牛腺病毒载体研究进展     

邱薇  夏咸柱  范泉水  扈荣良  孙阳  杨美峰 《动物医学进展》2003,24(6):11-14

动物腺病毒与人腺病毒具有相似基因组结构 ,用其构建的动物腺病毒载体可将外源基因转移到人体细胞内表达 ,却又不能在其中复制繁殖 ,且人体内不存在针对它们的免疫应答 ,有望代替人腺病毒作为基因治疗和基因免疫的载体 ,目前已构建了多种动物腺病毒载体。文章综述了近年来牛腺病毒载体构建的一些研究进展。  相似文献   

禽腺病毒载体研究进展     

赵莉  周洁  高诚 《动物医学进展》2012,(11):99-103

人腺病毒载体被广泛地用作转基因工具。然而,人体内预先存在的针对人腺病毒的抗体影响了转基因的效率,阻碍了这些载体在临床上的应用。避免宿主免疫反应的途径之一是开发能将基因转导至人细胞的动物腺病毒载体,而禽腺病毒载体是目前动物腺病毒载体研究中较多的一种。禽腺病毒载体还可插入并表达病原的保护性抗原基因,用于疫苗研制。对禽腺病毒的分子生物学和载体疫苗的深入研究,将对禽类疫病预防起到重要作用。论文详细叙述了禽腺病毒的基因组结构特点以及禽腺病毒载体的研究现状,为研究者提供参考。  相似文献   

腺病毒载体及其在口蹄疫疫苗研究中的应用     

孙普  卢曾军  刘在新 《动物医学进展》2007,28(8):59-64

腺病毒载体具有高效传递和表达外源基因的能力,常被用作体内和体外基因转移或表达的工具.体内同源重组和体外直接连接是目前构建腺病毒重组体的两种主要方式.口蹄疫病毒基因重组腺病毒活载体疫苗多是以缺失E1和E3基因编码区的人5型腺病毒AdHu5为载体进行构建,有些载体还缺失了E4基因编码区.研究证实,已构建的口蹄疫重组腺病毒疫苗对猪、牛都有一定的免疫保护效果,在口蹄疫预防研究领域具有很好的应用前景.  相似文献   

腺病毒载体及其在基因治疗中的应用     

王素华 《中国畜牧兽医》2009,36(9):119-121

腺病毒载体的研究近十几年来得到迅速发展,人们对腺病毒载体的研究兴趣主要源于使用腺病毒载体进行基因治疗,通过修饰病毒载体中与外源基因结合的相应部位,提高基因传递的效率,从而使腺病毒载体在基因治疗中的作用不断完善。人腺病毒C组血清2型(Ad2)和5型(Ad5)载体拥有很多特点,被广泛应用于体外与体内的基因传递中。作者对人腺病毒C组血清2型（Ad2）和5型（Ad5）感染的生物学特性,腺病毒载体的设计、构建、生产及腺病毒载体的应用进行了论述。  相似文献   

表达鸡传染性支气管炎病毒S1基因重组腺病毒的构建     

耿合员  孙元  韩宗玺  邵昱昊  仇华吉  孔宪刚  刘胜旺 《中国预防兽医学报》2011,33(3)

为构建表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)主要免疫原S1蛋白的重组腺病毒,本研究以复制缺陷型人5型腺病毒为载体,以IBVCK/CH/LHLJ/04V株S1基因为外源插入靶基因,通过细菌内同源重组法构建了一株稳定表达IBVS1蛋白(90ku)的重组腺病毒,命名为rAdV-S1。通过PCR鉴定、间接免疫荧光及western blot检测证实S1蛋白在重组腺病毒中获得表达。对构建的重组腺病毒和亲本腺病毒的生长动力学分析表明,该重组病毒的毒价为108.25TCID50/mL,并且两者在生长动力学方面无显著差异。本研究为动物试验和该重组腺病毒免疫特性的研究奠定基础。  相似文献   

腺病毒的生物学特性   总被引：1，自引：0，他引：1  

戴志红  谢磊  赵耘 《中国兽药杂志》2007,41(2):36-39,52

腺病毒在人和动物中广泛存在，是迄今在形态结构、基因组成和复制机理等生物学特性方面研究得最为详尽的病毒之一。就应用而言，对腺病毒载体进行的各种研究均是目前兽医学、医学和生物学的热门课题。本文就腺病毒生物学特性作一综述。  相似文献   

产肠毒素大肠埃希菌STa-K99融合蛋白重组腺病毒载体的构建及表达     

邓光存  包少文  杨继辉  曾瑾  李武  刘晓明 《动物医学进展》2013,34(10)

为构建产肠毒素大肠埃希菌(ETEC) STa-K99融合蛋白重组腺病毒载体Ad STa-K99,通过PCR技术分别克隆了STa及K99基因,并与腺病毒穿梭质粒连接构建了穿梭质粒pAd5 STa-K99,将pAd5STa-K99和骨架质粒(含GFP基因)分别用Pac Ⅰ酶切线性化,利用LipofectamineTM LTX&-PLUS共转染293细胞进行同源重组包装重组腺病毒,通过PCR及Western blot对重组腺病毒进行鉴定.结果显示,重组腺病毒Ad5 STa-K99构建正确并表达融合蛋白,且表达的融合蛋白能够被抗体所识别,为研制由ETEC引起的新生动物腹泻重组腺病毒载体疫苗奠定了基础.  相似文献   

DNA疫苗的动物试验研究及其应用前景   总被引：3，自引：0，他引：3  

刘业兵  杨培豫  郑明 《中国兽药杂志》2004,38(5):42-46

介绍了DNA疫苗在动物试验研究方面的现状,如:动物免疫试验中动物模型的选择、疫苗的接种途径及其选择、免疫学效果评价、安全性评价和DNA疫苗研究存在的问题,以及DNA疫苗在控制畜禽疾病方面的应用前景和发展趋势.  相似文献   

表达鸡TRAIL基因的重组5型腺病毒构建     

金天明  郑世民 《中国预防兽医学报》2009,31(7)

本研究采用RT-PCR从鸡脾细胞扩增到TRAII,基因,测序验证后,将扩增的TRAIL基因开放阅读框克隆到pShuttle-CMV上,与pAdeasy-1载体在BJ 5183细菌内同源重组,获得含有TRAIL基因的5型腺病毒重组质粒,进而将Pac Ⅰ线性化重组质粒转染AD-293细胞,收获重组腺病毒.并对后者进行RT-PCR扩增,获得TRAIL基因片段,经western blot鉴定显示构建的重组腺病毒可表达TRAIL蛋白,表明TRAIL基因在构建的重组腺病毒rAd5-TRAIL中得到表达.本研究为下一步的动物试验和研究TRAIL基因的抑瘤作用奠定了基础.  相似文献   

腺病毒表达载体研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

丁长根  刘惠莉 《动物医学进展》2007,28(10):64-67

基因治疗和基因免疫技术已成为解决生物学领域问题的重要手段之一,多种治疗因子的设计、研发和应用,促进了更多高效转移载体的发展.腺病毒载体由于宿主范围广泛和对人体的低致病性、病毒颗粒比较稳定、基因组较少发生重排等优点,已经成为最常用的病毒载体之一.但由于细胞的靶向性和宿主的免疫反应限制了腺病毒载体的应用和发展,针对这种情况,对腺病毒载体进行了不断改进和完善,其潜在的应用价值也得到了广泛关注.文章综述了腺病毒载体的性质、研发过程及应用前景,为进一步优化和利用腺病毒表达载体提供参考.  相似文献   

狂犬病毒中和线性表位重组犬腺病毒2型载体的构建     

徐慧娟  王晓虎  李忠  刘晔  张守峰  王颖  袁子国  徐振波  扈荣良 《畜牧与兽医》2008,40(6):1-4

  相似文献   

CAG和MLP启动子控制的重组禽腺病毒构建   总被引：1，自引：1，他引：0  

张明明  秦爱建  庄骁颖  王小辉 《畜牧与兽医》2010,42(3)

根据鸡胚致死孤儿病毒(CELOV)的序列设计引物,通过PCR方法扩增了禽腺病毒FAVI-JS株的晚期启动子(MLP),序列与CELOV的MLP同源性为99%。分别构建了MLP和商品化启动子CAG控制的表达增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因的禽腺病毒转移载体。通过载体与禽腺病毒FAVI-JS株在原代鸡胚肾细胞内进行同源重组,分别获得了MLP和CAG控制的表达eGFP的重组禽腺病毒,为探讨不同启动子对禽腺病毒活载体疫苗免疫效果的影响提供了条件。  相似文献   

猪圆环病毒2型ORF2重组腺病毒的构建与鉴定及其免疫效果研究   总被引：5，自引：2，他引：3  

刘根梅  谭实勇  陈瑞爱  黄红亮  郑念广  罗满林 《中国畜牧兽医》2010,37(5):60-64

为了研究含有猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)的重组腺病毒作为基因工程疫苗的潜在应用价值,本试验根据GenBank中猪圆环病毒2型基因序列,设计了1对引物,用于猪圆环病毒2型ORF2基因的扩增。将目的基因T/A克隆后,亚克隆至腺病毒转移载体pShuttle-CMV,构建重组穿梭质粒pShuttle-CMV-ORF2。经PCR方法和限制性内切酶酶切法及测序证明该基因已成功连接后,重组腺病毒转移载体经PmeⅠ酶切线性化,在BJ5183细菌中与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组获得重组腺病毒质粒pAd-CMV-ORF2。经PCR方法和PacⅠ酶切方法及测序鉴定表明该重组腺病毒载体已构建成功。PacⅠ酶切线性化pAd-CMV-ORF2,脂质体法转染AD293细胞进行病毒的包装和扩增。PCR及RT-PCR、IFA、Western blotting检测目的基因及其表达。结果表明,本试验成功构建了重组腺病毒pAd-CMV-ORF2。3次噬斑试验纯化重组腺病毒,测得其TCID50为10-8.75/0.1 mL。将重组腺病毒接种SPF级雌性BALB/c小鼠,用ELISA抗体检测试剂盒检测特异性抗体水平。小鼠免疫试验测得其特异性抗体水平较高,为PCV2重组腺病毒基因工程疫苗的进一步研究打下基础。  相似文献   

FOXL2基因重组腺病毒载体的构建及鉴定     

沈涛  李青旺  韩增胜  张彦朋 《黑龙江畜牧兽医》2012,(5):96-98,170

为了构建叉头框L2(Forkhead box L2,FOXL2)基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因复制缺陷型腺病毒载体,试验将克隆的FOXL2基因与IRES-GFP片段通过酶切、纯化等方法共同连接到pShuttle-CMV载体中,再与pAdEasy-1腺病毒质粒在BJ5183大肠杆菌中进行同源重组,得到复制缺陷型AD-FOXL2腺病毒载体,再用PacⅠ酶线性化后转染HEK293细胞,观察绿色荧光表达,并测量病毒效价。结果表明:将AD-FOXL2腺病毒载体用PacⅠ酶线性化后,得到1个大于23 kb的大片段和1个4.5 kb的特异性小片段,证明同源重组成功;将所得的腺病毒载体转染HEK293细胞,可以观察到GFP的表达,证明包装成功,并测得病毒效价为1×10-8.61/0.1 mLTCID50。  相似文献   

鹅细小病毒VP3与禽分枝杆菌副结核亚种hsp65融合基因真核表达载体的构建及鉴定   总被引：1，自引：1，他引：0  

张岩 《中国兽药杂志》2013,47(5):6-9

为了构建鹅细小病毒(GPV)的VP3与禽分枝杆菌副结核亚种(MAP)的hsp65融合基因重组真核表达载体,试验克隆了VP3和hsp65基因,并将二者先后插入真核表达载体pVAX1中,构建重组质粒pVAXl-VP3和pVAXl-hsp65-VP3.酶切和PCR鉴定表明表达载体构建正确,用脂质体将二者分别转染入Vero细胞中,间接免疫荧光检测其在细胞中的表达.结果显示,转染细胞表面可见绿色荧光,说明hsp65、VP3基因表达成功.试验为GPV的DNA疫苗研制及hsp65分子佐剂在动物医学中的应用奠定基础.  相似文献   

共表达O型FMDV衣壳蛋白和绿色荧光蛋白重组腺病毒的构建     

刘蒙蒙  杨德成  周国辉  梁特  于力 《中国预防兽医学报》2012,34(2):83-86

为构建表达O型口蹄疫病毒(FMDV)的P12A3C基因及GFP基因的重组腺病毒rAdV-P12aEGFP2a3C,本研究以FMDV的2A基因序列为Linker,将报告基因EGFP插入FMDV的P12A与3C之间。重组腺病毒感染HEK-293细胞后可以观察到绿色荧光,表明EGFP蛋白获得表达。应用FMDV的VP2单克隆抗体4B2对重组病毒感染细胞进行western blot检测,反应条带与FMDV衣壳蛋白VP0和VP3的分子量大小相符,表明FMDV的完整衣壳蛋白和3C蛋白酶也均获得表达,而且EGFP的插入并未影响P1蛋白的表达和3C蛋白酶对P1的正确切割。重组腺病毒的生长特性分析表明,EGFP的插入也未影响该重组腺病毒的增殖特性。上述研究结果显示,表达FMDV衣壳蛋白P12A3C的重组腺病毒可以作为载体,以2A蛋白作为Linker表达一个小分子蛋白,为改进以腺病毒为载体的口蹄疫基因工程疫苗提供了新思路。  相似文献   

Adenovirus-based oral vaccine for rabbit hemorrhagic disease     

Wang X  Qiu L  Hao H  Zhang W  Fu X  Zhang H  He S  Zhang S  Du E  Yang Z 《Veterinary immunology and immunopathology》2012,145(1-2):277-282

Vaccine antigens for rabbit hemorrhagic disease virus (RHDV) are currently derived from inactivated RHDV obtained from the livers of experimentally infected rabbits or from several recombinant immunogens. However, the application of these vaccine antigens has been restricted because of biosecurity and immunity characteristics. In the current study, a recombinant adenovirus expressing the RHDV capsid protein (VP60) was constructed and the expression of the recombinant protein was identified through western blot analysis using RHDV-positive rabbit sera. Eighteen rabbits were immunized by injection, direct oral instillation, or using bait. They were challenged with RHDV isolate three weeks after boost immunization. In all cases, the rabbits immunized with the recombinant adenovirus developed RHDV-specific antibodies and cell immune response. The rabbits injected with the recombinant adenovirus were completely protected against RHDV challenge. The adenovirus expression system may provide a strategy for the immunization of rabbits, particularly for the control of RHDV in wild rabbits.  相似文献   

表达猪流行性腹泻病毒S基因片段重组腺病毒的构建与免疫特性   总被引：1，自引：0，他引：1  

韦显凯  侯继波  姜平 《中国兽医学报》2008,28(10)

利用RT-PCR、同源重组等技术构建了含有猪流行性腹泻病毒(PEDV)S基因上3个片段的重组腺病毒质粒pAd-S98～638,pAd-S1～638,pAd-S49838～1384,经PacI酶切后转染HEK-293A细胞,3次噬宽纯化分别获得了重组腺病毒rAd-s498～638,rAd-S1～638,rAd-S498～1384.重组腺病毒于HEK-293A细胞连续传代至20代效价稳定,TCID50分别为每毫升10-6.29、10-5.75、10-6.5.应用猪流行性腹泻病毒阳性血清进行间接免疫荧光抗体试验,在3个腺病毒感染的HEK-293A细胞的胞质见有清晰荧光.将3个重组腺病毒分别免疫小鼠,结果均诱导产生较强的体液免疫应答.结果表明这3个重组腺病毒对S基因的3个片段均可成功表达,并具有较好的免疫原性,为PEDV重组腺病毒活载体疫苗的研究奠定了基础.  相似文献