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1.
本试验旨在研究体外感染金黄色葡萄球菌与大肠杆菌对奶牛子宫内膜组织中细胞因子白介素-6(IL-6)、IL-1β和IL-8的表达及损伤程度的影响。以体外培养的奶牛子宫内膜组织作为研究对象,采用1×10~5～1×10~9 CFU/mL大肠杆菌与金黄色葡萄球菌对奶牛子宫内膜组织进行体外感染,通过实时荧光定量PCR和ELISA方法检测两种细菌刺激后奶牛子宫内膜组织中IL-6、IL-1β及IL-8 mRNA与蛋白的表达量,并用HE染色法观察两种细菌感染后奶牛子宫内膜组织病理学切片。结果显示,1×10~5～1×10~9 CFU/mL大肠杆菌体外感染后,奶牛子宫内膜组织中IL-6、IL-1β和IL-8 mRNA表达量均极显著高于空白对照组(P0.01);金黄色葡萄球菌感染浓度为1×10~5、1×10~6 CFU/mL时,IL-6、IL-1βmRNA表达量极显著高于空白对照组(P0.01),感染浓度为1×10~7 CFU/mL时,IL-6、IL-1βmRNA表达量显著高于空白对照组(P0.05),感染浓度为1×10~6 CFU/mL时,IL-8 mRNA表达量显著高于空白对照组(P0.05),其他感染浓度均与空白对照组无显著差异(P0.05)。奶牛子宫内膜组织感染1×10~5～1×10~9 CFU/mL金黄色葡萄球菌和大肠杆菌时,IL-6、IL-1β及IL-8蛋白表达量均极显著高于空白对照组(P0.01)。相同浓度的大肠杆菌感染奶牛子宫内膜组织后,IL-6、IL-1β及IL-8 mRNA与蛋白表达量均极显著高于金黄色葡萄球菌感染组(P0.01)。HE切片染色结果显示,大肠杆菌感染后仍有部分上皮细胞保留,而金黄色葡萄球菌感染后上皮细胞全部脱落。本试验结果表明,大肠杆菌与金黄色葡萄球菌感染奶牛子宫内膜组织后,引起的炎症反应不同。大肠杆菌感染后,促炎性细胞因子被显著上调,而金黄色葡萄球菌感染后破坏子宫内膜上皮细胞程度更加严重。 相似文献
2.
《中国兽医学报》2017,(5):828-832
为研究金黄色葡萄球菌(S.aureus)对奶牛乳腺成纤维细胞(BMFB)α-SMA及collagen-Ⅰ表达的影响,本研究分别用不同浓度的热灭活金黄色葡萄球菌(0,10~4,10~5,10~6,10~7和10~8 CFU/mL)刺激BMFB,24h后采用Real timePCR方法、Western blot方法及免疫荧光法检测α-SMA及collagen-ⅠmRNA和蛋白的表达量。结果显示,不同浓度灭活的金黄色葡萄球菌处理细胞的α-SMA及collagen-Ⅰ均能显著升高(P<0.05),其中以10~5 CFU/mL刺激组的α-SMA及collagen-Ⅰ的mRNA和蛋白的表达量最高。结果表明,金黄色葡萄球菌可以使奶牛乳腺成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞,为揭示金黄色葡萄球菌性乳腺炎发生硬化的机理提供数据。 相似文献
3.
为明确鼠李糖乳杆菌GR-1(L.rhamnosus GR-1)在大肠杆菌感染原代奶牛子宫内膜上皮细胞(BEECs)过程中调节炎性反应的机制，本试验将BEECs分为4个组，分别是对照组(加入5 mL培养基)、E.coli攻菌组(加入5 mL浓度为1×105 CFU/mL大肠杆菌)、L.rhamnosus GR-1单独处理组(提前3 h加入5 mL浓度为1×107 CFU/mL L.rhamnosus GR-1)和L.rhamnosus GR-1保护组(加入5 mL浓度为1×107 CFU/mL L.rhamnosus GR-1孵育3 h后去掉上清液，再加入5 mL浓度为1×105 CFU/mL大肠杆菌);采用光学显微镜观察E.coli对BEECs形态的损害情况，实时荧光定量PCR检测相关基因的转录水平，Western blot检测TLR2和NF-κB2的蛋白表达。结果显示，E.coli攻菌6 h后，与E.coli攻菌组相比，L.rhamnosus GR-1保护组BEECs形态保持完整，且TLR2、TL... 相似文献
4.
16味蒙药对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O8的体外抑菌效果研究 总被引：1，自引：1，他引：0
为筛选对奶牛乳房炎主要致病菌金黄色葡萄球菌（S.aureus）和大肠杆菌O8（E.coli O8）具有良好抑菌作用的蒙药,本试验采用牛津杯法测定金银花、黄连、何首乌、地榆、五味子、秦皮、穿心莲、甘草、蒲公英、夏枯草、虎杖、柴胡、黄柏、苦参、石榴皮、板蓝根16味蒙药的抑菌圈直径,微量稀释法和平板法测定蒙药的最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）和最小杀菌浓度（minimal bactericidal concentration,MBC）,棋盘法测定敏感蒙药对E.coli O8和S.aureus的协同指数（fractional inhibitory concentration index,FICI）。结果显示,黄柏、金银花、黄连、五味子、蒲公英、秦皮6味蒙药对S.aureus的抑菌圈直径为10.22~22.44 mm,MIC为15.6~250 mg/mL;五味子、金银花、黄连、秦皮4味蒙药对E.coli O8的抑菌圈直径为11.29~26.41 mm,MIC为15.6~500 mg/mL;黄柏与黄连联合用药对S.aureus的FICI为0.36,为协同作用,黄连与地榆联合用药对E.coli O8的FICI为0.48,为协同作用。综上所述,金银花、黄连、五味子、秦皮、蒲公英、黄柏6味蒙药对S.aureus综合抑菌效果达极敏或高敏;金银花、黄连、五味子、秦皮4味蒙药对E.coli O8综合抑菌效果达极敏或高敏,黄柏、黄连、秦皮在抑制S.aureus的组方中可优先考虑,黄连与地榆在抑制E.coli O8的组方中可优先考虑。 相似文献
5.
《中国畜牧兽医》2018,(12)
为筛选对奶牛乳房炎主要致病菌金黄色葡萄球菌(S.aureus)和大肠杆菌O8(E.coli O8)具有良好抑菌作用的蒙药,本试验采用牛津杯法测定金银花、黄连、何首乌、地榆、五味子、秦皮、穿心莲、甘草、蒲公英、夏枯草、虎杖、柴胡、黄柏、苦参、石榴皮、板蓝根16味蒙药的抑菌圈直径,微量稀释法和平板法测定蒙药的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimal bactericidal concentration,MBC),棋盘法测定敏感蒙药对E.coli O8和S.aureus的协同指数(fractional inhibitory concentration index,FICI)。结果显示,黄柏、金银花、黄连、五味子、蒲公英、秦皮6味蒙药对S.aureus的抑菌圈直径为10.22～22.44mm,MIC为15.6～250mg/mL;五味子、金银花、黄连、秦皮4味蒙药对E.coli O8的抑菌圈直径为11.29～26.41mm,MIC为15.6～500mg/mL;黄柏与黄连联合用药对S.aureus的FICI为0.36,为协同作用,黄连与地榆联合用药对E.coli O8的FICI为0.48,为协同作用。综上所述,金银花、黄连、五味子、秦皮、蒲公英、黄柏6味蒙药对S.aureus综合抑菌效果达极敏或高敏;金银花、黄连、五味子、秦皮4味蒙药对E.coli O8综合抑菌效果达极敏或高敏,黄柏、黄连、秦皮在抑制S.aureus的组方中可优先考虑,黄连与地榆在抑制E.coli O8的组方中可优先考虑。 相似文献
6.
为探究金黄色葡萄球菌(S.aureus)引起乳腺纤维化的致病分子机制,本研究以不同剂量(10~4 cfu/m L、10~6cfu/m L、10~8cfu/m L、10~(10)cfu/m L)的S.aureus感染哺乳期BALB/c小鼠乳腺组织,观察小鼠临床症状和病理组织学变化,筛选建立小鼠乳腺纤维化模型的S.aureus感染剂量。感染小鼠后分别于感染后1 d、3 d、5 d、7 d、14 d、21 d采集小鼠乳腺组织,通过病理组织学观察、免疫组化染色、荧光定量PCR、western blot等方法,研究乳腺纤维化、TGF-β1的表达分布状况,检测TGF-β1的m RNA的转录和蛋白表达水平。结果显示108 cfu/m L S.aureus感染哺乳期小鼠21 d时出现乳腺组织纤维化,确定其为建立小鼠乳腺纤维化模型的感染菌剂量。10~8 cfu/m L S.aureus感染小鼠乳腺组织后,TGF-β1主要由巨噬细胞(感染后1 d、3 d、5 d)、乳腺成纤维细胞(感染后1 d、3 d、5 d、7 d、14 d、21 d)及乳腺上皮细胞(感染后7 d、14 d、21 d)表达;在感染后3 d～7 d时小鼠乳腺组织中TGF-β1的表达先升高后降低,感染后14 d、21 d时其表达再次升高,并显著高于对照组(p0.01)。本研究表明通过S.aureus感染小鼠乳腺可以建立小鼠乳腺纤维化模型,并能够促进感染后小鼠巨噬细胞、乳腺成纤维细胞、乳腺上皮细胞中TGF-β1的表达,TGF-β1在小鼠乳腺纤维化的发生发展过程中具有重要的促进作用。 相似文献
7.
《中国预防兽医学报》2019,(9)
为探究硒(Se)对金黄色葡萄球菌(S.aureus)感染的奶牛乳腺上皮细胞(bMECs) Nod2/MAPK/mTORs信号通路的调控机制,本研究首先用不同浓度硒(2μmol/L、4μmol/L和8μmol/L)对bMECs进行预孵育,12 h后再经S.aureus感染处理。分别于感染后6 h、8 h和10 h收集bMECs提取其RNA,应用q PCR方法检测bMECs中Nod2、RIP2、JNK、AKT、mTOR、IL-8和IL-10 mRNA的转录水平。结果显示,S.aureus能显著提高bMECs中Nod2、RIP2、JNK、AKT和mTOR mRNA的转录水平(p0.01),而硒能不同程度的抑制这些因子mRNA的转录水平(p0.05或p0.01)。此外,S.aureus能显著或极显著提高bMECs中IL-8和IL-10 mRNA的转录水平(p0.05或p0.01),而硒对S.aureus感染的bMECs中IL-8和IL-10 mRNA的转录水平有明显抑制作用(p0.05或p0.01)。上述结果表明,硒可通过抑制Nod2/MAPK/mTORs信号通路的转导而减轻S.aureus诱导的bMECs的炎症反应。本研究为阐明硒能减轻S.aureus诱导的bMECs炎症反应的机制提供试验依据。 相似文献
8.
HCG通过StAR蛋白快速调节睾酮的合成 总被引：1，自引：1，他引：0
以2~3周龄长白仔猪睾丸间质细胞为材料研究HCG对睾酮合成的快速调节作用。结果表明:(1)在2h内,对照组间质细胞分泌睾酮的量为(3.25±0.28)ng/mL,而HCG(浓度为50IU/mL)处理组睾酮的浓度为(8.79±0.54)ng/mL,增幅为4.54ng/mL,二者差异极显著(P<0.01);(2)在2h内,对照组细胞内cAMP的浓度为(13.13±1.12)pmol/mL,而处理组cAMP的浓度为(39.22±2.38)pmol/mL,二者之间差异极显著(P<0.01);(3)加入前体物后,胆固醇对照组睾酮浓度为(3.81±0.45)ng/mL,处理组睾酮浓度为(27.13±1.27)ng/mL,处理组睾酮的浓度明显高于对照(P<0.05),其它几种前体对照组与处理组差异不显著(P>0.05)。(4)在2h内,HCG增加了StAR蛋白和mRNA的表达。这表明在快速反应期,HCG通过促进StAR蛋白的表达,增强睾酮的生物合成。 相似文献
9.
本试验旨在研究体外感染金黄色葡萄球菌与大肠杆菌对奶牛子宫内膜组织中细胞因子白介素-6（IL-6）、IL-1β和IL-8的表达及损伤程度的影响。以体外培养的奶牛子宫内膜组织作为研究对象,采用1×105~1×109 CFU/mL大肠杆菌与金黄色葡萄球菌对奶牛子宫内膜组织进行体外感染,通过实时荧光定量PCR和ELISA方法检测两种细菌刺激后奶牛子宫内膜组织中IL-6、IL-1β及IL-8 mRNA与蛋白的表达量,并用HE染色法观察两种细菌感染后奶牛子宫内膜组织病理学切片。结果显示,1×105~1×109 CFU/mL大肠杆菌体外感染后,奶牛子宫内膜组织中IL-6、IL-1β和IL-8 mRNA表达量均极显著高于空白对照组（P<0.01）;金黄色葡萄球菌感染浓度为1×105、1×106 CFU/mL时,IL-6、IL-1β mRNA表达量极显著高于空白对照组（P<0.01）,感染浓度为1×107 CFU/mL时,IL-6、IL-1β mRNA表达量显著高于空白对照组（P<0.05）,感染浓度为1×106 CFU/mL时,IL-8 mRNA表达量显著高于空白对照组（P<0.05）,其他感染浓度均与空白对照组无显著差异（P>0.05）。奶牛子宫内膜组织感染1×105~1×109 CFU/mL金黄色葡萄球菌和大肠杆菌时,IL-6、IL-1β及IL-8蛋白表达量均极显著高于空白对照组（P<0.01）。相同浓度的大肠杆菌感染奶牛子宫内膜组织后,IL-6、IL-1β及IL-8 mRNA与蛋白表达量均极显著高于金黄色葡萄球菌感染组（P<0.01）。HE切片染色结果显示,大肠杆菌感染后仍有部分上皮细胞保留,而金黄色葡萄球菌感染后上皮细胞全部脱落。本试验结果表明,大肠杆菌与金黄色葡萄球菌感染奶牛子宫内膜组织后,引起的炎症反应不同。大肠杆菌感染后,促炎性细胞因子被显著上调,而金黄色葡萄球菌感染后破坏子宫内膜上皮细胞程度更加严重。 相似文献
10.
《饲料工业》2021,(14)
试验旨在探讨粪肠球菌(Enterococcus faecalis, E. faecalis)W24对乌鳢生长、抗氧化及免疫功能的影响。将540尾初始体重为(8.91±0.02)g的乌鳢随机分为6组,每组3个重复,在基础饲料中分别添加浓度为0(对照组)、1.0×10~6、1.0×10~7、1.0×10~8、1.0×10~9CFU/g及1.0×10~(10)CFU/g的E. faecalis W24,配制成6种试验饲料,进行为期8周的饲养试验。试验结束后,测定乌鳢生长性能、肝脏和肠道抗氧化能力及血清免疫指标。在饲料中添加1.0×10~7CFU/g和1.0×10~8CFU/g E. faecalis W24显著提高了乌鳢的终末体重(FBW)、增重率(WG)、饲料效率(FER)、蛋白质效率(PER)及特定生长率(SGR)(P0.05)。添加1.0×10~7、1.0×10~8CFU/g和1.0×10~9CFU/g E. faecalis W24显著提高了乌鳢肝脏和肠道中的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性并显著降低了丙二醛(MDA)水平(P0.05)。添加1.0×10~7CFU/g和1.0×10~8CFU/g E. faecalis W24显著提高了乌鳢血清中的免疫球蛋白M(Ig M)、补体3(C3)、补体4(C4)含量及酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)和溶菌酶(LZM)活性(P0.05)。饲料中添加适量E. faecalis W24可有效提高乌鳢生长性能,增强肝脏和肠道的抗氧化能力和血清免疫功能,且在乌鳢配合饲料中E. faecalis W24最适添加量为1.0×107～1.0×108CFU/g。 相似文献
11.
多重PCR检测奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和酵母菌方法的建立与应用 总被引：2，自引：0，他引：2
参照GenBank发表的序列，在金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和停乳链球菌16SrRNA与23SrRNA之间的区域设计了3对引物，参照念珠菌和隐球菌的18SrRNA的序列设计1对引物，建立了检测金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和酵母真菌4种乳腺炎主要致病菌的多重PCR方法。参照Skladny的方法制备模拟了细菌感染l临床标本。结果表明：本试验建立的多重PCR方法具有较好的特异性，多重PCR方法检测乳样中的金黄色葡萄球菌的细菌最小浓度为10^4CFU／mL，检测无乳链球菌、停乳链球菌和酵母真菌的细菌最小浓度分别为10^4CFU／mL、10^3CFU／mL和10^3CFU／mL。通过对采自临床型乳腺炎（46个）和隐性乳腺炎（167个）动物共计213个乳样分别用传统细菌学培养法和多重PCR方法进行检测，多重PCR对金黄色葡萄球菌和酵母真菌的检测具有更高的检出率（P〈0．01），但该方法对无乳链球菌和停乳链球菌的检出率与培养法差异不显著（P〉0．05）。 相似文献
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为建立一种直接从乳样中快速提取细菌DNA的方法,试验通过人工制备8个倍比稀释细菌的乳样,检测了Chelex-100法提取3种奶牛乳房炎主要致病菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌)DNA进行PCR扩增的敏感性,并与苯酚—氯仿法进行了比较分析。结果显示,以Chelex-100法提取乳样中细菌DNA进行PCR扩增具有较高的敏感性,所检测金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌的最小浓度分别为103、102、102 CFU/mL;而使用苯酚—氯仿法提取乳样中各细菌DNA的PCR敏感性均为104 CFU/mL。综上所述,Chelex-100法提取乳样细菌DNA的PCR敏感性可以满足临床检测奶牛乳房炎的需要,显现了简单快速、经济、无污染的优点,为从乳样中直接提取细菌DNA提供了新的思路,对PCR快速检测乳房炎致病菌具有重要意义。 相似文献
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A mastitis model in rats, induced by Escherichia coli infection, was established and the protective effect of Cytosine-phosphate-Guanosine (CpG)-DNA was determined. An E. coli suspension containing either 2 x 10(3) colony forming units (CFU)mL(-1)(EL group), 2 x 10(5)CFU mL(-1) (EH group), or (as controls) 100 microL phosphate buffer saline (CON group), was inoculated into the mammary glands 72 h after parturition. The rats were euthanased 24 h post-infection. The histopathological changes in mammary tissue in the EL group were mild, whereas the structural changes in the EH group were severe and polymorphonuclear leukocytes (PMNs) had accumulated in the mammary alveoli. Interleukin (IL)-6 and tumour necrosis factor (TNF)-alpha and N-acetyl-beta-d-glucosaminidase (NAGase) were significantly increased in the mammary tissue from the EH group but not significantly changed in the EL group. On the basis of these findings, the potential protective effect of CpG-DNA on mammary glands was tested using a 2 x 10(5)CFU mL(-1) suspension. An intramuscular injection of either CpG-DNA (200 microg) or PBS (100 microL) was given immediately after parturition. At 72 h post-partum, 2 x 10(5)CFU mL(-1)E. coli (100 microL) were inoculated into the mammary glands of all rats. At pre-infection (0 h), and 8, 16, 24, 48 and 72 h after inoculation six rats were euthanased. CpG-DNA induced more rapid migration of PMNs from the blood to mammary tissue at the initial stage of infection, stimulated the secretion of IL-6 and TNF-alpha at different time points, reduced viable E. coli in mammary tissues and decreased the activity of NAGase. CpG-DNA also promoted the expression of its specific receptor TLR-9 mRNA in mammary tissue. The study showed that CpG-DNA protected against E. coli mastitis in this rat model. 相似文献
16.
建立伴大豆球蛋白酶解产生抑菌肽的最适条件,对酶解产物进行分离纯化后进一步测定其抑菌活性。采用复合风味蛋白酶水解伴大豆球蛋白,测定不同时间的酶解液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性。结果显示:2 h水解产生的酶解肽具有抑菌活性,其对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别是2.6和3.2 mg/mL。2 h水解液经Sephadex-G15分离纯化,采用平板计数法鉴定各组分。结果显示:CP2组分对大肠杆菌具有显著的抑制作用(P<0.05)。本研究证明伴大豆球蛋白的复合风味蛋白酶酶解肽具有一定的抑菌活性。 相似文献
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武夷岩茶茶多酚抑菌作用的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
用纸片法测定了1.0、2.5、5.0、10mg/mL 4种浓度的武夷岩茶茶多酚对大肠杆菌、致病性大肠杆菌、李斯特氏沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等4种菌的抑菌效果。实验结果表明,茶多酚对4种菌均有明显的抑菌作用,其中对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强（P〈0.01）,4种浓度的抑菌圈分别为1.82±0.44～3.34±0.18（cm）;对李斯特氏沙门氏菌、大肠杆菌、致病性大肠杆菌的抑菌作用次之,抑菌圈分别为1.73±0.18～2.05±0.14（cm）;1.46±0.33～1.85±0.32（cm）;1.1±0.14～1.61±0.25（cm）。1mg/mL的茶多酚对4种菌的抑菌作用均小于同剂量的青霉素和庆大霉素（P〈0.01）。 相似文献
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传统中药五倍子(Galla chinensis, GC)被证明具有较好的抑菌效果,但其抑菌活性与活性成分之间的关联性不够明确。本研究采用大孔树脂从GC水提物(water extracts of GC, GCE)中分离五倍子单宁(gallotannins, GT)并收集大孔树脂脱GT后的剩余物(GTrE)；高效液相色谱法用于测定GCE中没食子酸(gallic acid, GA)和没食子酸甲酯(methyl gallate, MG)含量；然后通过最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)法比较了GCE与其活性成分对耐药大肠杆菌(E. coli)和金黄色葡萄球菌(S. aureus)的抑菌活性,分析了活性成分含量与五倍子抑菌活性的关联性。结果表明,GCE对耐药E. coli和S. aureus具有显著的抑制作用。GT和GTrE与GCE的抑菌作用类似,两者在GCE中的含量分别为58.3%和22.8%,联合使用多呈现相加作用,对不同E. coli菌株的MIC范围为5-20 mg/mL；对不同S. aureus菌株的MIC范围为0.156-0.625 mg/mL。这提示GCE、GT和GTrE对S. aureus抑制的选择性更强。GA对上述两种菌的MIC范围为5-10 mg/mL,MG则为1.25-2.5 mg/mL,但GA和MG在GCE中的含量较低,分别为3.1665%和0.0899%。以上结果表明GCE具有显著的抑菌活性,GA和MG与其抑菌作用相似,但两者在GCE中的浓度远远低于它们的MICs。故推测含量较高的GT和GTrE或者未知组分的联合可能是五倍子发挥抑菌活性的主要成分。 相似文献