（HLB）植物样品DNA,本研究在传统CTAB法基础上,结合热萃取技术,建立了一种简便、快速提取HLB植物样品DNA的CTAB简化法。与Solarbio植物基因组DNA提取试剂盒和传统CTAB提取法相比,该方法所需时间短,1~2 h即可完成整个提取过程,获得的HLB植物样品DNA质量高、产量多。同时比较了三种方法制备模板时黄龙病病原菌和其他柑橘病原菌的PCR检出率,CTAB简化法和传统CTAB法检出率一致,试剂盒稍低,表明本研究建立的CTAB简化法可用于柑橘DNA病害PCR检测DNA模板的制备。本研究研发的HLB植物样品DNA提取方法优势明显,适用于大量病样的快速检测。 相似文献
19.
【目的】 探究水热回流法提取蛹虫草培养残基中活性成分虫草素的最佳工艺参数。【方法】 选取液料比、提取次数、提取温度、提取时间4个因素进行单因素试验和正交试验,并通过高效液相色谱法（HPLC）测定虫草素含量,确定水热回流法提取蛹虫草培养残基的最佳工艺参数。【结果】 方法学验证结果表明,蛹虫草培养残基中虫草素含量的HPLC测定方法精密度、重复性、稳定性相对标准偏差（RSD）均<2%,准确度RSD为2.64%,标准曲线线性相关性高。正交试验结果显示,影响水热回流法提取效果的因素依次为提取时间、提取次数、液料比、提取温度,其中提取时间和提取次数对提取物虫草素含量均有显著影响（P<0.05）,提取温度和液料比影响不明显（P>0.05）。单因素试验和正交试验结果表明,蛹虫草培养残基的最佳提取工艺参数为：液料比25：1、提取次数5次、提取温度70 ℃、提取时间60 min,该提取条件下测得蛹虫草培养残基中虫草素含量为1.48 mg/g。【结论】 采用本研究确定的水热回流法最佳工艺参数能有效提取蛹虫草培养基活性成分,且操作简单实用,提取物活性成分得率稳定,为后续蛹虫草培养残基产品开发提供参考依据。 相似文献