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为研究冷应激对阿勒泰羊脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)mRNA表达的影响,试验分别采集冷应激前与冷应激后阿勒泰羊6个部位的组织,采用实时荧光定量PCR方法检测各组织中LPL mRNA的表达水平,分析其在不同部位中表达的变化.结果显示,阿勒泰羊LPL mRNA表达量在冷应激后显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01),其中颈部肌间脂肪和尾部脂肪冷应激后表达量最高.表明阿勒泰羊在低温下脂肪组织的动员能力较强,使机体产热增加,以抵抗冷应激. 相似文献
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脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase,LPL）是动物分解代谢的限速酶,是影响脂肪代谢通路中的一个重要基因。本研究将LPL基因作为影响民猪抗寒特性的候选基因,对其在心脏、肝脏、胃、脾脏、肾脏、肺脏、大肠、小肠、子宫、卵巢、背肌、腿肌、脂肪共计13个组织内的表达情况和低温冷诱导后在民猪肌肉组织内的表达变化情况进行了分析。结果表明,LPL基因在所检测的13个组织中均有表达,但表达量存在差异,心脏、背肌、腿肌、脂肪组织中的表达量较高,子宫和卵巢组织的表达量较低;LPL基因在民猪被冷诱导后表达水平无显著变化。 相似文献
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试验旨在探讨从江香猪肌内前体脂肪细胞分化过程中相关基因的表达。采集3日龄从江香猪背最长肌,采用Ⅱ型胶原酶消化法分离肌内前体脂肪细胞,进行原代和传代培养,并对其进行形态学观察。诱导培养后,利用油红O染色法对其进行鉴定。采用实时荧光定量PCR方法检测细胞诱导分化0、24、48、72和144 h时脂肪相关基因丙酮酸脱氢酶激4（PDK4）、成纤维细胞生长因子10（FGF10）、脂联素（ADIPOQ）、脂肪酸合成酶（FAS）、脂蛋白脂酶（LPL）、CCAAT增强子结合蛋白α（C/EBPα）、脂肪细胞脂肪酸结合蛋白4（FABP4）、蛋白激酶B（AKT2）的表达,选择诱导0 h作为对照组。结果显示,分离的肌内前体脂肪细胞5 h开始贴壁,贴壁的细胞呈圆形,胞体透明,经传代后,细胞形态均一,经诱导培养后,油红染色呈红色。实时荧光定量PCR结果显示,PDK4、ADIPOQ、C/EBPα、FAS、FABP4和AKT2基因mRNA表达水平在诱导48 h时均呈现较高表达,极显著高于其余各阶段（P<0.01）;FGF10基因mRNA表达水平在诱导24和48 h时均较高;LPL基因mRNA表达水平在诱导72 h时极显著高于对照组（P<0.01）,之后明显下降;PDK4、ADIPOQ和FGF10基因mRNA表达水平在诱导144 h时均极显著低于对照组（P<0.01）;C/EBPα基因mRNA表达水平在诱导144 h时显著高于对照组（P<0.05）;FAS基因mRNA表达水平在诱导144 h时显著低于对照组（P<0.05）;AKT2和LPL基因mRNA表达水平在诱导144 h时与对照组差异不显著（P>0.05）。本试验成功培养了从江香猪肌内前体脂肪细胞,并检测了不同诱导阶段脂肪相关基因的表达情况,为进一步研究从江香猪脂肪代谢和沉积提供参考依据。 相似文献
6.
《畜牧兽医学报》2015,(5)
细胞冷应激反应是一个复杂的过程,它包括低温本身的应激阶段和复温后的应激阶段。本研究以牦牛卵巢颗粒细胞为研究对象,利用实时荧光定量PCR、Western blot技术,分析温和冷处理1、5d及复温1、2、4、8及24h条件下,细胞内CIRBP、HSP70及P53变化规律。结果显示,细胞在25℃培养5d,然后通过复温至37℃,会影响细胞生理状态以及诱导细胞应激反应。CIRBP的表达量在25℃温和冷处理第1天开始上升,并且在复温后24h左右恢复到正常水平。HSP70的表达量在37℃复温培养后逐步上升,复温8h出现峰值,随后下降。P53mRNA表达水平在复温培养4h出现峰值,随后下降,并且其在CIRBP及HSP70mRNA高表达时,均有明显的下降。结果表明,低温会诱导细胞CIRBP mRNA和蛋白表达水平的上升;HSP70能够被冷应激后的复温诱导;CIRBP和HSP70都具有抗应激损害和细胞凋亡的作用。这些数据将为亚低温和复温在各种研究和治疗领域的应用提供参考。 相似文献
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试验旨在探讨从江香猪肌内前体脂肪细胞分化过程中相关基因的表达。采集3日龄从江香猪背最长肌,采用Ⅱ型胶原酶消化法分离肌内前体脂肪细胞,进行原代和传代培养,并对其进行形态学观察。诱导培养后,利用油红O染色法对其进行鉴定。采用实时荧光定量PCR方法检测细胞诱导分化0、24、48、72和144h时脂肪相关基因丙酮酸脱氢酶激4(PDK4)、成纤维细胞生长因子10(FGF10)、脂联素(ADIPOQ)、脂肪酸合成酶(FAS)、脂蛋白脂酶(LPL)、CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、脂肪细胞脂肪酸结合蛋白4(FABP4)、蛋白激酶B(AKT2)的表达,选择诱导0h作为对照组。结果显示,分离的肌内前体脂肪细胞5h开始贴壁,贴壁的细胞呈圆形,胞体透明,经传代后,细胞形态均一,经诱导培养后,油红染色呈红色。实时荧光定量PCR结果显示,PDK4、ADIPOQ、C/EBPα、FAS、FABP4和AKT2基因mRNA表达水平在诱导48h时均呈现较高表达,极显著高于其余各阶段(P0.01);FGF10基因mRNA表达水平在诱导24和48h时均较高;LPL基因mRNA表达水平在诱导72h时极显著高于对照组(P0.01),之后明显下降;PDK4、ADIPOQ和FGF10基因mRNA表达水平在诱导144h时均极显著低于对照组(P0.01);C/EBPα基因mRNA表达水平在诱导144h时显著高于对照组(P0.05);FAS基因mRNA表达水平在诱导144h时显著低于对照组(P0.05);AKT2和LPL基因mRNA表达水平在诱导144h时与对照组差异不显著(P0.05)。本试验成功培养了从江香猪肌内前体脂肪细胞,并检测了不同诱导阶段脂肪相关基因的表达情况,为进一步研究从江香猪脂肪代谢和沉积提供参考依据。 相似文献
8.
从脑-肠互作的角度出发，研究IL-21及其受体在TNBS化学诱导的IBD模型大鼠的结肠、大脑组织中mR—NA表达水平以及血清蛋白水平变化，以此探讨IL-21在炎症性肠病中的调节作用。建立了大鼠IBD模型，用荧光定量PCR方法检测IL-21及其受体mRNA在结肠、大脑组织中的表达水平变化，并采用ELISA方法测定血清中IL-21在IBD大鼠不同发病时期的蛋白水平。结果显示：IL-21及其受体在IBD大鼠结肠和大脑组织中的mRNA水平的呈现一致变化，即随着炎症的加剧而逐渐增加，在痛变最为严重的时候达到最大值，而随着炎症的消退逐渐恢复至正常水平。在血清中，IL-21蛋白浓度变化也表现出一致的变化趋势。结果表明，IL-21参与了肠道炎症进程，并且IL-21可能通过脑一肠互作来调节IBD的炎症进程。 相似文献
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利用血清剥夺／血清培养实验模型，采用油红O染色提取法、甘油试剂盒和RT-PCR，诱导和测定了大鼠附睾脂肪垫分离和培养的脂肪细胞生脂和脂解及其相关酶和转录因子mRNA水平的变化，探讨脂肪细胞脂代谢通路中关键酶和转录因子基因转录表达的规律。结果显示，依血清剥夺时间延长，脂肪细胞激素敏感脂酶（HSL）mRNA表达水平显著提高（P〈0．05），恢复血清培养后，表达水平显著降低（P〈0．05），与脂解活性的变化一致；脂肪生成及生脂相关基因脂肪酸合酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC1）和碳水化合物反应元件结合蛋白（ChREBP）mRNA表达水平依血清剥夺持续时间明显下降（P〈0．05），恢复血清培养，随培养时间延长显著提高（P〈0．05）；血清剥夺显著降低固醇调控元件结合蛋白（SREBP）-1cmRNA水平，但血清剥夺72h与36h无明显差异（P〉0．05）；血清剥夺72h后恢复血清培养36h和72h，SREBP-1cmRNA的表达水平没有显著性变化（P〉0．05）。结果表明，生脂及FAS和ACC1表达与ChREBP mRNA水平一致，但与SREBP-1c不一致，提示ChREBP与成熟脂肪细胞生脂基因转录激活可能有更密切的关系，但尚待在蛋白水平进一步证实。 相似文献
10.
为探究硒对铝诱导小鼠脾脏氧化应激和炎症反应的颉颃作用机制,试验设4组：空白对照组、铝中毒组、硒对照组、硒＋铝组,各组小鼠灌胃给药处理4周后取脾脏组织。通过观察病理组织HE染色切片及免疫荧光染色切片来评价脾脏组织病理学变化;检测小鼠脾脏组织中谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性及还原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量的变化;以实时荧光定量PCR检测脾脏组织中白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-4、IL-6、干扰素-γ（IFN-γ）、血红素氧合酶1（HO-1）和NF-κB mRNA的表达水平;用Western blotting法检测脾脏组织中p-p65、IL-1β和HO-1蛋白表达水平。结果显示,铝处理后可使脾脏局部细胞间距增大,淋巴细胞减少,并伴有红细胞浸润,中性粒细胞增多,降低脾脏组织中GPx活性及NO和GSH的含量,导致MDA积累,IL-1β和NF-κB等炎症相关基因mRNA及蛋白表达水平升高,表现出对脾脏的氧化损伤和炎症反应;硒的加入可缓解铝的毒性作用,提高GPx活性及其他抗氧化物质的含量,降低脂质过氧化物MDA生成及炎症相关基因mRNA和蛋白的表达水平。本试验结果表明,铝能通过诱发小鼠氧化应激及炎症反应损伤脾脏,硒能缓解铝诱导的小鼠脾脏损伤,其机制可能与硒增强了脾脏的抗氧化水平有关。 相似文献
11.
本研究旨在探究m6A RNA甲基化酶METTL3和WTAP在牦牛(Bos grunniens)不同组织、前体脂肪细胞增殖与分化过程中的表达模式和前体脂肪细胞分化过程mRNA m6A的变化水平。采用qRT-PCR检测牦牛皮下脂肪、肌肉、心、肝、脾、肺、肾和皮下脂肪不同时期(18和30月龄)METTL3及WTAP的mRNA表达水平。应用I型胶原酶消化法获取牦牛前体脂肪细胞,油红O染色和脂肪分化标志基因的检测建立牦牛前体脂肪细胞分化模型,以及qRTPCR检测前体脂肪细胞增殖分化阶段METTL3和WTAP的mRNA表达水平。结果表明,肝脏组织中METTL3表达最高(P<0.05),皮下脂肪组织表达量最低(P<0.05);WTAP在皮下脂肪组织中的表达最为丰富,脾脏中的表达量最低(P<0.05)。30月龄皮下脂肪组织中METTL3和WTAP mRNA表达量高于18月龄。前体脂肪细胞诱导分化12 d时,细胞中出现多而密的脂环,脂肪细胞分化特异性标志基因FABP4、C/EBPα和PPARγ第12天的表达量显著高于第0天(P<0.05)。METTL3和WTAP的表达量在细胞增殖阶段(24、48和72 h)呈现“下降-上升”的表达趋势(P<0.05)。在牦牛前体脂肪细胞分化阶段(0、4、8和12 d),METTL3表达量呈现“上升-下降-上升”的趋势,WTAP呈现“上升-下降”的趋势。细胞分化阶段mRNA m6A水平呈现逐渐上升的趋势,在分化12 d时细胞内RNA的m6A丰度最高(P<0.05)。本研究获得METTL3和WTAP在牦牛不同组织和前体脂肪细胞增殖分化阶段的变化规律及细胞分化过程中mRNA m6A水平变化,初步揭示WTAP和METTL3对牦牛脂代谢具有重要的调控作用。 相似文献
12.
《中国家禽》2016,(2)
试验旨在研究三乳酸甘油酯对冷应激肉鸡生产性能、抗氧化能力和能量代谢状况的影响。选用150只1日龄Cobb肉鸡,随机分为3个处理组:对照组、冷应激组、乳酸甘油酯组,分别饲喂基础日粮、基础日粮、基础日粮+500 mg/kg三乳酸甘油酯,每组5个重复,每个重复10只鸡。试验第1周各组温度控制在32~34℃,第2周控制在30~32℃,试验第3~6周冷应激组、乳酸甘油酯组控制在(10±2)℃,而对照组维持在(26±2)℃,湿度50%~60%。结果显示:1与对照组相比,冷应激处理降低了肉鸡生产性能,心脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),肝脏SOD及肺脏SOD、GSH-Px的酶活力(P0.05),同时也降低了心脏、肝脏三磷酸腺苷(ATP)含量,心脏腺苷酸池(TAN)含量、低氧诱导因子-1(HIF-1)、血红素加氧酶-1(HMOX-1)mRNA水平及肝脏HIF-1、过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)mRNA水平(P0.05),但提高了心脏相对重量、肝脏AMP/ATP比值及心脏和肝脏AMPK-α1 mRNA水平(P0.05);2与冷应激组相比,日粮中添加500 mg/kg三乳酸甘油酯对冷应激肉鸡生长性能和器官相对重量并无影响,但可提高心脏GSH-Px、肝脏SOD和肺脏CAT的活力、心脏ATP和EC值、心脏和肝脏ATP5B mRNA水平(P0.05),并降低心脏AMP/ATP比值、HMOX-1和AMPK-α1 mRNA水平(P0.05)。研究结果表明:三乳酸甘油酯可提高冷应激肉鸡的心脏、肝脏及肺脏抗氧化能力并改善心脏的能量代谢状况。 相似文献
13.
《中国兽医杂志》2016,(2)
为了研究高脂诱导脂肪肝对CYP2A5表达的影响,选取雄性C57BL/6J小鼠18只,随机分成对照组(control)、高脂组(NAFLD)和阳性对照组(PYR),每组6只,分别饲喂基础饲料和高脂饲料,阳性对照组饲喂基础饲料在处死前一天给予吡唑诱导,连续8周后小鼠断颈处死,取肝脏测定mRNA,CYP2A5的蛋白表达和酶活性。其结果阳性对照组CYP2A5的mRNA、蛋白表达和酶活性与对照组相比分别增加229%、80%、151%差异极显著(P0.01)。高脂诱导组与对照组相比CYP2A5的mRNA、蛋白表达和酶活性分别增加69%、34%、43%(P0.01)。表明高脂诱导非酒精性脂肪肝可增加CYP2A5的mRNA、蛋白表达水平和酶活力。 相似文献
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本试验旨在研究冷应激对猪卵母细胞发育能力及冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)基因表达的影响。常规体外成熟猪GV期卵母细胞,置于室温(25℃)下冷应激处理0.5、1、2、6、12和24 h,观察冷应激处理对其后卵母细胞成熟率和体外受精胚胎发育率的影响和微丝、微管等亚细胞结构的变化,Real-time PCR检测猪卵母细胞CIRP mRNA的表达。结果表明:短时间(2 h)冷应激处理后各组成熟率和体外受精卵裂率均与对照组无异(P0.05);微丝、微管及染色体等亚细胞结构均无明显改变(P0.05),但2 h组的囊胚发育率较对照组有明显下降(9.7%对12.3%,P0.05)。冷应激处理超过2 h后,各组成熟率和囊胚发育率与对照组相比均显著降低(P0.05),微丝、微管正常率均较对照组显著下降(分别为76.8%和53.6%对90.2%和77.2%;P0.05)。在冷应激条件下,猪卵母细胞CIRP mRNA表达水平升高,并在一定范围内随冷应激处理时间的延长而增加,至冷应激处理4 h时达最高。猪卵母细胞在短时间冷应激条件下,其发育能力和亚细胞结构并未受到显著影响;适当的冷应激条件可有效激发猪卵母细胞CIRP mRNA的表达。 相似文献
15.
冷应激条件下猪脂肪组织中脂联素及其受体 mRNA水平的表达变化 总被引：2，自引：2，他引：0
为了研究冷应激对脂肪代谢的影响,本试验分别在-15~-10 ℃、-10~-5 ℃、-5~0 ℃、15~18 ℃温度条件下采取猪颈部、背部皮下和内脏系膜脂肪组织,通过荧光定量RT-PCR方法检测脂联素及其受体mRNA的表达水平。结果显示,随着冷应激强度的逐渐加大,在颈部、背部皮下、内脏系膜Adiponectin mRNA的表达量逐渐降低,差异显著(P＜0.05);内脏系膜中AdipoR 1和AdipoR 2 mRNA表达量先逐渐升高后恢复正常,且差异极显著(P＜0.01);背部皮下AdipoR 2 mRNA表达量先逐渐降低后恢复正常,差异极显著(P＜0.01),AdipoR 1 mRNA表达量没有明显变化;颈部皮下AdipoR 2 mRNA的表达量先逐渐升高后恢复正常,差异极显著(P＜0.01),AdipoR 1 mRNA的表达量先升高后恢复正常,而后又升高,差异极显著(P＜0.01)。结果表明,脂联素及其受体参与冷应激过程,它们可能与冷应激条件下脂肪组织的重新分布有重要的关系。 相似文献
16.
《中国动物传染病学报》2018,(5)
为了初步探究布鲁氏菌众多毒力因子对小鼠巨噬细胞中类泛素SUMO-1和偶联酶Ubc-9表达的影响,本研究使用经提纯的布鲁氏菌16M脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)以及布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统的VirB2缺失株侵染小鼠巨噬细胞,在不同时间段收集细胞,提取细胞总RNA和细胞总蛋白,通过qRT-PCR和Western blot技术分别检测类泛素SUMO-1的表达水平和偶联酶Ubc-9的mRNA的转录水平。结果表明,不同浓度的布鲁氏菌16M脂多糖LPS侵染小鼠巨噬细胞后,细胞中类泛素SUMO-1的表达水平和偶联酶Ubc-9的mRNA的转录水平均未发生明显变化;布鲁氏菌VirB2缺失株与阴性对照组相比,类泛素SUMO-1的表达水平和偶联酶Ubc-9的mRNA的转录水平在各侵染时间段差异具有显著统计学意义(P0.05),可初步判定在宿主细胞中,布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统会影响类泛素SUMO-1蛋白的表达水平和Ubc-9mRNA的转录水平,从而在胞内稳定繁殖。 相似文献
17.
对大鼠附睾和肾周脂肪组织分离的前体脂肪细胞原代培养，采用RT—PCR法分析脂代谢重要酶和转录因子基因在不同分化阶段转录表达的时序变化。结果显示，在前体脂肪细胞阶段，固醇调控元件结合蛋白（SREBP）-1c、碳水化合物反应元件结合蛋白（ChREBP）以及脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶α（ACC1）、硬酯酰辅酶A去饱和酶（SCD）和激素敏感脂酶（HSL）基因均不转录表达；HSL mRNA在分化初期表达，中期表达水平最高，分化末期降低；SCD mRNA在分化中期表达，末期表达水平显著提高；分化初期FAS mRNA水平明显高于中期和末期；ACC1 mRNA仅在末期表达；分化初期SREBP-1c mRNA水平较高，中期和末期显著下降；ChREBP mRNA表达水平在分化末期稍高于中期，但差异不显著。表明，SREBP-1c mRNA的表达与脂肪细胞早期分化调控有关，分化成熟脂肪细胞的ChREBP mRNA表达可能与生脂基因的转录激活有关。 相似文献
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《中国家禽》2016,(10)
试验旨在研究γ-氨基丁酸(GABA)对1~6周龄热应激雏鸡法氏囊组织中IL-6、TNF-α、HSP70 mRNA表达的影响。选择体重相近的1日龄雄性文昌鸡108只,随机平均分为对照组(CK)、热应激(HS)组、GABA+热应激(GABA+HS)组,饲养6周。每周龄末剖取法氏囊组织,采用RT-PCR方法检测雏鸡法氏囊组织中IL-6、TNF-α、HSP70 mRNA的表达水平,分析其在1~6周龄不同组雏鸡法氏囊组织中表达的变化。结果显示:与CK组比较,HS组和GABA+HS组雏鸡法氏囊组织中IL-6 mRNA表达水平上升,且GABA+HS组法氏囊组织中IL-6 mRNA普遍低于HS组;三组的TNF-α mRNA在1~3周龄时均有较低的表达水平,在4~6周龄时表达升高;1~6周龄HS组和GABA+HS组雏鸡法氏囊组织HSP70 mRNA表达水平整体普遍低于CK组。结果表明:热应激导致雏鸡法氏囊组织中IL-6和TNF-α mRNA的表达水平上升,同时抑制HSP70 mRNA的表达,而GABA在一定程度上能够缓解热应激造成的损伤。 相似文献
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以东北野猪成纤维细胞为研究对象,利用实时荧光定量PCR技术,分析4、15、25和32℃不同温度冷应激条件下细胞内HSPT0mRNA表达变化规律。结果显示在冷应激的低温处理过程中,HSP70mRNA转录量在各温度均为见显著增加;在冷应激的复温培养过程中,HSP70mRNA转录量在4℃和15℃处理后4h后,复温培养的4～8h显著增加（P〈O．05）;在25℃和32℃处理后4h后,复温培养未能诱导细胞内HSP70mRNA转录量显著增加（P〉0．05）;细胞在4℃和15℃处理2、4、6和8h后,复温培养4h,HSP70mRNA转录量随处理温度的减低和时间的延长而增加,处理4～8h组显著高于对照组（P〈0．05）,在25℃和32℃处理2、4、6和8h后,复温培养未能显著诱导HSP70mRNA的转录（P〉0．05）。结果表明,冷应激诱导东北野猪成纤维细胞内HSP70mRNA转录量的增加,不是发生在低温处理的应激阶段,而是发生在复温后的细胞应激阶段,温和冷应激（25～32℃）未能诱导复温后HSP70mRNA转录量的显著增加,强度冷应激（4～15℃）诱导复温后HSP70mRNA转录量的显著增加,且与冷应激的强度和时间成正比。 相似文献