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1.
胡繁荣 《江西农业大学学报》2004,26(1):78-82
以结缕草愈伤组织为试材,利用农杆菌介导法时包括辐照、愈伤组织状态、共培养条件及负压处理等辅助处理方法对愈伤组织瞬间表达频率的影响进行研究。结果表日日：2Gy的辐照剂量利于提高瞬间表达频率;1-2个月的愈伤组织适于转化;全光照的共培养条件下瞬间表达频率高于16／8h光照培养和暗培养条件下瞬间表达频率;农杆菌与愈伤组织混合培养时给予适当的负压条件可提高愈伤组织瞬间表达频率和存活率。 相似文献
2.
以红刺玫无菌苗为初始材料,通过探讨外植体、培养条件,以及激素配比浓度和暗培养时间对愈伤组织分化芽的影响,建立了红刺玫叶片愈伤组织诱导的再生体系:MS为初始培养基,暗培养21 d,愈伤组织诱导率达到100%。分化培养基为MS+TDZ 1.5 mg/L+NAA0.05 mg/L,暗培养8 d,芽分化率达48%;通过遗传转化条件优化,建立了以红刺玫愈伤组织为转化受体,通过根癌农杆菌介导,以红刺玫的DFR-RNAi为表达载体,GUS为标记基因的遗传转化体系,转化效率达到50%。 相似文献
3.
采用农杆菌介导法对紫穗槐茎段诱导的愈伤组织进行遗传转化研究。确定了卡那霉素临界耐受浓度为40mg/L。菌液浓度与侵染时间的正交试验结果表明:侵染菌液OD600为0.8、侵染时间为30min时转化效率最高,达17.95%。GUS染色检测分析表明:含pBI121-GUS质粒DNA农杆菌侵染转化的愈伤组织其抗性不定芽和再生植株根和叶均呈蓝色。转化植株叶PCR检测结果表明外源GUS基因已整合到紫穗槐基因组中。以上结果表明建立了以茎段诱导愈伤组织为转化受体、农杆菌介导的紫穗槐高效遗传转化体系。为了验证其可重复性,又进行了pBI121-GFP基因的转化,T0代再生植株PCR检测整合率达85%,在488nm蓝光源激发下转化株的顶芽产生绿色荧光,说明转入的基因在35S启动子下过量表达。此遗传转化体系可应用于转基因育种。 相似文献
4.
用辐射剂量为10、20、30、40 Gy的60Co射线对豆梨的叶片和叶片诱导的愈伤组织进行辐射处理,研究了辐照处理对叶片愈伤组织分化率、叶片与愈伤组织的组织褐化率、芽再生分化率、分化芽的数量以及再生苗继代培养成活的影响.结果表明,60Co射线对叶片愈伤组织分化、辐照组织的褐化、分化能力均有影响.低剂量(10 Gy)促进叶片愈伤组织的形成,而高剂量则起抑制作用.随着辐照剂量的增加,叶片和愈伤组织的褐化程度均加重,而分化能力减弱,再生苗继代培养成活率降低.适宜豆梨叶片和愈伤组织辐射诱变的辐照剂量为20～30 Gy. 相似文献
5.
不同种胚及激素处理对高羊茅愈伤组织诱导的影响 总被引：8，自引：0，他引：8
以高羊茅成熟种子为外植体 ,研究了不同浓度 2 ,4-D、BA及不同的种子处理方式 (不切胚、切胚 )对高羊茅种子愈伤组织诱导的影响。研究结果显示 :①激素浓度对高羊茅种子萌芽及愈伤组织诱导的影响很大 ,过高浓度的 2 ,4-D、BA对种子萌芽和愈伤组织的形成均有负作用 ;②不同的种子处理方式对愈伤组织诱导的差异显著 ,切胚的种子愈伤诱导率的平均值为 11.0 7% ,而不切胚的种子愈伤诱导率的平均值仅为 2 .65 % ;③MS培养基下不同浓度 2 ,4-D对高羊茅愈伤诱导的差别很大 ,以 3mg/L效果最佳 ;④BA对愈伤组织的诱导存在一定的负效应 ,在培养基中添加的BA浓度越高 ,愈伤诱导率越受到抑制 ;⑤ 2 ,4-D +BA的不同配比浓度对愈伤组织的诱导存在一定差别 ,以MS +3mg/L 2 ,4-D +0mg/LBA的组合为最优组合 ,产生的愈伤组织最多。 相似文献
6.
高羊茅组织培养基的选择 总被引：2，自引：1，他引：2
用不同种类的基本培养基及不同浓度2，4-D、6-BA，对本地高羊茅的种子进行愈伤诱导，结果表明：基本培养基种类对愈伤诱导无明显的效果；MS培养基下不同浓度2，4-D、6-BA对高羊茅愈伤诱导时间及出愈率差别很大，以9mg/L效果最佳，愈伤诱导率达70．2％左右；过高浓度2，4-D、6-BA对萌芽和愈伤的形成有负作用；愈伤组织分化以MS-PBA2.0mg/L-NAAO-5mg／L为最佳MS基本培养基，2，4-D浓度以9．0mg／L为最佳，最适合高羊茅愈伤组织诱导的培养基为MS＋9.0mg／L 2，4-D。 相似文献
7.
高羊茅成熟种子组织培养的影响因素研究Ⅰ.多种因素对愈伤组织诱导的影响 总被引：1，自引：2，他引：1
以4个草坪型高羊茅品种的成熟种子为外植体,研究多种因素对愈伤组织诱导的影响.结果表明,增加2,4-D浓度能显著提高高羊茅成熟种子愈伤组织诱导率,而同时辅之以ABA则能获得更好的诱导效果,其最佳组合为8 mg,/L 2,4-D 2 mg/L ABA;种子灭菌后纵切或切胚可使出愈率成倍提高;采用MS基本培养基和在培养基中添加水解酪蛋白与谷氨酰胺也有助于提高出愈率;诱导培养基中添加BAP在多数情况下导致出愈率降低,但对改善愈伤组织质量有利. 相似文献
8.
结缕草组织培养及转化因子的初步研究 总被引：10，自引：0，他引：10
胡繁荣 《河北农业大学学报》2004,27(2):21-24
以破除休眠的结缕草种子为试材，对其愈伤组织的诱导、分化及农杆菌介导转化的关键因子作了探索，结果表明：结缕草种子愈伤组织的诱导以含2，4-D 1mg/L NAA 3mg/L 6-BA0．2mg/L、分化以KT 3mg/L 6-BA 3．5mg/L NAA 0．1mg/L、生根培养以含0．2mg/L NAA的MS培养基效果最佳。通过瞬间表达的研究表明，以继代培养2周的愈伤组织为材料，农杆菌介导感染10min进行转化为佳。 相似文献
9.
具有高再生性且对农杆菌C58敏感的玉米自交系材料的筛选 总被引：1，自引：0，他引：1
以70个优良高代玉米自交系的幼胚为材料进行离体培养，从中筛选出胚性愈伤组织诱导率高、克隆力强的10个自交系，将其一部分胚性愈伤组织用作分化，研究其再生能力；另一部分用农杆菌C58转化，利用植物载体中携带的GUS报告基因的瞬时表达研究玉米基因型对农杆菌的敏感性。结果表明，10个自交系都具有再生能力。自交系6010、6060、6038、6051和6015的分化力相对较高。玉米基因型对农杆菌的敏感性存在极显著差异，其中自交系6051最敏感，而6034、6038对农杆菌不敏感。因此认为自交系6051、6015、6010和6060是再生能力强且对农杆菌C58敏感的自交系材料。 相似文献
10.
高羊茅愈伤组织再生系统的建立 总被引：6，自引：2，他引：6
为建立高羊茅愈伤组织再生系统，以猎狗5号、沸浪和交战二号为试材，通过选用不同基本培养基、不同2，4-D的诱导浓度、去除胚乳等方法对高羊茅成熟种子进行了愈伤组织诱导培养，结果表明，愈伤组织诱导以CC培养基为最适基本培养基，2，4-D的最佳诱导质量浓度为8mg／L。去除胚乳可使愈伤组织诱导率大大提高，愈伤组织质量也有很大程度改善，在愈伤组织的分化及生根培养中，6-BA的最佳质量浓度为2mg／L，对于猎狗五号愈伤组织，其分化和生根的最适基本培养基为MS培养基，而沸浪和交战二号的最适基本培养基为NB培养基。 相似文献
11.
借助粒子轰击提高农杆菌转化水稻的频率 总被引：5，自引：1，他引：5
为了提高农杆菌转化水稻的频率，对粳稻品种台北309的幼穗和成熟胚的愈伤组织诱导频率和粒子轰击时其愈伤组织转化频率的影响进行了研究。结果表明，水稻幼穗是诱导愈伤组织的最佳外植体，通过粒子轰击可以有效地提高农杆菌转化水稻愈伤组织的频率，其中以每个样品轰击两次的效果最好，其转化率比对照提高54．5％。 相似文献
12.
农杆菌介导小麦遗传转化方法的优化与应用 总被引：1，自引：0，他引：1
《河南农业大学学报》2017,(6)
为了优化农杆菌介导小麦遗传转化方法,以郑麦9023幼胚愈伤组织为材料,研究了60Coγ射线辐照对农杆菌介导法遗传转化的影响。结果表明,在辐照剂量为4 Gy,辐照处理后以继代培养24 h时β-葡萄糖苷酸酶(gus)基因瞬时表达率最高。负压抽拉处理结果表明,抽拉10次可明显提高农杆菌介导的遗传转化效率。转基因抗性再生植株bar基因分子标记检测结果表明,利用改良的遗传转化处理方法(4 Gy辐照+辐照后培养24 h+负压抽拉处理10次),可将遗传转化效率由2.2%提高至3.5%,优化后的小麦农杆菌转化方法可应用于小麦遗传转化。 相似文献
13.
根癌农杆菌介导的水稻遗传转化体系的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]对新疆推广种植的水稻品种进行组织培养,探索适合新疆水稻品种的遗传转化条件,为新疆水稻的遗传改良工作奠定基础.[方法]以新疆3个水稻品种成熟胚诱导的良好胚性愈伤组织为受体,以SiPEBP为目的基因,应用农杆菌介导法对水稻进行遗传转化,同时以抗性愈伤率为依据,对影响转化的愈伤诱导率、农杆菌侵染浓度、时间和共培时间进行优化研究.[结果]在NB培养基中添加2 mg/L的2,4-D的愈伤诱导率高;相比25℃、暗培养,28℃、持续光照培养可使诱导率提高到100;,且缩短了诱导周期;在OD600值为0.3的农杆菌菌液浓度,侵染愈伤30 min,共培养2d,同时添加一张无菌滤纸,有利于提高转化效率;通过培养条件的优化,3个水稻品种的抗性愈伤率均达到40;以上.[结论]新疆水稻农杆菌转化的几个主要因素,建立了农杆菌转化体系. 相似文献
14.
以新农1号狗牙根成熟种子为外植体，通过种子划破处理、不同激素浓度组合对种子发芽及愈伤组织诱导，不同继代培养基对愈伤组织增殖和质量影响的研究，结果表明：与未切割的新农1号狗牙根种子相比，切割后的新农1号狗牙根种子发芽率和愈伤组织诱导率均有显著提高，种子发芽率平均提高21％，愈伤组织诱导率平均提高14％，出愈时间提早5～10d；愈伤组织诱导中，添加4．00mg／L 2，4-D＋1．00mg／L 6-BA的诱导培养基所形成的愈伤组织质量较优；继代改造培养基中添加6％蔗糖＋0．50mg／L 2，4-D有利于胚性愈伤组织的生长，其分化率达50％。 相似文献
15.
高羊茅种子愈伤组织诱导及植株再生研究 总被引：17，自引：0，他引：17
该文以MS培养基为基本培养基 ,两个品种的高羊茅种子为外植体 ,接种在附加 2 ,4 D、KT、6 BA、NAA、IAA、水解乳蛋白等不同激素和营养物质的培养基上 ,研究了诱导高羊茅种子愈伤组织形成的主要因素 .结果发现在不同种类和浓度的激素条件下 ,愈伤组织的诱导率有很大的差异 ,2 ,4 D是诱导高羊茅种子形成愈伤组织的关键因素 ,而KT、6 BA、NAA、IAA则没有明显的效果 ,并从多种培养基组合中筛选出了诱导愈伤组织的最佳培养基 ,高羊茅种子的愈伤组织诱导以MS + 6mg L 2 ,4 D + 50 0mg L水解乳蛋白为最佳 .通过愈伤组织的继代和分化培养 ,诱导出丛生芽 ,分化培养基以MS + 4mg L 2 ,4 D + 0 .2mg LKT为最佳 ,初步建立起高羊茅的植株再生体系 相似文献
16.
根癌农杆菌介导转化籼稻影响因素的研究 总被引：19，自引：1，他引：19
选用我国籼型杂交稻中的几个重要亲本，以携带有双元载体pCAMBIA1301的根癌农杆菌EHA105为载体，以GUS基因的瞬间表达为依据，研究癌农杆菌介导转化籼稻的影响因素，确立对转化频率有重要影响的几个条件。结果表明：经短期预培养（4－5d）的幼胚是较为理想的转化受体材料；在共培养其中添加较高浓度的乙酰丁香酮（300－400μmol/L）可提高GUS基因的瞬间表达频率；以CC培养基作为共培养后抗性愈伤筛选的基本培养基有利于抗性愈伤组织的筛选培养，按此确立的条件，在特青、龙特甫（B）、珍汕97（B）、盐恢559等籼稻品种或新本中的GUS瞬间表达率高达80％，抗性愈伤组织转化率高达70％。 相似文献
17.
以“猎狗5号”、“上农矮生高羊茅”和“98-19”3份高羊茅(FestucaarundinaceaSchreb.)品种为供试材料,成熟种子胚为外植体,在MS基本培养基上分别添加不同2,4-D浓度,并用2,4-D分别与BA、NAA不同配比进行愈伤组织诱导与分化试验。结果表明:2,4-D浓度对愈伤组织的诱导起决定性作用,9mg.L-1为较佳诱导浓度;BA对于愈伤组织诱导有负作用,与不添加BA的处理相比,愈伤组织诱导率降低了20%;NAA有利于减少根毛,改善愈伤质量。愈伤组织分化以MS+BA2.0mg.L-1较为合适。 相似文献
18.
将从水稻中提取的抗性调节转录因子OsDREB2.2基因,通过农杆菌介导进入小麦组织细胞内的方法,培育筛选稳定遗传的植株,使小麦中的一系列抗性基因得以表达,从而培育出抗逆性强的小麦新品种。采用河北农业大学自主培育的小麦新品种河农825、河农827、河农831等为试验材料,以各自幼胚为外植体,诱导的愈伤侵染农杆菌后,获得的抗性愈伤组织数平均为170.44、分化愈伤数平均为24.56、抗性芽与转化幼胚总数的比例平均为0.96%。表明本研究中采用的愈伤组织诱导、农杆菌侵染和植株再生条件是适宜的。 相似文献
19.
以70个优良高代玉米自交系的幼胚为材料进行离体培养,从中筛选出胚性愈伤组织诱导率高、克隆力强的10个自交系,将其一部分胚性愈伤组织用作分化,研究其再生能力;另一部分用农杆菌C58转化,利用植物载体中携带的GUS报告基因的瞬时表达研究玉米基因型对农杆菌的敏感性.结果表明,10个自交系都具有再生能力,自交系6010、6060、6038、6051和6015的分化力相对较高.玉米基因型对农杆菌的敏感性存在极显著差异,其中自交系6051最敏感,而6034、6038对农杆菌不敏感.因此认为自交系6051、6015、6010和6060是再生能力强且对农杆菌C58敏感的自交系材料. 相似文献
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农杆菌介导水稻转化条件的优化 总被引：1，自引：0，他引：1
应用TAC（transformation-competition artificial chromosome)载体和pCAMBIA1300分别与农杆菌LBA4404组合转化水稻成熟胚愈伤组织，探索了农杆菌转化的有关因素。结果表明：共培养培养基上铺上1张滤纸有利于控制农杆菌的过度生长；粳稻品种转化率明显高于籼稻；干燥处理能有效杀死农杆菌，并有利于提高转化率，预再生可提高抗性愈伤组织的再生率而提高转化率。 相似文献