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1.
大肠杆菌多重耐药调节基因AcrR和MarR突变 总被引：2，自引：0，他引：2
研究大肠杆菌多重耐药外输泵抑制基因AcrR和MarR突变对大肠杆菌多重耐药的调节机制。采用琼脂平板二倍稀释法测定环丙沙星、诺氟沙星、氯霉素、四环素、利福平、庆大霉素、大观霉素、阿米卡星、链霉素、阿莫西林等10种药物对临床分离的33株大肠杆菌和大肠埃希氏菌的标准菌株ATCC25922的最小抑菌浓度(MIC),从中筛选出7株多重耐药菌和2株相对敏感菌,并对这9株菌及标准菌ATCC25922的AcrR和MarR基因进行聚合酶链式反应(PCR)扩增并克隆后测序,分析DNA序列及氨基酸序列的突变情况。耐药菌和敏感菌均发现有部分菌株发生了不同程度的点突变。AcrR和MarR同时突变将更大限度的提高细菌的耐药性。 相似文献
2.
从89株临床分离鸭源大肠杆菌中选择5株氨基糖苷类高水平耐药菌,应用实时荧光定量RT-PCR方法测定其主动外排基因acrD mRNA水平,选用1株中介株、1株敏感株和大肠杆菌ATCC25922作为对照,分析其mRNA转录水平与耐药强度的相关性。结果显示,5株耐药菌的acrD mRNA相对表达量均高于中介株和敏感株,其相对表达量分别是2.00、1.96、2.22、1.84、4.39,敏感对照株为1.67,中介对照株为1.75,除4号菌株外,其余4株耐药菌相对表达量和标准菌株ATCC25922具有显著性差异;同是高度耐药的4号菌和5号菌存在较大差异,5号菌相对表达量是4号菌的2.39倍,这说明对氨基糖苷类不同耐药程度的菌株acrD基因的转录、表达存在差异,且与耐药水平呈正相关,但同时存在其他重要耐药机制介导氨基糖苷类耐药。 相似文献
3.
为检测不同耐药水平大肠杆菌的acrA和marA基因转录水平，阐明t耐药大肠杆菌株药物敏感性变化与acrA和marA的mRNA水平之间的关系。用定量RT—PCR的方法比较多重耐药菌株SEMR、单药耐药菌株SEICI和SEICH以及质控株ATCC25922的acrA和marA的mRNA水平。结果表明，acrAmRNA水平，SEMR均是SEICI、SEICH和ATcC25922的16倍；marA mRNA水平，SEMR是SEICH的4倍、SEICl和ATCC25922的8倍；SEICI和SEICH的acrA mRNA和marA mRNA水平与ATCC25922无明显差异；同一菌株acrA mRNA和marA mRNA水平的变化保持了较为稳定的一致性。因此认为，大肠杆菌多重耐药菌株SEMR的acrA mRNA和marA mRNA水平与其耐药水平存在相关性。 相似文献
4.
为阐明大肠杆菌耐药菌株药物敏感性变化与acrA和marA的mRNA水平之间的关系。用定量RT—PCR方法比较了多重耐药菌株、单药耐药菌株以及质控株ATCC25922的actA和marA的mRNA水平。结果。actA mRNA水平。多重耐药菌株SEMR是单药耐药菌株SEICI、SEICH和质控株ATCC25922的16倍；／natA mRNA水平。SEMR是SEICH的4倍、SEICI和ATCC25922的8倍；SEICI和SEICH的actA mRNA、marA mRNA水平与ATCC25922的无明显差异；同一菌株actA mRNA和marA mRNA水平的变化保持了较为稳定的一致性。结论：大肠杆菌多重耐药菌株的actA mRNA和marA mRNA水平与其耐药水平存在相关性。 相似文献
5.
实时荧光定量PCR检测多重耐药大肠杆菌AcrA基因mRNA表达水平 总被引：1，自引：0，他引：1
体外单一药物诱导标准大肠杆菌ATCC25922,获得了耐氯霉素（CHL,MIC≥256 mg/L）、耐环丙沙星（CIP,MIC≥256 mg/L）、耐水杨酸钠（SAL,MIC≥275 mg/L）、耐四环素（T,MIC≥512 mg/L）的菌株。选取ATCC25922株,4株中度耐药菌SAL（175）、CHL（64）、T（64）、CIP（128）,4株高度耐药菌SAL（275）、CHL（256）、T（512）、CIP（256）,和临床分离的3株耐药大肠杆菌H1、H9、H10,通过实时荧光定量RT-PCR方法检测外输泵AcrA基因的mRNA表达水平。系统自动分析软件显示,Ct值与标准质粒浓度的对数之间存在良好的线性关系,回归系数为0.992。检测结果表明：H10、CHL（256）、CIP（256）拷贝数最高,达1015拷贝/μL;T（512）、H9、T（128）、SAL（275）、H1为1014拷贝/μL;CHL（128）、T（64）、CHL（64）为1013拷贝/μL;ATCC25922为1012拷贝/μL。不同程度耐药株AcrA基因的表达量不同,临床分离株和诱导的各高耐药菌株均比ATCC25922株表达量高,且差异极显著（P≤0.01）。这说明不同耐药程度的11株菌cDNA的量存在差异,AcrA基因转录水平与耐药水平成正相关。 相似文献
6.
为研究大肠杆菌多重耐药调控基因rob与不同动物源性及多重耐药水平之间的关系，选取临床分离的不同动物源性大肠杆菌5株及大肠杆菌药敏质控株ATCC25922，在对其进行主要治疗药物耐药性检测的基础上，分别以其染色体DNA为模板，通过PCR反应扩增出大肠杆菌多重耐药调控基因rob，将该基因分别与克隆载体pMD18-T连接，连接产物转化至大肠杆菌JM109感受态细胞中，对经酶切与PCR反应鉴定为阳性的克隆质粒进行了核苷酸序列测定。测序结果表明：不同动物源性大肠杆菌的rob基因与Gen-Bank中该基因的核苷酸序列及所推导的氨基酸序列的同源性较高。不同源性大肠杆菌的rob基因的核苷酸序列与其动物源性有关，该基因的核苷酸序列的个别突变位点可能影响AcrAB外输泵的表达水平，进而影响其多重耐药水平。 相似文献
7.
为了探究高渗对多重耐药菌外排泵和外膜孔道蛋白基因表达及其生长的影响,试验应用生长曲线和相对适应性测定,对比考察不同盐胁迫条件对多重耐药大肠杆菌QL15和敏感大肠杆菌ATCC 25922的生长差异,采用RT-PCR方法考察2种盐胁迫条件下外排泵与外膜孔道蛋白基因表达差异。结果表明,大肠杆菌QL15为高水平多重耐药菌,其中对大观霉素和恩诺沙星耐药最为严重,可达耐药标准MIC的32倍;独立培养时大肠杆菌QL15对NaCl胁迫的敏感性大于大肠杆菌ATCC 25922,并且在6.0% NaCl胁迫下,大肠杆菌QL15在10 h内生长缓慢,但是在24 h细菌峰值浓度更高;混合培养时大肠杆菌QL15在6.0% NaCl胁迫时具有更高的适应性,在体外培养中更具竞争优势。大肠杆菌QL15共携带5大类、15种耐药相关基因,其中含8种外排泵基因和3种外膜孔道蛋白基因;大肠杆菌ATCC 25922在6.0% NaCl浓度下的5种基因表达量较3.5% NaCl均出现约50%的显著下调（P<0.05）,大肠杆菌QL15在6.0% NaCl浓度下除acrB、ompF基因下调外,其余3种外排泵与外膜孔道蛋白基因的表达量则显著上调（P<0.05）。推测大肠杆菌QL15对盐胁迫具有更高的适应性的原因可能与细胞膜相关蛋白的表达相关。 相似文献
8.
为研究大肠杆菌多重耐调控基因SdiA与不同动物源性及多重耐药水平之间的关系,选取,临床分离的不同动物源性大肠杆菌5株及大肠杆菌药敏质控株ATCC25922,在对其进行主要治疗药物耐药性检测的基础上,分别以其染色体DNA为模板,通过PCR反应扩增出大肠杆菌多重耐药调控基因SdiA,将该片段分别与克隆载体pMD18-T连接,连接产物转化至大肠杆菌JM109感受态细胞中,对经酶切与PCR反应鉴定为阳性的克隆质粒进行插入片段的核苷酸序列测定。测序结果表明不同动物源性大肠杆菌的SdiA基因的核苷酸序列及所推导的氨基酸序列与GenBank中该基因序列的同源性较高,不同源性大肠杆菌的SdiA基因的核苷酸序列及氨基酸序列变化与其动物源性无关,该基因的核苷酸序列及氨基酸序列的个别突变位点可能影响AcrAB-TolC外排泵的表达水平,进而影响其多重耐药水平。 相似文献
9.
DNA旋转酶基因gyrA中喹诺酮耐药决定区碱基变换在大肠杆菌对喹诺酮的耐药性方面起着十分重要的作用.采用PCR-SSCP(PCR-单链构象多态性)技术可对大肠杆菌gyrA基因QRDR的突变进行有效检测.本文以142株猪源致病性大肠杆菌氟喹诺酮药物敏感菌株为样本,测定了细菌对喹诺酮药的MIC值,结果表明142株猪源大肠杆菌对环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、氧氟沙星的耐药率分别为78.8%,56.3%,65.5%,76.8%.猪源大肠杆菌对氟喹诺酮药物的耐药率高,且耐药菌株MIC值较大.菌株WJPE2-1(对环丙沙星的NIC为0.5μg/mL)的诱导耐药试验,结果表明,在通过药物浓度梯度连续诱导过程中获得了MIC为2,8,64,128μg/mL的四株诱导菌株,诱导菌株4对ENR、NOR、OFL、CIP的MIC值分别增加到诱导前的32,128,128,256倍,且4株诱导菌株对CIP、ENR、NOR、OFL的MIC值均呈现递增.根据GenBank注册的大肠杆菌gyrA序列设计引物,横跨gyrA的第40和118密码子位置,包含完整的QRDR,从27株不同MIC值的大肠杆菌株、ATCC25922、4株诱导耐药菌株均获得约300bp的PCR产物.采用291的交联度、12%的聚烯酰胺浓度,1×TBE,凝胶中添加5%的甘油的条件,对诱导菌株、药物敏感菌株及不同耐药水平的分离菌株进行SSCP分析,结果表明,诱导菌株的谱型与敏感对照菌不同,低MIC值菌株SSCP谱型与敏感对照与敏感对照一致性高;耐药菌株的谱型多数与敏感对照不同.四株诱导大肠杆菌PCR产物的SSCP谱型均与对照不一致,检出率为100%;27株不同耐药性的猪源大肠杆菌中,7株敏感大肠杆菌共有6株的SSCP谱型与标准敏感菌株对照一致,符合率为85.7%;20株耐药大肠杆菌其谱型与标准敏感对照一致的菌株为2株,检出率为90.0%.序列比较结果表明,敏感菌株WJPE2-1的PCR产物与敏感对照有2个碱基(第91,111位氨基酸残基位置)的差异,序列同源率为99.16%(236/238).诱导菌株1与2表现在第83位氨基酸编码序列由tcg突变为ttg,菌株3、4与菌株1、2的差异表现在第87位氨基酸编码序列由gac突变为tac.进一步分析发现,菌株WJPE2-1在第91位及111位的突变均为同义突变,即密码子的变换没有引起氨基酸残基的改变.在诱导菌株中,1与2的gyrase的第83位氨基酸残基由Ser→Leu,菌株3、4的gyrase还在第87位氨基酸残基由Asp→Tyr.表明由于QRDR内碱基的改变,引起DNA旋转酶氨基酸的变化,导致大肠杆菌产生氟喹诺酮药物的耐药性. 相似文献
10.
《中国兽医杂志》2019,(12)
为了探讨耐药外排泵AcrAB-TolC在大肠埃希菌对安妥沙星的诱导耐药中的发生机制,试验采用微量肉汤稀释法测定安妥沙星对大肠埃希菌标准菌株(ATCC25922)的最小抑菌浓度(MIC),以1/2 MIC为起点采用浓度递增法对ATCC25922进行体外诱导,并将诱导后的细菌在不含药的培养基上传代培养5次,每次传代后测定MIC值,以获得稳定耐药的菌株。并检测安妥沙星诱导前后大肠埃希菌株外排泵AcrAB-TolC基因序列的突变和mRNA表达量的变化。结果表明,诱导后的耐药菌株acrA有8处、acrB有40处、tolC有27处发生了碱基突变,其中acrB和tolC所编码的氨基酸序列也发生了改变,并且诱导后的菌株耐药外排泵AcrAB-TolC的基因acrA、acrB、acrZ、tolC的mRNA表达量极显著增加。 相似文献
11.
选择11株动物源沙门菌(包括6种血清型)进行环丙沙星耐药性体外诱导.应用变性高效液相色谱(DH-PLC)对11株诱导株不同诱导阶段的靶基因gyrA、gyrB、parC、parE的喹诺酮耐药决定区(QRDR)和mar操纵子基因marO、marR、marA、marB、soxR、soxS及外排泵acrAB的抑制基因acrR(包括启动子区)进行基因突变筛选,并对筛选出的突变基因进行测序确证.结果显示,6种血清型沙门菌在诱导过程中,GyrA突变集中在S83F和/或D87G,marR、soxR、acrR均出现新突变,提示在环丙沙星诱导压力下,因靶基因和调控基因突变使耐药性不断增加. 相似文献
12.
喹诺酮类耐药决定区、外排泵负调控基因对大肠杆菌氟喹诺酮高水平耐药分子机制的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
为了探讨耐喹诺酮类决定区(QRDR)、外排泵负调控基因(acrR、marR和soxR)突变对临床分离株氟喹诺酮(FQs)高水平耐药的影响,本研究对临床分离的18株FQs耐药大肠杆菌(E.coli),采用PCR方法检测QRDR、acrR、marR和soxR的突变情况;通过RT-PCR的方法检测外排泵及膜孔蛋白相关基因的表达水平。结果显示,QRDR的突变主要集中在常规突变GyrA(Ser83Leu 和 Asp87Asn)和ParC(Ser80Ile),同时也检测出稀有突变ParC Glu84Gly、Glu84Lys、Glu84Val和Glu84Ala,ParE Ser458Ala等。ED28在acrR基因存在777 bp插入序列;12株菌(包括ATCC25922)在MarR存在Gly103Ser和Tyr137His双突变,其中EP26和EG42存在插入片段;ED40在SoxR存在Thr38Ser、Gly74Arg氨基酸替换。在多突变药菌株中,AcrAB的表达水平明显升高,OmpC和OmpF表达量降低、甚至缺失。 相似文献
13.
从13个动物园的非人灵长类动物中采集了384份粪便样品,经过细菌分离培养后,并经染色镜检和生化试验等分离鉴定出153株沙门氏菌,分离率为39.84%。按照美国临床实验室标准化委员会(CLSI)的判定标准,对分离得到的153株沙门氏菌进行了22种抗生素药物的药敏试验,结果表明,153株均表现出不同的程度的耐药性,其中,羧苄西林的耐药率最高,为95.42%,而亚胺硫霉素最敏感,敏感率为90.20%;且153株沙门氏菌分离株均为多重耐药菌株(n≥2),其中1株的耐药数可达18种之多,耐2~12种抗菌药物的菌株多达123株,占分离菌株的80.39%。从不同动物园分离的沙门氏菌对22种抗生素耐药情况的方差分析来看,在所调查的13个动物园中,不同动物园沙门氏菌分离株的耐药情况也不同。 相似文献
14.
为探究目前海南地区罗非鱼无乳链球菌病的流行性,了解该地区无乳链球菌耐药情况,本研究2020年8月从海南地区部分渔业养殖场的病鱼中共分离获得15株无乳链球菌,对各分离菌株的血清型、主要毒力基因及耐药性进行检测,并对多重耐药情况进行分析。血清型检测结果显示,15株分离菌株的血清型与对照菌株A909一致,均为Ⅰa型。毒力基因检测结果显示,15株分离菌株均未检出毒力基因scpB,但该毒力基因在参考菌株人源无乳链球菌2603V/R中检出,而主要毒力基因cylE、sodA、gapC的检出率均为100%。药敏试验结果表明,15株分离菌株对甲氧胺嘧啶、磺胺异噁唑、复方新诺明、链霉素、新霉素、庆大霉素的耐药率达85%以上;对头孢克洛、头孢曲松、头孢哌酮、头孢拉定、卡那霉素、红霉素、利福平、克林霉素敏感性达80%以上;未发现对甲氧胺嘧啶、氟罗沙星、链霉素、新霉素、庆大霉素敏感的菌株。多重耐药检测结果表明,15株分离菌株均至少对4种药物表现耐药,其中6重及以上耐药的菌株占总分离菌株数的86.67%,并有2株为13重耐药菌株。本研究为海南地区鱼源无乳链球菌病的用药提供参考,为华南地区罗非鱼无乳链球菌的流行病学和疾病防控提供调查依据。 相似文献
15.
4个动物园灵长类动物肠道克雷伯氏菌的分离鉴定与药敏试验 总被引：1，自引：1，他引：0
从4个动物园的非人灵长类动物中采集了214份粪便样品,经过细菌分离培养、染色镜检和生化试验等分离鉴定出88株克雷伯氏菌,分离率为41.12%。按照美国临床实验室标准化委员会(CLSI)的判定标准,对分离到的88株克雷伯氏菌进行了22种抗生素药物的药敏试验,结果表明,88株均表现出不同的程度的耐药性,其中,耐药程度最高的是羧苄青霉素(耐药率为95.45%);敏感度最高的是阿米卡星(敏感率为77.27%)。88株克雷伯氏菌分离株均有较为严重的多重耐药性,耐8～15种抗菌药物的菌株最多,有64株,占分离菌株的72.73%;耐10种以上抗菌药物的菌株有63株,占分离菌株的71.59%。从不同动物园分离的克雷伯氏菌对22种抗生素的耐药情况来看,在所调查的4个动物园中,重庆某动物园(CQ)和北京某动物园(BJ)的克雷伯氏菌分离株间耐药率无差异(P>0.05);上海某野生动物园(SHW)和上海某动物园(SHZ)的克雷伯氏菌分离株间耐药率无差异(P>0.05);而北京某动物园(BJ)与上海某野生动物园(SHW)和上海某动物园(SHZ)的克雷伯氏菌分离株相比,其耐药率差异均极显著(P<0.01);重庆某动物园(CQ)与上海某野生动物园(SHW)和上海某动物园(SHZ)的克雷伯氏菌分离株相比,其耐药率差异均极显著(P<0.01)。 相似文献
16.
Current data on antibiotic resistance of the most important bovine mastitis pathogens in Switzerland 总被引：1，自引：0，他引：1
100 strains of Staphylococcus aureus (S. aureus), 100 strains of coagulase-negative staphylococci (CNS), 100 strains of Streptococcus spp. and 100 strains of Escherichia coli (E. coli), isolated from bovine mastitis milk samples between November 2002 and April 2003, were tested for their sensitivity to various antibiotics by means of the agar diffusion method. The antibiotics were chosen on the basis of their licenses for intramammary application in Switzerland (www.vetpharm.unizh.ch). 91% of the S. aureus strains were sensitive to all the antibiotics tested. Only 9% of the strains were resistant to Penicillin G and 7% to Ampicillin. 53% of the CNS strains were sensitive to all the antibiotics tested. 31% exhibited resistance to Penicillin G, 26% to Ampicillin, 16% to Cloxacillin and 14% to Lincomycin. 30% of the Streptococcus spp. strains were sensitive to all the antibiotics tested. 4% were resistant to Penicillin G, 4% to Amoxicillin/clavulanic acid, 1% to Cefoperazone, 2% to Cefquinome, 35% to Neomycin, 22% to Gentamicin, 61% to Kanamy-cin and 11% to Lincomycin. 43% of the strains showed multiple resistance. 79% of the E. coli strains were sensitive to all the antibiotics tested. 20% exhibited resistance to Ampicillin, 9% to Neomycin and 10% to Kanamycin. A comparison of the own results with data of other authors in Switzerland shows no important changes in the resistance situation during the last 20 years. With the exception of two strains (Streptococcus spp.), all tested isolates were sensible against Cefquinome. 相似文献
17.
This study was aimed to reveal the trend of drug resistance about Haemophilus parasuis (Hps) in Guizhou province and guide clinical use of Glasser's disease then slow the emergence of drug-resistant Hps strains.K-B slip-agar diffusion method was used to test the 15 common antibiotics resistance of 517 Hps strains isolated from 9 districts in Guizhou province from 2013 to 2019.The drug resistance differences of strains isolated from different time and districts were analyzed.The results showed that 14.36% to 70.58% isolates indicated drug resistance to 15 antibiotics,the proportion of EFT resistant strains was the lowest and SXT resistant strains was the highest.Compared with 2013,the resistance rate of Hps strains isolated in 2019 to 13 antibiotics increased by 4.52% to 324.68%.Among them,the proportion of drug-resistant strains of 13 drugs increased which EFT resistant strains increased at the fastest rate to 324.68% while STR resistant strains slowest rate to only 4.52%.The rate of TET resistant strains showed negative growth which decreased by 2.21% and 8.63%,respectively.Compared with Kaili,Bijie and Xingyi of Guizhou,the strains isolated from Anshun,Zunyi and Guiyang districts showed higher drug resistance rate of EFT,MC and DO which with low resistance in Guizhou province,but lower of SXT,AML and STR which with high resistance in Guizhou province.The results indicated that the resistance of Hps strains to 15 commonly antibiotics in Guizhou province was serious with rising tendency and the resistance rate of certain strains showed obvious differences between different districts. 相似文献
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试验旨在揭示贵州省副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，Hps）的耐药性及其变化趋势，指导Glasser's病临床防控用药，减缓Hps耐药菌株出现。通过K-B纸片琼脂法，检测2013－2019年分离自贵州省9个地区517株Hps对15种常用抗菌药的耐药性，分析不同分离时期和分离地区的菌株的耐药性差异。结果显示，针对15种抗生素分别有14.36%~70.58%的分离菌株表现耐药，其中耐头孢噻呋菌株的比例最低，耐复方新诺明菌株的比例最高；与2013年相比，2019年分离的Hps菌株对13种抗生素的耐药率分别升高了4.52%~324.68%，其中耐头孢噻呋菌株比例上升速度最快，达324.68%，耐链霉素菌株比例上升最慢，仅4.52%，耐土霉素和四环素菌株的比例分别下降2.21%和8.63%，出现负增长。相对于凯里、毕节和兴义地区，安顺、遵义、贵阳地区流行的菌株对头孢噻呋、替米考星、多西环素等在全省范围内耐药菌株比例较低的药物耐药率相对较高，而对复方新诺明、阿莫西林、链霉素等在全省范围内耐药菌株比例较高的药物耐药率相对较低。这一结果说明，贵州省Hps菌株对15种常用药物的耐药性较为严重，且总体呈现上升趋势，不同地区分离株对部分抗菌药的耐药率呈现明显的地区差异性。 相似文献
19.
为了解副猪嗜血杆菌四川分离株的生物学特性及耐药性情况,本研究采用微生物及分子生物学技术对副猪嗜血杆菌(Hps)四川分离株从生物学特性、16S rRNA基因PCR扩增和耐药性方面进行了研究.结果显示,Hps四川分离株具有一定的微厌氧性,能产生"卫星现象",分离株与其他地区分离株生化特性基本一致;所有分离株均扩增出821 bp的特异性16S rRNA基因片段.药物敏感性试验结果显示,分离株对头孢拉定、氨苄西林、头孢氨苄、阿莫西林、头孢克洛、氧氟沙星、头孢噻肟、呋喃妥因具有较高的敏感性,敏感率为75.61%~87.80%;对林可霉素、羧苄青霉素、恩诺沙星、阿米卡星、磺胺甲唑均表现出较高的耐药性,且多重耐药严重,5~8种耐药占比最多,为21.95%~30.49%,有7株可耐受多达13种药物.结果表明,Hps四川分离株存在严重的耐药性现象. 相似文献