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兔源肺炎克雷伯氏菌重组酶聚合酶扩增检测方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
为建立一种检测兔源肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)重组酶聚合酶扩增方法(recombinase polymerase amplification,RPA),根据肺炎克雷伯氏菌的phoE基因保守序列设计引物,扩增片段大小为277 bp,并对反应条件进一步优化,最终建立了适宜于快速准确检测兔源肺炎克雷伯氏菌的重组酶聚合酶等温扩增方法。该方法可特异性检测出兔源肺炎克雷伯氏菌,最低检出细菌量为8.3×10~1 CFU/mL,灵敏度比传统PCR高100倍。本研究建立的肺炎克雷伯氏菌RPA检测方法特异性强、操作简单,从而为生产中的兔源肺炎克雷伯氏菌现场快速检测提供了一种新方法。 相似文献
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本研究通过病死羊的肺脏中进行细菌分离、形态学观察、生化试验、致病性试验、药敏试验和16S rRNA扩增。结果从肺中分离到1株具有致病性的革兰氏阴性短杆菌。生化试验鉴定结果符合肺炎克雷伯氏菌的特征。分离株对头孢噻肟、阿米卡星、头孢曲松和链霉敏感外,对强力霉素等12药物具有耐药性。16S rRNA测序结果分析显示分离株与肺炎克雷伯氏菌的核苷酸同源性为97.1%~99.0%,在核苷酸进化树上与肺炎克雷伯氏菌属于同一分支。结果表明本研究从病死羊的肺脏中分离到1株肺炎克雷伯氏菌。 相似文献
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《中国兽医杂志》2019,(8)
为了确定引起貉肺炎的病原菌,本试验从临床貉子死亡病例中分离到的1株病原菌,命名为HM-1,试验采用分离培养、纯培养、形态观察、生化鉴定、16S rRNA序列测序等方法进行了鉴定。结果表明,分离菌株HM-1呈杆状、革兰染色阴性;16S rRNA基因序列通过NCBI的Blast检索系统进行序列同源性分析,HM-1株与克雷伯菌F2R9以及01A030聚为一支,相似度为最高,达到99.8%,确定分离菌株HM-1为肺炎克雷伯菌。动物致病性试验表明分离株HM-1株具有较强的致病性。药敏试验说明分离菌株HM-1株对头孢噻肟高度敏感,对卡那霉素、新霉素、头孢曲松中度敏感,对青霉素、氟苯尼考、恩诺沙星等10种药物耐药。本试验为防治貉肺炎克雷伯菌引起的肺炎提供一定的参考依据。 相似文献
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兔源肺炎克雷伯氏菌的生物学特性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为探究兔源肺炎克雷伯氏菌的生物学特性,本研究对从病兔中采集的病料进行细菌的分离培养、细菌特征性基因(Khe基因)的PCR检测、生化鉴定、药敏试验、致病性试验、毒力基因的扩增及序列分析对细菌分离株进行分析。结果显示麦康凯平板上生长有奶油状菌落且镜检为革兰氏阴性菌;Khe基因扩增为阳性;生化鉴定结果表明分离菌为肺炎克雷伯氏菌;药敏结果显示该菌对诺氟沙星、氧氟沙星、头孢曲松等9种药物高敏,对链霉素、卡那霉素、头孢呋辛等5种药物中敏,对先锋V、庆大霉素等7种药物不敏感甚至耐药;致病性结果显示,分离株能使小白鼠在24h内死亡;分离株携带有wabG、uge和fimH三种毒力基因。本研究结果表明该肺炎克雷伯氏菌具有很强的致病性,是导致兔死亡的主要病原菌。 相似文献
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本试验旨在对从患呼吸道感染和腹泻的仔兔血液中分离的1株疑似病原菌进行鉴定。采用分离培养、镜检、生化检测、荚膜染色、16S rDNA序列测序、药敏试验和动物体内感染等方法,对该疑似菌进行了分析。结果显示,该疑似菌呈杆状、含有丰富的荚膜多糖,其16S rDNA序列与肺炎克雷伯氏菌标准菌株序列相似性达到99%,且对链霉素、庆大霉素、氨苄青霉素、硫酸庆大霉素、硫酸卡那霉素和氯霉素均表现出不同程度的显著抗性。腹腔注射该菌(109 CFU/mL),仔兔全部死亡;而口腔灌喂,仔兔有较强的耐受性(无死亡)。结果表明,从患病仔兔血液中分离到1株肺炎克雷伯氏菌且具有致病性。 相似文献
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为了确证辽宁鹅源肺炎克雷伯菌的致病性,无菌采集鹅肺炎发病病例的肝脾和肺脏,应用细菌分离培养、生化试验以及PCR方法对分离出的细菌进行鉴定,选取所鉴定的代表菌株,应用小鼠和雏鹅进行致病性试验,结果确认分离到2株肺炎克雷伯菌。小鼠致病性试验显示发病率为95%,死亡率为90%,死亡小鼠表现脑实质出血、肝脏坏死有出血点、肺脏充血出血等病理变化。雏鹅致病性试验显示发病率为100%,死亡率为85%,死亡雏鹅表现气管黏膜出血、大叶性肺炎等病理变化。近年来,鹅源肺炎克雷伯菌引起鹅肺炎为主的疾病发病率、致死率越来越高,防治困难。本研究对鹅源肺炎克雷伯菌的致病性进行了分析,为进一步建立鹅源肺炎克雷伯菌病的诊断和防治技术提供了依据。 相似文献
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肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛PCR检测方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
以肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛主要结构亚单位基因为靶序列,设计合成了1对可扩增长609 bp目的片段的引物,建立检测肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛结构基因的PcR方法.特异性试验表明,本室保存的表达Ⅲ型菌毛的鸡源肺炎克雷伯菌临床分离株Kpn7扩增出609 bp的特征性片段,而大肠埃希菌、副伤寒沙门菌、胸膜肺炎放线杆菌、猪链球菌和金黄色葡萄球菌扩增产物均未检出;敏感性试验表明,PER方法检测该菌基因组DNA的灵敏度为16.8 ng/L,检测该菌菌液的灵敏度为3.7× 102 CFU/mL.用此方法对10份临床疑似病例分离物进行检测,结果有5株阳性.表明此方法特异性和敏感性都很高,可用于临床Ⅲ型菌毛肺炎克雷伯菌病的辅助诊断和流行病学调查. 相似文献
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研究以10日龄死亡雏鸡体内分离的一株肺炎克雷伯菌为研究对象,纸片扩散法药敏结果显示对氨苄青霉素、先锋霉素Ⅴ、氨苄西林/舒巴坦、头孢噻肟、复方新诺明、氨曲南、氯霉素、四环素、诺氟沙星等9种药物具有抗性。对其携带基因型进行PCR鉴定显示该菌株为产CTX-M-27型超广谱β-内酰胺酶(Extended-spectrumβ-lactamases,ESBLs)菌株,并且携带Ⅰ型整合酶,此外还检测到了SHV-26、TEM-1型β-内酰胺酶。研究结果为防治临床动物感染产ESBLs肺炎克雷伯菌提供了参考,同时也揭示了ESBLs菌耐药遗传机制。 相似文献
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对青岛地区某兔场病死兔的病变器官组织进行细菌分离和纯培养,对所分离的细菌进行形态特征、理化性质和16SrRNA序列的分子鉴定和测序,人工感染以及药敏试验,判定为肺炎克雷伯氏菌。代表菌株16SrRNA序列长度1414bp,与GeneBank登录号为EU360123.1的肺炎克雷伯氏菌16SrRNA序列同源性100%,人工感染小鼠24h全部死亡,对供试的诺氟沙星等药物高度敏感,对供试的强力霉素等中毒敏感,对头孢拉定等耐药。应用筛选的敏感药物,并采取综合防治措施,使疫情得到了有效控制。 相似文献
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《中国养兔杂志》2020,(4)
2018年冬,山西省某獭兔养殖场出现獭兔呼吸急促、腹泻,从发病到死亡,不到两天时间,通过对死亡兔进行肺部病灶的微生物分离培养及生化试验、染色镜检鉴定,并对其进行了9种药物的敏感性试验。在13只病死兔的肺脏中均分离出肺炎克雷伯氏菌,敏感药物筛选试验结果显示,13株肺炎克雷伯氏菌对多种药物呈现出耐药性,其中对四环素耐药率最高,达100%,呈绝对耐药;对链霉素、庆大霉素、阿米卡星、诺氟沙星、氧氟沙星、氨苄西林、头孢曲松的耐药率均在40%以上,对阿莫西林的耐药率最低,为15.3%。结果表明,克雷伯氏菌为该兔场因腹泻腹胀、呼吸困难而死亡的主要致病菌,其对9种抗生素产生了普遍的耐药性,建议进一步扩大药物的筛选范围,选择更多的合适药物进行治疗。 相似文献
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为了分析驻马店地区猪源肺炎克雷伯氏菌分离菌株生物学特性,从驻马店地区不同养殖场中采集患呼吸道疾病猪肺脏、鼻拭子等病料组织74份中分离得到了43株肺炎克雷伯氏菌。采用人工感染小鼠致病性试验、PCR方法和K-B药敏纸片分别检测49株肺炎克雷伯氏菌的致病性、血清型及耐药性。结果显示,30株肺炎克雷伯氏菌对小鼠具有很强的致病性;43株分离菌株以K5、K20为主要流行血清型,分别占分离菌株的37.2%、27.9%;43株分离菌株对氨苄西林、阿莫西林、大观霉素等7种药物耐药性较高,耐药率在51.2%以上,对其他药物的耐药率在18.6%~234.9%之间,且呈现多重耐药性,耐10、9种药物分离菌株最多,分别占分离菌株的25.6%、27.9%。本试验为该地区猪源肺炎克雷伯氏菌病的防治提供理论基础。 相似文献
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<正>兔肺炎克雷伯氏病是由肺炎克雷伯氏菌引起的以肺炎和其他器官化脓性炎症为特征的散发性疾病。(一)病原及流行病学肺炎克雷伯氏菌为肠道、呼吸道、土壤、水和谷物等的常在菌,当兔体抵抗力下降或其他原因造成应激时(如忽冷忽热、空气不洁、长途运输、饲料的突然变换等),可促成本病的发生。各种年龄、品种和 相似文献
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鲤鱼肺炎克雷伯氏菌分离与鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
初步了解肺炎克雷伯氏菌在鲤鱼鱼体中的发病机制并筛选防治药物,为预防和治疗该病提供准确实验数据。对发病鲤鱼进行细菌分离纯化,通过革兰氏染色反应,生理生化反应测定单菌落特性,进行细菌回归试验和药敏试验。对注射菌液后发病的鱼进行细菌再分离,得到革兰氏阴性菌,并且与七叶苷及其它17种指标反应呈阳性,与戊二酰-甘氨酸-精氨酸-AMC及其它11种指标反应呈阴性,注射该菌液48 h后鱼体出现与疑似病例相同病症。分离得到的细菌,按《伯杰氏细菌鉴定手册》进行鉴定,确定为肺炎克雷伯氏菌。药敏试验结果表明该菌对亚胺培南等6种药物高度敏感。本试验首次从鲤鱼体内分离出肺炎克雷伯氏菌,并得到6种高度敏感的药物,同时阐明了肺炎克雷伯氏菌在鲤鱼中发病症状。 相似文献
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《中国畜牧兽医》2019,(11)
为研究宠物犬源bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌的携带情况,同时了解宠物犬携带bla_(CTX-M)基因肺炎克雷伯菌的耐药表型和分子特征,本研究从355只宠物犬的鼻拭子和肛拭子中分离头孢噻肟耐药细菌,通过16S rDNA和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定细菌种属。对鉴定为肺炎克雷伯菌的菌株,运用PCR检测bla_(CTX-M)基因,药物敏感性试验测定bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌的耐药表型,PFGE分型和全基因组测序技术分析bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌的分子特征。PCR结果显示,共分离到7株bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌,3株来自宠物肛拭子,4株来自宠物鼻拭子;药敏试验结果显示,7株菌均对头孢噻呋、头孢噻肟和阿莫西林-克拉维酸耐药,但对多黏菌素E、美罗培南和替加环素敏感。PFGE结果显示,其中3株细菌相似度为100%,而另外4株细菌相似度差异较大(30%)。全基因组结果显示,7株菌共有5个ST分型,bla_(CTX-M)基因分离的亚型为CTX-M-14型(n=5)和CTX-M-3型(n=2),同时这些菌株中还携带了其他β-内酰胺类、氨基糖苷类和氟喹诺酮类耐药基因。从本研究结果可以看出,目前宠物犬源bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌的检出率较低,但其多重耐药性较严重,本研究分离的耐药基因bla_(CTX-M)、bla_(SHV)亚型与国内外流行有差异。目前宠物在抗生素的使用和监控上仍有不足,需进一步关注宠物细菌耐药性,为后续防控提供依据。 相似文献