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本试验旨在建立N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc) IgY抗体的制备及鉴定方法。通过碳二亚胺法将Neu5Gc和载体蛋白进行偶联,制备Neu5Gc人工完全抗原,用制备的完全抗原免疫海兰褐蛋鸡制备Neu5Gc-IgY抗体,经ELISA检测分析鉴定抗体活性。经紫外光谱扫描、琼脂糖凝胶电泳法初步判断Neu5Gc人工完全抗原制备成功,获得的特异性Neu5Gc-IgY抗体经ELISA检测分析,首次免疫后第7天产生抗体,抗体效价呈动态变化,随着免疫次数的增多,血清效价和抗体效价逐步上升,至初次免疫后63 d达到高峰,效价达1:10 000,停止加强免疫后抗体效价可持续一个月左右,1号鸡产生的IgY抗体具有很好的抗原竞争活性,获得竞争回归方程y=30.28x+16.923,线性系数R2=0.9581。以上结果表明,本试验制备的Neu5Gc IgY抗体取得了理想效果,为红肉、牛奶及肿瘤组织中Neu5Gc的检测奠定了基础。 相似文献
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抗CP型、NCP型牛病毒性腹泻病毒高免卵黄抗体的制备 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究采用致细胞病变（cytopathic,CP）型牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus,BVDV）标准毒和非致细胞病变（noncytopathic,NCP）型新疆优势毒株免疫产蛋鸡,用改良PEG法提取卵黄抗体(IgY),并对提取的IgY采用SDS-PAGE检测纯度,间接ELISA检测免疫后每隔7 d的抗体效价,并测定所得抗体对NCP型BVDV的中和效价。结果表明,用该法提取的IgY纯度较高;间接ELISA结果证明,经过4次免疫后,抗CP型BVDV的效价达到1∶32000,抗NCP型BVDV的效价达到1∶40000,3个月后再次检测,卵黄抗体效价未见明显下降。最后一次免疫14 d的抗体对NCP型BVDV的中和效价达到1×10-3。 相似文献
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选取150日龄健康产蛋母鸡40羽,肌肉注射鸡新城疫Lasota疫苗2倍剂量/羽,10 d后再注射鸡新城疫油乳剂灭活苗4倍剂量/羽,自由采食和饮水。分别收集免疫前、免疫后10、20、30、40和50 d,母鸡所产鸡蛋提取卵黄抗体,测定不同时间卵黄抗体效价。结果发现免疫前卵黄抗体效价较低,鸡新城疫Lasota疫苗免疫后卵黄抗体效价开始缓慢升高,鸡新城疫油乳剂灭活苗加强免疫后卵黄抗体效价大幅度提高,并在二免后20 d卵黄抗体效价达到高峰,维持一段时间后卵黄抗体效价开始逐步下降。表明收集鸡新城疫疫苗二免后20 d左右的鸡蛋提取卵黄抗体效价高。 相似文献
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抗奶牛乳腺炎多价卵黄抗体的制备及含量测定 总被引：2，自引：1，他引：1
本研究的目的是制备抗奶牛乳腺炎主要致病菌的多价卵黄抗体并检测特异性抗体的含量。采用金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和大肠杆菌混合抗原免疫产蛋母鸡。通过水稀释法分离卵黄抗体。采用ELISA法检测抗体效价和特异性抗体含量。多价抗体与大肠杆菌的结合效价最高可达25600,与金黄色葡萄球菌和无乳链球菌的结合效价为12800。每毫升卵黄液中大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和无乳链球菌特异性卵黄抗体（egg yolk immunoglobulin,IgY）的最高含量分别为2.13、2.01和1.92 mg。免疫后特异性抗体含量随时间变化趋势与抗体效价变化趋势一致。 相似文献
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《中国家禽》2017,(12)
研究采用重组酵母乙肝疫苗免疫蛋鸡,探索特异性卵黄免疫球蛋白(IgY)的产生和变化规律。产蛋母鸡经免疫后每周收集所产蛋,分别提取IgY,测定血清抗体效价与抗体的产生量,ELISA定期检测卵黄中的抗体效价变化,Western blotting检测总IgY含量。以未免疫鸡IgY作阴性对照,作血清抗体与IgY变化的动态曲线。取三次免疫后的蛋鸡,解剖分离出各级卵泡,观察各级卵泡发育程度。ELISA结果显示:随着卵泡的生长,卵泡细胞分泌的IgY聚集到卵泡卵黄,卵泡卵黄中IgY的含量在逐渐增加。Western blotting显示:随免疫次数的增加,IgY含量增加。首免后第3天血清抗体被检出,以后逐渐上升,2周后达到高峰,维持到第8周后逐渐下降,到第15周仍可检出抗体。本研究表明:用重组酵母乙肝疫苗免疫蛋鸡,卵黄和鸡血清中可持久保持高效价的特异性抗体,血液中的抗体传递到卵黄需要一定时间,卵黄IgY动态变化规律与血清抗体基本一致。 相似文献
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《中国兽医学报》2016,(1)
为研究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p54抗原蛋白及其相应卵黄抗体的生物学特性,特制备ASFV p54蛋白及相应鸡卵黄抗体。可溶性表达制备高纯度ASFVp54抗原蛋白,并制定合理的免疫程序,免疫产蛋母鸡,定时采血并收集鸡蛋。卵黄液经粗提取后二次盐析,制备特异性卵黄抗体。酶联免疫吸附试验(ELISA)结果显示,在首次免疫后7d后的血清中即可检测出相应抗体,14d后在卵黄中提取到相应抗体,35d后IgY效价达到峰值。经SDS-PAGE检测,制备所得纯度达到90%,得率在8.8g/L以上。Western-blot检测结果显示,纯化的IgY具有高度的特异性。 相似文献
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抗幽门螺旋杆菌卵黄抗体的制备及其体外抑菌试验 总被引：2，自引：0，他引：2
试验以幽门螺旋杆菌(helicobacter pylori，HP)全菌灭活抗原对150日龄伊沙褐壳母鸡进行首免，165日龄二免，180日龄三免，于首免后即开始收集鸡蛋，利用凝集实验测定卵黄中的抗体效价。结果表明：每间隔15天，采取两次加强免疫方法，可有效地引起免疫应答。母鸡在初免45d后，抗体效价可达到1：1024，同批样品在此水平可维持达60d以上(效价大于1：128)，然后抗体效价呈缓慢下降趋势，经130d后，抗体效价下降至1：8。体外抑菌实验表明，高免卵黄具有明显的抑制HP生长的活性。 相似文献
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《畜牧与兽医》2017,(11):75-81
为了研究牛支原体P48抗原蛋白的免疫学功能及相应卵黄抗体的生物学特性,探究其抗体效价随免疫时间的变化规律,试验采用牛支原体P48蛋白疫苗免疫健康产蛋母鸡,定时采血并收集鸡蛋,用水稀释法结合硫酸铵盐析法制备特异性卵黄抗体,利用间接ELISA法检测血清抗体(IgG)和卵黄抗体(IgY)效价。结果表明,低、中、高剂量组均能诱导蛋鸡产生有效免疫应答,血清抗体效价与卵黄抗体效价的变化趋势基本一致,但卵黄抗体的产生滞后于血清抗体,在首次免疫后8~10周Ig Y效价达到峰值,其中中剂量组的免疫效价最高,最高效价为1:212。经SDS-PAGE检测,制备所得的纯度达86%以上,得率在8.6 mg/m L以上。说明采用牛支原体P48蛋白免疫蛋鸡可制备高效价、高纯度的抗牛支原体P48蛋白卵黄抗体,从而为卵黄抗体在牛支原体的检测与防控方面的研究奠定了基础。 相似文献
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本试验采用辛酸去脂、饱和硫酸铵溶液盐析法提纯鹅卵黄抗体IgY,采用SDS-PAGE方法分析其纯度;用纯化后的IgY免疫试验兔,收集血清,测定血清抗体效价;采用辛酸-硫酸铵法结合Protein G树脂亲和层析法纯化免血清IgG,用改良的高碘酸钠法进行辣根过氧化物酶标记,直接ELISA法测定标记物效价.结果表明,提纯的鹅卵黄IgY浓度为11.5 mg/mL,纯度约为92％;血清琼脂扩散抗体效价为1∶32;Western Blotting试验证明,兔血清中含有抗鹅卵黄抗体IgY重链及轻链的特异性抗体;直接ELISA法测得标记物效价为1:1 100. 相似文献
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AIV H5N1亚型高免卵黄抗体的制备及理化特性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
应用禽流感灭活疫苗(H5N1,Re-1株)免疫20周龄的高产来航蛋鸡,制备抗AIV H5N1高免卵黄抗体(IgY).在比较了3种缓冲液对IgY活性的影响后,确定采用水稀释法提取IgY.同时在模拟的胃肠内环境下对IgY的各种理化性质进行了试验.结果表明,纯化的IgY在pH 2.0和胃蛋白酶终浓度为1.5 mg/mL的环境下,以及在pH 8.0和胰蛋白酶终浓度为2.5 mg/mL的环境下,37℃作用1 h后其ELISA抗体效价均无明显下降;同时,热稳定性试验表明,IgY在60℃以下作用30 min,其ELISA抗体效价也无明显下降;中和试验测得IgY的中和效价为1:640,具有较好的中和H5N1亚型AIV的能力.以上结果表明,本试验所制备的抗禽流感H5N1亚型高免IgY具有较高的抗体效价和中和效价,同时还具有一定的耐蛋白酶消化的作用,可用于H5N1亚型禽流感的预防和治疗. 相似文献
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抗牛多杀性巴氏杆菌高免卵黄抗体IgY的制备及间接血凝检测方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究通过自制牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌灭活菌苗免疫产蛋鸡,采用卡拉胶结合硫酸铵沉淀法提取卵黄抗体IgY,并采用间接血凝方法检测抗体效价。结果表明,抗原致敏红细胞的最佳浓度是800μg/mL,免疫后第7周抗体效价达到高峰,效价为1：1024,高效价持续5周开始下降,测定提取的IgY浓度为8.258mg/mL,无菌检测及动物安全性实验表明制备的卵黄抗体安全可靠。本研究制备了抗牛多杀性巴氏杆菌卵黄抗体,为防治由荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌所致的犊牛肺炎提供了新的手段。 相似文献
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两种检测免疫猪伪狂犬病血清抗体的方法比较 总被引：1，自引：0，他引：1
用2批伪狂犬病活疫苗分别免疫40～50 kg的健康敏感猪,每批疫苗免疫4头,每头肌注1头份.分别于免疫10 d、20 d后采血,分离血清.采用中和试验和乳胶凝集试验(LAT)两种方法检测血清抗体.结果显示:免疫10 d和20 d后,伪狂犬病中和抗体效价和LAT效价的几何平均值(GMT)分别为9.8、2.0,11.7、2.0;43.5、4.8,61.8、5.3.免疫20 d后,血清中和抗体效价为免疫10 d后的4倍以上,而血清LAT效价为免疫10 d后的2.5倍左右. 相似文献
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张皓淳 《国外畜牧学(猪与禽)》2022,42(1):32-36
为了制备非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p30蛋白卵黄抗体,研究卵黄抗体的生物活性。试验构建了p ET-32a-p30原核表达载体,制定了科学的免疫程序和样本采集方法。提取卵黄液,进行二次盐析,得到对应的卵黄抗体。用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA)测定卵黄抗体效价,用免疫印迹（Westernblotting）技术对其生物活性进行鉴定。ELISA试验表明：首次免疫p30蛋白7d后,能够在蛋鸡的血清中检测出抗体（Ig Y）,14d后在卵黄中能够提取到Ig Y,35d后Ig Y效价达到最高值。IgY具备和哺乳动物产生的IgY不同的生物活性,并可具有较高的特异性和稳定性,在免疫学研究中具有重要的价值。利用Ig Y进行实验检测,具有突出优势。通过抗原即ASFV p30蛋白免疫蛋鸡,分离提纯免疫蛋白,检测其生物活性,可用于鉴定非洲猪瘟。 相似文献
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抗鸡新城疫卵黄抗体IgY的研制 总被引：9，自引：2，他引：7
产蛋母鸡经新城疫灭活抗原重复免疫后，所产生的高免卵黄中，特异性抗体的HI效价可达到12log2以上。从高免卵黄中分离提纯的特异性新城疫抗体，病毒中和试验结果表明，具有明显的中和病毒的作用，特异性病毒中和指数可达到630957以上。使用纯化后的高免卵黄抗体(IgY)安全、高效、无任何不良反应。 相似文献