乳酸菌食品级基因表达系统的研究进展   总被引：2，自引：0，他引：2  

王海英  祁克宗  彭开松 《上海畜牧兽医通讯》2008,(1):8-9

乳酸菌(lactic acid bacteria,LAB)是一类可发酵碳水化合物,并产生大量乳酸的革兰 氏阳性细菌的统称[1],因其在食品工业中应用广泛且对人和动物无致病性,被公认为是安全级(generally regarded as safe, GRAS)微生物.与大肠杆菌、酵母菌相比,乳酸菌的分子遗传学的研究起步较晚.近年来,乳酸菌分子生物学及作用机制的研究取得了重 大发展,加之乳酸菌的模式菌乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)的完整基因组已经测序完成 [2],这 为乳酸菌基因工程的发展和表达载体的构建奠定了基础,也为其在食品、医药工程及其改良 方面的应用提供了可能,因此乳酸菌食品级表达系统的构建及应用已成为该领域研究的前沿和热点.  相似文献   

食品级乳酸菌表达系统的研究进展     

王莹  胡桂学 《中国畜牧兽医》2010,37(7):80-82

乳酸菌以其安全、操作简单等优点被广泛用于表达外源基因,在食品、农业及医药工程领域,具有广阔的应用前景,开发了一系列乳酸菌食品级基因表达系统。目前已建立了糖诱导表达系统、噬菌体φ31暴发式诱导表达系统、乳链球菌素调控表达系统、温控表达系统等。随着基因工程技术的发展, 以重组乳酸菌作为基因工程菌的时代将要到来。  相似文献   

基因工程重组乳酸菌防控动物疫病的研究进展     

刘乃芝  亓秀晔  郭杨丽  程福亮  徐海燕  谷巍  单宝龙  王春凤 《中国畜牧兽医》2020,47(4):1199-1208

大多数传染性病原体通过黏膜表面进入宿主,因此除了传统诱导系统免疫的注射疫苗外,还应该开发能诱导黏膜免疫的疫苗,从而在黏膜侵入点建立第一道防线,阻止病原体侵入机体。乳酸菌是人和大多数动物肠道内常见的益生菌,具有营养、免疫、抗感染等作用。自20世纪90年代以来,乳酸菌便作为食品级载体用作外源基因的表达,其可刺激机体产生针对其表达的外源蛋白的免疫反应,因而基因工程重组乳酸菌可作为潜在的黏膜免疫候选疫苗。乳酸菌作为疫苗载体具有许多有吸引力的优势：使用方式简单、非侵入性（通过口腔或鼻内）、能接受基因修饰且遗传稳定、表达蛋白不需纯化、成本相对较低、安全性能最高、在体内长期存活并不断表达外源蛋白、单次接种即可产生持久的免疫应答等。目前,选择正常菌群的乳酸菌为载体,构建重组乳酸菌已在预防细菌、病毒、寄生虫等病原感染宿主方面迅速开展起来,将它们用于预防相应疫病模型中均已取得了较好的防治效果。作者就近5年来基因工程重组乳酸菌的制备及其在防控动物疫病方面的研究进展作一综述。  相似文献   

基因工程重组乳酸菌防控动物疫病的研究进展     

《中国畜牧兽医》2020,(4)

大多数传染性病原体通过黏膜表面进入宿主,因此除了传统诱导系统免疫的注射疫苗外,还应该开发能诱导黏膜免疫的疫苗,从而在黏膜侵入点建立第一道防线,阻止病原体侵入机体。乳酸菌是人和大多数动物肠道内常见的益生菌,具有营养、免疫、抗感染等作用。自20世纪90年代以来,乳酸菌便作为食品级载体用作外源基因的表达,其可刺激机体产生针对其表达的外源蛋白的免疫反应,因而基因工程重组乳酸菌可作为潜在的黏膜免疫候选疫苗。乳酸菌作为疫苗载体具有许多有吸引力的优势:使用方式简单、非侵入性(通过口腔或鼻内)、能接受基因修饰且遗传稳定、表达蛋白不需纯化、成本相对较低、安全性能最高、在体内长期存活并不断表达外源蛋白、单次接种即可产生持久的免疫应答等。目前,选择正常菌群的乳酸菌为载体,构建重组乳酸菌已在预防细菌、病毒、寄生虫等病原感染宿主方面迅速开展起来,将它们用于预防相应疫病模型中均已取得了较好的防治效果。作者就近5年来基因工程重组乳酸菌的制备及其在防控动物疫病方面的研究进展作一综述。  相似文献   

乳酸菌作为传递抗原物质的基因工程疫苗载体的研究进展     

余丽芸  王君伟 《黑龙江畜牧兽医》2009,(6)

乳酸菌是一类重要的食品级工业菌株。将乳酸菌作为传递抗原物质的基因工程载体制备口服疫苗可激发黏膜局部免疫反应和系统免疫反应,增强对胃肠道、呼吸道、生殖道和乳腺病原微生物的抗感染能力,有效预防普通疫苗不能完全解决的传染病。对乳酸菌口服疫苗的研究是近年来的热点,已在此方面取得了突破性成果。  相似文献   

动物黏膜免疫疫苗基因表达系统—乳酸菌的研究进展     

王振华   《中国畜牧兽医》2010,37(10):194-196

乳酸菌是人及动物肠道中重要的益生菌,被公认为安全级(generally recognized as safe,GRAS)微生物。乳酸菌乳链菌肽诱导表达载体（Nisin controlled expression system,NICE）是近几年发展起来的一种表达系统,目前国内外学者利用乳酸菌NICE为载体来表达抗原蛋白研制黏膜免疫疫苗,刺激动物机体黏膜免疫系统产生高效的应答反应,试验证明抗原蛋白能在乳酸菌中正确表达,并能诱导机体产生分泌性抗体IgA(sIgA),同时激活机体系统免疫功能,具有重要开发前景。  相似文献   

动物黏膜免疫疫苗基因表达系统一乳酸菌的研究进展     

王振华 《中国畜牧兽医》2010,37(10)

乳酸菌是人及动物肠道中重要的益生菌,被公认为安全级(generally recognized as safe,GRAS)微生物.乳酸菌乳链菌肽诱导表达载体(Nisin controlled expression system,NICE)是近几年发展起来的一种表达系统,目前国内外学者利用乳酸菌NICE为载体来表达抗原蛋白研制黏膜免疫疫苗,刺激动物机体黏膜免疫系统产生高效的应答反应,试验证明抗原蛋白能在乳酸菌中正确表达,并能诱导机体产生分泌性抗体IgA(sIgA),同时激活机体系统免疫功能,具有重要开发前景.  相似文献   

多粘类芽孢杆菌纤维素酶基因bglA,bglB和EG在乳酸菌中的分泌表达     

刘原子  王艳  万学瑞  王川  吴润  刘岗  吴自祥 《草原与草坪》2017,37(1)

通过PCR扩增获得乳酸菌(Lactobacterium lactis MG1363)的usp45基因,将其克隆到乳酸菌(L.lactis)食品级表达载体pNZ8048中获得分泌型表达载体pNZ-X;然后将多粘类芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)β-葡萄糖苷酶基因bglA、bglB及内切β-葡聚糖酶基因EG分别连接载体pNZ-X,获得重组质粒pNZ-X::bglA,pNZ-X::bglB和pNZ-X::EG,将3个质粒电转导入L.lactis NZ9000,得到重组乳酸菌L.lactis NZ9000/pNZ-X::bglA、L.lactis NZ9000/pNZ-X::bglB和L.lactis NZ9000/pNZ-X::EG,并测定分泌性表达的BglA,BglB和EG的酶活性。结果显示:3个酶大小均在50kU;DNS法测定酶活力表明重组菌株的酶活力显著低于多粘类芽孢杆菌的酶活力(P0.05),但具有一定的活性;刚果红染色结果也表明重组乳酸菌分泌产生的酶可产生明显的水解圈。试验为重组纤维素酶在食品级菌株中重组表达提供了一种可行的方案,为秸秆的降解研究奠定了基础。  相似文献   

乳酸乳球菌食品级双筛选标记的分泌型表达载体的构建     

苏少锋  萨初拉  王潇  吴青海  其布日  高娃  赵俊利  刘红葵  王蕴华  呼和 《畜牧与饲料科学》2020,41(2):66-77

纤维素酶在畜牧业、饲料工业、生物技术和生物能源利用方面均有广泛应用。纤维素酶基因工程作为研究的重点,可以提高酶产量和稳定性,具有广阔的应用前景。通过利用基因工程技术改造pMG36e载体,成功构建出具有双筛选标记的外分泌表达纤维素酶的食品级重组质粒,完成载体构建;然后将该质粒转化到粪肠球菌19855株并实现基因表达,经测定,分泌的纤维素酶活力为0.92 U/mL。该研究结果为后续食品级工程菌的进一步研制奠定了基础。  相似文献   

乳酸乳球菌高效电转化方法的建立     

任大勇  李昌 《中国兽药杂志》2012,46(1):5-9

以乳酸菌诱导型表达质粒pNZ8149为载体,Lactococcus lactisNZ3900为受体,采用电转化方法研究电场强度、电击杯规格、受体菌株的生长状态、感受态细胞浓度及分装体积、质粒浓度、电击脉冲时间以及电击杯使用次数等因素对电转化效率的影响。结果表明：在固定电阻200Q、电容25μF条件下,收获对数生长前期的乳球菌制作感受态细胞,并以80μL体积分装,采用2mm规格的电击杯,加入浓度为1．2μg／μL的质粒,在电场强度和脉）中时间分别为10kV／cm和5ms的条件下完成电击转化。转化后的菌液恢复培养2h后涂板计数,转化效率最高可以达到2．6×10^4CFU／μgDNA。研究结果为进一步构建乳酸菌高效表达系统和食品级基因工程乳酸菌株奠定了方法基础。  相似文献   

绿汁发酵液及青贮苜蓿中乳酸菌的分离筛选及鉴定     

赵芸君  李学森  董志国  安登弟 《中国畜牧兽医》2011,38(1):29-32

苜蓿较难青贮，用青贮接种剂可提高苜蓿青贮的质量。本研究以pH的降低程度及稳定性，乳酸积累量多，产生香甜气味为指标，通过连续限制性培养，从绿汁发酵液、青贮苜蓿中共筛选出3株乳酸球菌和3株乳酸杆菌；该6株菌在72 h内均能使MRS液体培养基pH下降至3.2左右并维持稳定，在MRS固体培养基中培养散发出香甜气味，此6株菌可供开发苜蓿青贮接种剂作进一步研究。  相似文献   

乳酸菌发酵豆粕、菜籽粕和棉籽粕过程中总糖和还原糖含量变化的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

魏炳栋  陈群  于秀芳  刘海燕 《吉林畜牧兽医》2010,31(2):47-49

利用DNS法对乳酸菌发酵豆粕、菜籽粕和棉籽粕的总糖和还原糖含量进行测定,研究了不同发酵时间这3种粕类饲料总糖和还原糖含量的变化,得出乳酸菌具有较强的-半乳糖苷酶活性,能够降解总糖使得还原糖含量增加,发酵72h时,总糖的含量分别下降了17.4%、33.26%和27.35%,而还原糖含量增加了6.47倍、10.15倍和1.73倍。  相似文献   

基因盒-整合子系统介导的细菌多重耐药性   总被引：1，自引：0，他引：1  

丁良君  张秀英  付锐  崔晓文 《中国兽药杂志》2006,40(3):32-35

细菌多重耐药性的传播和扩散变得越来越严重，给临床治疗带来诸多困难，使得抗菌药物在兽医临床上的应用引起很大的争议。细菌可通过多种方式逃避抗菌药物的治疗，最主要的是从外源获得耐药基因，基因盒-整合子系统是近年来的研究热点，细菌通过整合子系统捕获外来的耐药基因，并在位于整合子上游的启动子的作用下得到表达，使细菌具有耐药及多重耐药性。本文主要对基因盒-整合子系统的耐药机制进行探讨。  相似文献   

Listeria monocytogenes and Salmonella spp. in raw milk produced in Brazil: occurrence and interference of indigenous microbiota in their isolation and development     

Nero LA  de Mattos MR  Barros Mde A  Ortolani MB  Beloti V  Franco BD 《Zoonoses and public health》2008,55(6):299-305

This study aimed to verify the occurrence of Listeria monocytogenes and Salmonella spp. in raw milk produced in Brazil. On account of the poor microbiological quality of this product, possible interference from the indigenous microbiota in these pathogens was also evaluated. Two-hundred and ten raw milk samples were collected in four important milk-producing areas in Brazil, tested for L. monocytogenes and Salmonella spp. presence, and for enumeration of indicator microorganisms: mesophilic aerobes, total coliforms and Escherichia coli. The interference of the indigenous microbiota in the isolation procedures was also tested, as well the frequency of naturally occurring raw milk strains with antagonistic activity against both pathogens. The pathogens were not isolated in any raw milk sample, but poor microbiological quality was confirmed by the high levels of indicator microorganisms. When present at high levels, the indigenous microbiota generated an evident interference in the methodologies of L. monocytogenes and Salmonella spp. isolation, mainly when the pathogens appeared at low levels. Three-hundred and sixty raw milk strains were tested for antagonistic activity against both pathogens, and 91 (25.3%) showed inhibitory activity against L. monocytogenes and 33 (9.2%) against Salmonella spp. The majority of the antagonistic strains were identified as Lactic Acid Bacteria species, mainly Lactococcus lactis subsp. lactis and Enterococcus faecium, known by antimicrobial substance production.  相似文献   

芽孢乳酸菌的作用机制及在水产养殖中应用前景   总被引：1，自引：0，他引：1  

苏琳  黄权 《吉林畜牧兽医》2012,33(5):25-28,32

芽孢乳酸菌是一种内生孢子的活菌制剂,与其他益生菌相比具有更好的抗逆性、稳定性、耐热性、易保存等特性。芽孢乳酸菌既可以产乳酸又能产生芽孢,具有乳酸菌和芽孢杆菌的双重优势。因此,芽孢乳酸菌是一种优质的微生态制剂,能够在水产养殖中有更好的应用前景。本文主要是对芽孢乳酸菌在水产养殖的应用及其机制做综述,并对芽孢乳酸菌发展前景及存在的问题作探讨。  相似文献   

猪RUVBL2真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达     

徐桢  陈云  卫恒习  李莉  孟立  张守全 《中国畜牧杂志》2020,(2):146-150

RUVBL2(RuvB-like 2)蛋白是进化上高度保守AAA+(ATPases Associated With Diverse Cellular Activities,AAA)家族成员之一,CHO(Chinese Hamster Ovary)细胞被广泛地用于表达重组DNA蛋白。为探究猪睾丸组织的RUVBL2基因是否能够在CHO细胞中表达,本实验以猪睾丸组织的cDNA为模板,PCR扩增RUVBL2目的基因,并将其克隆至pIRES2-EGFP(Mammalian Expression Vectors pIRES2-EGFP)载体上,进一步转化到DH5α中,再进行PCR、酶切及测序鉴定;将重组质粒转染到CHO细胞中,再进行荧光、RT-PCR、Western blot检测。结果显示:PCR、酶切及测序都证实了RUVBL2基因正确地插入到了载体质粒pIRES2-EGFP的多克隆位点;荧光、RT-PCR、Western blot也证实了RUVBL2基因在CHO细胞中的成功表达。本实验成功构建了猪的pIRES2-EGFP-RUVBL2真核表达载体,并证实了猪睾丸组织中的RUVBL2基因能够在CHO细胞中表达。  相似文献   

猪ICOS基因部分cDNA的克隆与序列分析     

李晓丽  何万领  邓昌彦  熊远著 《中国畜牧杂志》2009,45(23)

研究旨在对猪T细胞诱导型刺激物(ICOS)基因的cDNA序列进行克隆与分析。根据已报道的人ICOS基因cDNA序列设计引物,首次从猪脾脏组织总RNA中扩增出ICOS基因编码区全长cDNA序列,克隆于pMD18-T载体后进行测序并进行序列拼接,运用生物信息学分析DNA序列。结果表明:该基因编码区全长630bp,编码210个氨基酸,包含5个外显子。该序列与人全基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性分别为80%和85%;与狗和小鼠的推导氨基酸序列的同源性分别为81%和75%。这为进一步研究该基因的结构特点和功能奠定了良好基础。  相似文献   

潮霉素抗性基因筛选标记质粒的构建及LL37的表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

徐义兵  刘娜  黄毓茂 《中国畜牧兽医》2012,39(4):86-90

为了实现以潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)为选择标记的质粒在毕赤酵母中高效表达抗菌肽LL37,在pGAPZαA质粒的基础上,通过EcoRⅤ、BamHⅠ双酶切将Zeocin抗性基因替换成潮霉素磷酸转移酶基因,获得的表达质粒命名为pGAPHαA。根据LL37氨基酸序列,通过毕赤酵母密码子偏嗜性改造,合成的LL37基因片段克隆到pGAPHαA质粒中,获得重组分泌型表达质粒pGAPHαA-LL37,线性化后电击转化毕赤酵母SMD1168,经潮霉素B筛选阳性转化子。72 h表达上清LL37蛋白含量约为167 μg /mL,表达产物耐热性好,对大肠杆菌DH5α、猪链球菌最小抑菌浓度分别为2.94、7.06 μg/mL。  相似文献