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1.
分泌抗肝片吸虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 总被引：3，自引：0，他引：3
用纯化的肝片吸虫可溶抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与骨髓细胞融合，经ＥＬＩＳＡ筛选和３次克隆化培养后获得３株分泌抗肝片吸虫单克隆抗体的杂交瘤细胞。３株杂交瘤细胞分泌的特异性单克隆抗体经ＥＬＩＳＡ检测均属ＩｇＧ１亚类，上述杂交瘤细胞经反复冻存、复苏和连续传代培养，证实其分泌抗体的性质稳定。 相似文献
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<正> 用杂交瘤细胞生产的单克隆抗体纯度极高,具有对一个抗原决定簇发生反应的特异性。这是因为分泌抗体的B细胞与鼠骨髓瘤细胞(SP~2/O)杂交时,只能有一个抗原决定簇与SP~2/O细胞结合成杂交瘤,分泌该种抗体。一次杂交可以得到分泌不同抗体的杂交瘤。通过克隆化把它们分离开后,即可用来生产不同性质的单克隆抗体。 杂交瘤细胞可以在人工培养基中培养,传代,冷冻保存和复活利用。单克隆抗体技术发展极快,目前已出现规范化的系统装置CYTOSTAT。这个系统可以连续培养杂交瘤细胞,只需不断添加培养液,也可以随时取样测定抗体滴度和收取抗体。 相似文献
3.
为制备抗流产嗜性衣原体MIP蛋白单克隆抗体,以纯化的重组MIP蛋白为抗原,免疫Balb/c小鼠后经细胞融合,间接ELISA法筛选阳性细胞克隆并进行有限稀释克隆化,建立了两株分泌抗MIP蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,将其分别命名为M1,M2。间接ELISA测杂交瘤细胞上清抗体效价为1∶1600、相对亲和力为10μg/m L;Western blot鉴定两株单克隆抗体能特异识别MIP重组蛋白;细胞核型实验鉴定单抗符合杂交瘤细胞的特性;单克隆抗体亚类检测试剂盒鉴定两株单抗免疫球蛋白类型均为Ig G1,轻链为κ链;体外中和试验表明,两株单抗均能有效阻断感染。抗MIP单克隆抗体的成功制备将为建立诊断、治疗方法及MIP蛋白的进一步研究奠定基础。 相似文献
4.
为筛选犬程序性死亡受体1(cPD-1)单克隆抗体,以原核表达并纯化复性的cPD-1胞外区蛋白为靶抗原免疫BALB/c小鼠,应用单克隆抗体杂交瘤细胞技术和间接ELISA方法,经3轮轮筛选和克隆化,获得1株能稳定分泌抗cPD-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株1F9。间接ELISA检测显示1F9杂交瘤细胞株连续传代培养能稳定分泌单克隆抗体,效价达到1∶2048,亚型鉴定重链为IgG1,轻链为κ;以HEK293细胞表达cPD-1胞外区蛋白为检测抗原,Western-blot和间接免疫荧光试验进行鉴定,结果显示1F9单克隆抗体能特异性结合cPD-1胞外区蛋白。本研究通过小鼠杂交瘤技术成功筛选到1株鼠源cPD-1单克隆抗体。 相似文献
5.
通过对ELISA的抗原最适浓度、抗原包被时间,被检物和酶结合物的感作时间等因素的测定,建立了检测抗鼻疽菌核糖体单克隆抗体杂交瘤细胞的方法。先后对两次细胞融合所产生的124孔杂交瘤细胞进行了检测,有69孔为阳性。对一些阳性孔进行克隆化培养,筛选出一株较稳定的分泌高效价抗体的细胞株。对此细胞株五次克隆所产生的233个克隆孔检测,均为阳性。由此证明,建立的方法快速、敏感、特异性和重复性好,适于杂交瘤细胞的筛选。 相似文献
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贝氏隐孢子虫单克隆抗体的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
作者采用杂交瘤技术获得两株分泌贝氏隐孢子虫特异性抗体的杂交瘤细胞－２Ｈ１１和２Ｃ７，经３～４次克隆化后，阳性率均达１００％。染色体数分别平均为９４和９５。经分析，两株单克隆抗体识别抗原分子区的相关位点，为今后进行贝氏隐孢子虫的诊断及免疫学研究奠定了基础。 相似文献
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本文报道了用马鼻疽菌菌体抗原免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与NS—1骨髓瘤细胞在聚乙二醇(PEG)的作用下融合,接种于40孔微量培养板,用微量间接血凝和ELISA进行了测定。在应用鼻疽补体结合反应抗原进行间接血凝测定中,出现4个阳性孔,其中2B_1孔的血凝价为1:64。经扩大培养,细胞冻存,并利用有限稀释法经过2次克隆化。克隆化后的杂交瘤细胞接种BALB/C小鼠,腹水效价达1:4096,并对接种鼠诱发的病变进行了病理形态学及电子显微镜观察。用琼脂双扩散及免疫电泳发现杂交瘤分泌的单克隆抗体对兔抗鼠IgG 只出现一条沉淀线,进一步鉴定,证实属IgG_1亚类,染色体平均89条。经液氮冻存40余天,复苏后细胞活力为75％,细胞生长良好,仍有产生抗体的特性。 相似文献
9.
《中国兽医杂志》2014,(12)
为了制备脑心肌炎病毒(EMCV)的单克隆抗体,并对其进行鉴定。应用杂交瘤细胞技术,将灭活EMCV免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,HAT选择培养、间接ELISA法筛选和多次克隆化,筛选出稳定分泌抗猪EMCV的杂交瘤细胞株,并对其分泌的单克隆抗体进行了亚型、效价、特异性和细胞株染色体核型的分析。结果获得了1株能分泌抗EMCV单克隆抗体的细胞株,命名为EMCV Y1G9,其分泌的抗体亚型为Ig G2b类;腹水效价可达3.2×104;细胞株的染色体核型分析结果是染色体众数为92±2,单抗的特异性也较好。制备出了具有良好特异性和敏感性的抗EMCV的Mc Ab,为建立EMCV的特异性检测方法及该病的防制奠定了基础。 相似文献
10.
将抗原注入Balb/c小鼠体内诱导产生特异性B细胞,与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞,经筛选分离出单个杂交瘤细胞,将其扩大培养,最终分离纯化抗体。筛选出的单个杂交瘤细胞具有骨髓瘤细胞和特异性B细胞的双重特性,既能持续繁殖,又能分泌针对单一抗原表位的特异性抗体,即单克隆抗体。单克隆抗体具有便于制备、理化性质均一、生物活性单一、特异性强、易于标准化等优点。使用单克隆抗体,能提高免疫学检测和临床治疗的特异性和精确性,对生物、化学、医学、免疫学等领域有着重要的意义。1单克隆抗体在动物疾病治疗中的应用单克隆抗体的特性使其能… 相似文献
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抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的制备 总被引：1，自引：0，他引：1
本文主要论述了ＳＰ２／０骨髓瘤细胞与经传染性法氏囊病病毒三次免疫后的ＢＡＬＢ／Ｃ的小白鼠的脾细胞，在融合剂ＰＥＧ（ＭＷ４０００）的作用下，融合形成杂交瘤细胞，融合率可达９６％，将杂交瘤细胞上清液用ＥＬＩＳＡ法检测，其阳性率可达８０％，将阳性杂交瘤细胞进一步克隆化，进行抗体检测，阳性率可达９９％，单克隆产生的抗体经大量生产后，为以后的抗原血清型鉴定，抗独特型抗体疫苗的制备打下了基础。 相似文献
12.
以聚乙二醇(PEG,MW6000)沉淀法部分纯化的猪瘟兔化弱毒中国株(SFV-C)免疫BALB/C小鼠,取其脾脏制备脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经ELISA检测和有限稀释法克隆化筛选出9株对SFV特异的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞。它们产生的McAb仅对SFV-C株发生特异性反应,而与SFV-S及BV DV Oregon株不发生反应.相加试验表明,9个McAb分别针对不同的抗原决定簇。所有的McAb均不具有沉淀反应特性。 相似文献
13.
《中国兽医杂志》2017,(12)
制备猪程序性死亡因子-1(PD-1)单克隆抗体,鉴定其生物学特性。以表达纯化的猪程序性死亡因子-1(Programmed death-1,PD-1)胞外区重组蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠,用细胞杂交瘤技术将免疫BALB/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS0细胞融合,经多次克隆化培养,筛选分泌特异性抗猪PD-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。结果:获得1株可稳定分泌抗猪PD-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株2B5,Ig亚型为Ig G1,细胞上清和腹水效价分别为1∶1×212和1∶2.048×105,酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和Western-Blot结果表明,该株单抗能特异性识别重组猪PD-1胞外区蛋白,流式细胞术结果表明,该单抗可以结合猪外周血单核细胞上PD-1蛋白。结论:成功制备了1株分泌抗猪PD-1单抗的杂交瘤细胞株2B5,为研究猪PD-1/PD-L1通路在猪传染性疾病中的致病机制提供了有力的检测工具。 相似文献
14.
鸡贫血病毒是鸡传染性贫血病的病原体，它广泛存在于世界各地，成为危害养禽业的主要病原之一。鸡贫血病毒基因组含有3个开放阅读框架，分别编码分子量为51.6kDa（VP1）、24kDa（VP2）和13．6kDa（VP3）的3种蛋白质。本文将克隆化VP2基因亚克隆到PET-32a（＋）载体上并进行原核表达，用PET-32a（＋）表达的VP2融合蛋白免疫Balb/c小鼠，经过杂交瘤细胞的建立、融合细胞的筛选和克隆化培养，获得一株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为3C5。腹水单克隆抗体的ELISA效价为1：409600，经Western—blotting证明单抗3C5为针对VP2融合蛋白的单抗。为VP2融合蛋白的纯化和鸡贫血病毒的检测、鉴定和奠定了基础。 相似文献
15.
为了研究伪狂犬病毒gB基因的原核表达并制备其单克隆抗体,试验采用含有伪狂犬病毒(PRV)gB蛋白抗原表位的基因作为模板进行扩增,得到大小为588 bp的扩增产物,将其克隆到表达载体pET-32a(+)中,转化表达菌Transetta(DE3),经诱导表达得到目的蛋白;以纯化后的重组gB蛋白为抗原,免疫Balb/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞。结果表明:表达的重组gB蛋白约为44 ku,以包涵体形式存在,具有良好的反应原性;获得的2株杂交瘤细胞均能够稳定分泌抗gB蛋白的特异性单克隆抗体(McAb)。 相似文献
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将纯化后的猪瘟病毒免疫4只SPF级BALB/c小鼠,无菌取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经半固体培养基克隆化和间接ELISA筛选,最终获得了4株稳定分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。ELISA结果显示4株单克隆抗体效价均较高,并与其他病毒及PK-15细胞培养物无交叉反应。Western blotting结果证实3株单克隆抗体可特异性识别猪瘟病毒。间接免疫荧光试验可在细胞膜内观察到特异性绿色荧光,表明3株单克隆抗体与猪瘟病毒具有良好的反应性。该研究为猪瘟病毒新型诊断试剂开发奠定了基础。 相似文献
17.
以差速离心和密度梯度离心法纯化的新城疫病毒(NDV)F_(48)E_6株免疫接种 BALB/C 小鼠,取其脾脏制备脾细胞,与 SP2/0骨髓瘤细胞融合,经用 ELISA 检测和有限稀释法克隆化,筛选出3株对 NDV 特异的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞。其产生的 McAb 仅与 NDV 发生特异性反应。3个 McAb 分别属 IgG_1和 IgG_3,所有McAb 均不具有沉淀反应特性. 相似文献
18.
1975年德国学者Kohler和英国学者Milstein发明了杂交瘤技术。他们成功地将骨髓瘤细胞和产生抗体的B淋巴细胞融合为杂交瘤细胞，这种合成的杂交瘤细胞稳定、有致瘤性、能产生抗体，其分泌的抗体是由识别一种抗原决定簇的细胞克隆所产生的均一性抗体，故称之为单克隆抗体（简称单抗）。自从鼠源单抗之后， 相似文献
19.
赵化民 《中国预防兽医学报》1988,(6)
克隆化是杂交瘤技术中不可缺少的重要步骤。日的是挑选出生长快、形态好、分泌高效价抗体的杂交瘤细胞株。尽管克隆化培养的方法多很,但目前实验室内常用的操作是有限稀释法。当克隆化培养10～14天后,必须进行克隆挑选,目的在于选出由单一细胞增殖而成的单克隆细胞群,通过 ELISA 检测其抗体活性,确定扩大培养建株的对象。常规做法是,把在 CO_2培养箱内克隆培养10～14天的96孔细胞培养板,放在倒置显微镜下,逐孔观察。镜下看到,在一个培养孔内,仅有一个“磨菇状”细胞集团孔者,即为由单一细胞论性繁殖的单克隆杂交瘤孔,在特定的记录纸上记录,作为扩大培养和检测的对象。一个孔内含有个2“磨菇状”细胞团或以上者以及空白者为多克隆 相似文献
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1975年德国学者Kohler和英国学者Milstein发明了杂交瘤技术。他们成功地将骨髓瘤细胞和产生抗体的B淋巴细胞融合为杂交瘤细胞，这种合成的杂交瘤细胞稳定、有致瘤性、能产生抗体，其分泌的抗体是由识别一种抗原决定簇的细胞克隆所产生的均一性抗体，故称之为单克隆抗体（简称单抗）。自从鼠源单抗之后， 相似文献