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1.
经对部分发表在NCBI里的新城疫病毒序列进行比对,在其F基因上找到1段相对保守序列,根据保守序列设计1对引物和1条TaqMan探针,以新城疫Ⅰ系疫苗株(Mukteswar株)作为标准品,通过系列条件优化、特异性、灵敏性和重复性试验,建立了一种灵敏度高、特异性强和重复性好的荧光RT-PCR检测新城疫病毒的方法.该方法能检测最低初始病毒浓度为102.2 ELD50/mL,且在108.2～102.2 ELD50/mL内Ct值与病毒浓度的对数值(lgELD50/mi)呈很好的线性关系,R2达到0.997 5;该方法对禽流感、禽痘病毒和禽大肠杆菌等禽病病原核酸无交叉反应;批间和批内重复性良好;临床样品检测中荧光RT-PCR与鸡胚分毒的符合率、诊断灵敏度和诊断特异性分别为98.5％,50.0％和98.4％.因此,荧光RT-PCR检测方法的建立为新城疫病毒检测提供了一种快速有效的方法,为新城疫病毒的研究奠定了一定的基础. 相似文献
2.
旨在为发病鸡场找到致病原,本研究利用SPF鸡胚从发病鸡组织中分离到1株病毒,病毒对1%鸡红细胞的血凝价为28,病毒的ELD50为107.83/0.1 m L,病毒可以被新城疫病毒阳性血清特异性中和,攻击该病毒的SPF鸡表现出典型的新城疫病毒感染症状,RT-PCR鉴定显示该病毒为新城疫病毒。 相似文献
3.
禽白血病给养鸡业带来极大损失,目前检测该病病原的方法主要有ELISA、PCR及RT-PCR、原位杂交(ISH)、间接免疫荧光(IFA)等。本研究应用2株抗禽白血病病毒(ALV)p27蛋白特异性单克隆抗体5D3和4F12研制了ALV快速检测试纸条。结果证明该试纸条具有良好的特异性,与H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒、马立克氏病病毒、小鹅瘟病毒、鸡贫血病病毒没有交叉反应;采用p27表达蛋白检测试纸条灵敏性,检测下限达到70ng/mL;应用该试纸条检测71份临床样品,与商业ELISA试剂盒检测结果比较,二者符合率达到93%。该试纸条的研制,为基层快速检测ALV提供了条件。 相似文献
4.
根据鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的3′端非编码区保守区域,设计并合成一对特异性引物,建立IBV纳米PCR检测方法,并进行了特异性、灵敏性和重复性试验,然后将建立的方法进行初步应用。结果显示:该方法特异性良好,能从4种不同基因型IBV核酸样品中检测到约346bp的目的条带,而对禽偏肺病毒、H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病毒、马立克氏病病毒、禽白血病病毒、鸭肝炎病毒等其他病原检测结果均为阴性;敏感性试验表明,纳米PCR的最低检测浓度为1.01×10^-4ng/μL,其敏感性是普通PCR的10倍;重复性试验显示3次均能检出IBV核酸。纳米PCR方法的临床应用表明,送检样品及攻毒鸡样品的检出率分别达到50%(10/20)和60%(30/50),与普通PCR方法检测结果符合率为100%。研究建立的IBV纳米PCR检测方法具有较高的敏感性和良好的特异性,为IBV的临床诊断、病原检测和流行病学调查提供了新的技术手段。 相似文献
5.
根据GenBank登录的传染性喉气管炎病毒(ILTV)的TK基因序列设计并合成1对特异性引物,以ILTV疫苗株DNA为模板,建立了检测ILTV TK基因的PCR方法。应用该方法能从临床分离毒株和疫苗株中扩增到长为427 bp的目的片段;但不能从新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、禽呼肠孤病毒(ARV)、减蛋综合征病毒(EDSV)、H9亚型禽流感病毒(H9-AIV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、大肠杆菌以及金黄色葡萄球菌等病原中扩增出阳性条带;敏感性试验表明其DNA最小检出量为4.9 ng;应用该方法和病毒分离法对2份临床病例和人工感染鸡的检测,两者符合率为100%。上述结果表明该PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可用于传染性喉气管炎病毒鉴定和临床诊断。 相似文献
6.
分别根据新城疫病毒与禽流感病毒的M基因、禽流感病毒HA基因上的保守序列,设计了通用型禽流感病毒、H5＼H7＼H9亚型及通用型新城疫病毒5对特异性引物和5条Taqman荧光标记核酸探针。以阳性重组质粒进行体外转录后的RNA为标准品绘制标准曲线,建立了一步实时荧光RTPCR方法。结果表明,本试验建立的标准曲线Ct值与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数大于0．99。通过利用所建立的方法与鸡胚分离法同时对新鲜采集的临床样品进行检测,2种方法的检测结果符合率为100％,说明在临床样品检测、流行病学监测方面具有良好的应用前景。 相似文献
7.
《中国兽医学报》2016,(2)
为了建立一种能够同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪A群轮状病毒(RVA)的敏感、特异的多重RT-PCR(mRT-PCR)方法,本试验分别针对PEDV和TGEV的N基因、RVA的VP7基因设计了4对引物(其中针对PEDV N基因的引物为内、外2对),结合mRT-PCR和PEDV的套式RT-PCR(nRTPCR),建立了检测PEDV、TGEV和RVA的mRT-PCR方法。mRT-PCR能够同时扩增出针对3种病毒的预期大小的目的核苷酸片段,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒及猪圆环病毒2型等病毒无交叉反应;可以检测到PEDV、TGEV和RVA的最低核酸浓度分别为16.07、803.9和321.5μg/L。应用mRT-PCR检测了31份腹泻仔猪的血清、肛拭子或小肠组织,其中PEDV、TGEV与RVA的阳性率分别为61.29%、6.45%和25.81%,并检测到了PEDV与RVA或TGEV双重感染及PEDV、TGEV和RVA三重感染的样品。在检测临床样品时,mRT-PCR和单项RT-PCR检出PEDV、TGEV和RVA的符合率分别为96.77%、93.54%和93.54%。上述结果表明,mRTPCR能够快速鉴别检测PEDV、TGEV和RVA 3种病毒,PEDV是引起当前仔猪腹泻的主要病原。 相似文献
8.
为了确定深圳出入境检验检疫局和深圳太太基因工程有限公司联合研制的禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测试剂盒对H5和H9亚型禽流感的灵敏度，通过测定已知鸡胚半数致死量（ELD50）的标准毒株的进行了定量。利用9～11日龄SPF鸡胚，对深圳出入境检验检疫局保存的H5和H9亚型标准禽流感毒株进行了鸡胚半数致死量（ELD50）的测定，结果为H5亚型禽流感毒株的半数致死量为10^-7.75/0．2mL，H9亚型禽流感毒株的半数致死量为10^-8.5／0．2mL。用所研制的禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测试剂盒对H5和H9亚型标准禽流感毒株原液进行10倍连续稀释，进行实时荧光RT-PCR灵敏度的测定，结果发现：试剂盒检测H5亚型标准禽流感毒株的灵敏度为标准毒株10^-5倍稀释液，该稀释液含有281ELD50病毒量；检测H9亚型标准禽流感毒株的灵敏度为标准毒株10^-8倍稀释液，该稀释液含有15．8ELD50病毒量。同时检测H5和H9时，试剂盒的灵敏度要比单独检测一个亚型时的灵敏度增加一个数量级。本灵敏度已经能够检测到感染鸡的喉拭子和（或）泄殖腔拭子所采集的病毒量，能够满足检验检疫的实际需要。 相似文献
9.
鸡IBV、NDV和AIV多重RT-PCR检测方法的初步建立 总被引：1，自引：0，他引：1
根据鸡传染性支气管炎病毒M基因、禽流感病毒NP基因和新城疫病毒F基因各设计1对引物,初步建立了针对鸡传染性支气管炎(IB)、新城疫(ND)和禽流感(AI)的多重RT-PCR鉴别诊断方法,并对其特异性和敏感性进行了检测。结果表明,所设计的3对引物可对同一样品中的IBV、NDV和AIV进行特异性扩增,所扩增的目的片断的长度分别为333bp(IBV)、438bp(NDV)和196bp(AIV);建立的多重RT-PCR检测方法能够检测出1ng/μLAIV、1ng/μLNDV和10ng/μLIBV的cDNA,说明该检测方法特异性强,敏感性较高。本研究所建立的多重RT-PCR方法可用于上述3种鸡病毒性呼吸道疾病的快速鉴别诊断,在临床诊断和流行病学调查方面具有较好的应用前景。 相似文献
10.
从海盐县某鸡场发病鸡群采集的拭子样品中分离到1株病毒,血凝试验、血凝抑制试验结果表明,该病毒可与1%鸡血红细胞发生凝集,且这种凝集作用可被新城疫标准阳性血清所抑制。同时进行RTPCR检测,结果可扩增出目的条带,进而确定该毒株为鸡源新城疫病毒。根据OIE对新城疫病毒毒力的判定标准和方法对该病毒进行鸡胚平均致死时间(MDT)、1日龄易感雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)和鸡胚半数致死量(ELD50)测定。结果表明,MDT=55.2 h,ICPI=1.76,ELD50=10-8.3/0.2 m L,最终判定该毒株为新城疫强毒株。 相似文献
11.
为了分析免疫鸡群中新城疫强毒感染流行的原因,明确抗体效价与流行株感染排毒率之间的关系,本研究以LaSota为抗原制备新城疫灭活疫苗,并以0.02mL和0.4mL的量分别免疫3周龄的SPF鸡10只。免疫后7、14、21d分别测定免疫鸡血清中的抗体HI效价。免疫后21d以基因Ⅶd亚型新城疫流行株JS5/05进行攻毒,攻毒后每天观察试验鸡的临床症状,并于攻毒后3、5、7d采集试验鸡的喉气管与泄殖腔棉拭样品进行病毒分离,结果显示,免疫3周后0.02mL和0.4mL疫苗免疫组鸡的血清HI抗体平均效价分别为5.4log2和8.2log2;0.02mL免疫组在攻毒后的排毒率达到100%,且排毒时间较长,而0.4mL免疫组在攻毒后的排毒率明显降低,且排毒时间较短。上述结果表明新城疫抗体效价与流行株感染排毒率之间存在明显的负相关。 相似文献
12.
从2003年10月至2004年6月,在河北、辽宁、山东等地区鸡群中大规模发生以神经症状、肠道出血为主的流行性疾病。本文对从河北省某AA肉鸡场的病死鸡中分离的病毒毒株,经过实验室的系统鉴定,证实该分离株具有血凝性,且可被ND标准阳性血清所抑制和中和,不能被AI(H5亚型与H9亚型)标准阳性血清及阴性血清抑制;该分离株的毒价为109.3ELD50/0.1ml,MDT为57.6h,ICPI为1.89,IVPI为2.62,回归试验鸡的临床表现与自然病例基本一致。试验结果证明,该毒株属于嗜神经型新城疫病毒强毒株,并命名为Q-BS株。 相似文献
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从山东地区发病鸭中分离到一株新城疫病毒(SDLP09),经测定,其鸡胚半数致死量(ELD50)、鸡胚平均死亡时间(MDT)、1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)、6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)分别为107.84/0.1 mL、48.5 h、1.80、2.36,表明该新城疫病毒为强毒.通过分析其融合蛋白(F)发现,F蛋白多肽裂解位点为112RRQKRF117,符合NDV强毒株裂解位点氨基酸序列.F基因分型及氨基酸同源性比较发现,SDLP09株属于基因Ⅶ型,与野鸭源强毒NDV同源性更高,提示着该毒株可能来源于野鸭. 相似文献
14.
本研究针对AIV H5的血凝素(HA)基因和vNDV的融合蛋白(F)基因设计两对引物,建立了单管同时检测AIVH5和vNDV的双重RT-PCR(dRT-PCR),该方法能在单一反应管内同时检测AIVH5和vNDV,不与其它亚型AIV、弱毒NDV毒株以及其它病原体发生非特异性扩增;对含有AIV H5 HA基因和vNDV F基因重组质粒DNA的最低检测限分别为20.6和406fg,敏感性与单项RT-PCR相同;从样本处理到报告结果仅需5h。对24份临床疑似样本进行检测,AIVH5均为阴性,vNDV阳性18份,PCR产物测序证明为靶基因序列,其具有vNDV F基因的特征性序列,随机选9份vNDV阳性样本接种SPF鸡胚,分离出6株vNDV,病毒分离率为6/9;对100 ELD50的AIV H5N1和100 ELD50的vNDV人工同时感染5日龄SPF鸡的脑、肝脏、肺脏和泄殖腔棉拭子进行dRT-PCR检测,AIV H5的检测率为4/5,3/5,5/5,4/5,vNDV的检测率为3/5,5/5,4/5,3/5,而对H9N2和LaSota毒株实验同时感染样本及阴性对照样本的检测均为阴性。可见本研究建立的dRT-PCR为AIV H5和vNDV诊断、监测、检疫及分子流行病学调查提供了特异性强、操作简单、检测速度快、成本低廉的新方法。 相似文献
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传染性喉气管炎新城疫鸡痘重组病毒免疫效力的研究 总被引：1，自引：2，他引：1
在表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白gB基因和新城疫病毒(NDV)F基因的重组鸡痘病毒(rF-PV-gB-F)安全性检验合格后,以5.0×101~5.0×104PFU不同含量按0.1mL/鸡的剂量免疫100只30日龄SPF鸡,30d后分组分别用ILTVWG株和NDVF48E9株强毒进行攻击。免疫鸡抗鸡痘病毒抗体都转为阳性,痘反应和接种剂量有关,重组疫苗的最小反应剂量为50PFU。重组疫苗可以诱发对新城疫和传染性喉气管炎的保护,0.1mL/鸡的接种量在500~5000PFU浓度范围内的免疫效果最好,对于ILTV攻击的发病保护率在70%以上,对NDV强毒攻击的抗死亡保护率可以达到80%,这为进一步考察疫苗的免疫效力试验以及进行田间试验奠定了基础。 相似文献
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鸡胚中新城疫强毒的分离、鉴定与生物学特性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
将来自有产蛋下降表现的一个肉用型父母代种鸡群的种蛋在实验室内孵化,每日观察鸡胚死亡情况。在孵化的24个鸡胚中有2个在孵化后8~9 d死亡,尿囊液有血凝性。在HI试验中,NDV单因子血清呈现26的HI滴度,对H9和H5亚型AIV单因子血清不呈血凝抑制活性,由此确定为新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV),分别命名为Tengz060104和Tengz060107。对该2个NDV分离株的生物学毒力指标进行测定,Tengz060104株的MDTI、CPI和IVPI分别为56.4 h、1.88和2.67,Tengz060107株的MDTI、CPI和IVPI分别为40.8 h、1.88和2.79。在6周龄SPF鸡攻毒后产生典型的ND症状的病变。表明来自鸡胚的2个分离株属强毒力、速发型NDV毒株。交叉HI中Tengz060104和Tengz060107相互间的同源性为100%,而与经典NDV毒株F48E8的同源性比较分别是66.7%和57.7%。从鸡胚中分离到新城疫强毒株在国内尚未见报道。 相似文献
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从新疆乌鲁木齐市郊区疑似新城疫的发病鸡场采集了2份病料,处理后接种鸡胚和非免疫鸡分离鉴定病毒,同时检测病毒血凝特性,观察病毒形态并测定病毒致病力。试验结果表明,分离株均能致死鸡胚,非免疫鸡出现典型的鸡新城疫病病理变化;分离毒株均有血凝特性,而且可被新城疫阳性血清所抑制;病毒形态结构与鸡新城疫病毒一致;EID50分别为10-8.0/0.1mL、10-8.6/0.1mL,MDT分别为57.6h、52.8h,ICPI分别为1.875、1.925,IVPI分别为2.39、2.82,均有很强的致病力,符合NDV强毒株的毒力标准。所有结果显示,以上2个分离株均为新城疫强毒力毒株。病毒免疫原性结果显示,2株病毒均有有良好的免疫原性,同源保护率分别为90%、80%。 相似文献