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1.
为获得甘草的药用成分和保护甘草野生资源,利用发根农杆菌ATCC15834、A4 侵染乌拉尔甘草幼苗、子叶、下胚轴,获得毛状根,建立了乌拉尔甘草毛状根培养系统,经PCR和毛细管凝胶电泳检测,在248 bp 有rolA 基因,在490 bp 有rolC 基因,证实发根农杆菌基因片段在甘草毛状根的基因组中整合并得到表达,其中无菌实生苗毛状根诱导率达79.5%,毛状根分枝较多,生长速度快,在不添加激素的1/2MS液体培养基中生长明显,培养25 天后,鲜重平均增殖达19.13 倍,乌拉尔甘草毛状根培养体系的建立为进一步利用生物反应器规模化培养甘草药用活性成分提供了参考。 相似文献
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《分子植物育种》2021,19(15):5010-5016
沉香是名贵药材之一,白木香(Aquilaria sinensis)是沉香的唯一基源植物。为明确外植体和诱导条件对白木香发根的影响,本研究利用发根农杆菌SW101侵染白木香无菌苗,并将携带gfp基因的载体转入SW101后诱导发根。结果显示,当子叶、叶片和茎段作为外植体时,最适诱导发根条件为MS+200μmol/L乙酰丁香酮的固体培养基上于25℃(12 h光照)预培养2 d后,于28℃,180 r/min条件下发根农杆菌侵染10 min。相同诱导条件下,以子叶为外植体的发根率为69.6%,以叶片和茎段为外植体的发根率为50.0%。本研究成功将外源基因gfp导入诱导产生的毛状根中,PCR可检测到外源基因的插入;荧光显微镜下可观察到绿色荧光。利用这一体系可以稳定表达外源基因,可作为白木香功能基因解析和结香机理研究的技术支持。 相似文献
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罗汉果遗传转化受体再生体系的建立及发根农杆菌转化初探 总被引：1，自引：1，他引：0
以罗汉果品种“青皮果”试管苗的茎段和叶片为外植体,研究适合于遗传转化的受体再生系统,并进行了发根农杆菌转化的初步研究。试验结果表明茎段的再生能力强于叶片,且对农杆菌敏感,是进行遗传转化合适的受体材料。在MS基本培养基附加BA 1mg/L、KT 1mg./L、NAA 0.2mg./L、蔗糖30 mg/L培养基中,20d龄的茎段不定芽诱导率为100%,平均每个外植体诱导的不定芽数达到9.7个,移苗成活率90%以上;外植体培养前的割伤处理有利于提高出芽数;发根农杆菌转化茎段诱导出毛状根。罗汉果毛状根的诱导和培养将为罗汉果药用成分的研究和开发提供新的途径。 相似文献
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中国甘草的组织培养研究进展 总被引：5，自引：0，他引：5
概述了国内在甘草植株再生、快速繁殖和毛状根培养方面的研究进展情况。甘草组织培养的基本培养基为MS,诱导培养基主要附加激素为2,4-D、6-BA和NAA,其中6-BA(0.2￣1.0mg/L)必不可少;分化培养基以MS无机元素和B5的有机成分为基本培养基,并附加ZT、BA、KT,三者可单独使用或配合NAA使用;生根培养基主要是添加NAA(0.05￣0.01mg/L)。能分化成苗的外植体仅有下胚轴,而且分化率极低,仅为3%￣6%。快速繁殖方法有腋芽丛状茎生根成苗和带叶茎段直接生根成苗两种,其中带2叶茎段成苗繁殖系数最高,达到98%。发根农杆菌ATCC15834感染甘草下胚轴诱导产生毛状根效果最好,诱导率高达30%。毛状根的最佳培养条件是:50mg/LKNO3,100mg/LCaCl2·2H2O,0￣225mg/LKH2PO4,640mg/LMgSO4·7H2O,微量元素及有机物质采用B5水平,32.5g/L蔗糖,转速100r/min,pH6.2左右,通过毛状根的培养可获得原植物中含有的或者不含有的化合物。 相似文献
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以白菜型油菜（Brassica rapa）的亚种菜心（Brassica parachinensis）的子叶和下胚轴为外植体,研究了卡那霉素、潮霉素、羧苄青霉素和头孢霉素4种抗生素对菜心子叶和下胚轴愈伤组织诱导和生长的影响,以及羧苄青霉素和头孢霉素对农杆菌LBA4404的抑制效果。结果表明：卡那霉素、潮霉素对菜心子叶和下胚轴愈伤组织的诱导有较强的抑制作用,卡那霉素作为抗性筛选剂,子叶的筛选浓度为10 mg/L,下胚轴的筛选浓度为15 mg/L,潮霉素作为筛选剂,子叶的筛选浓度为8 mg/L,下胚轴的筛选浓度为6 mg/L;羧苄青霉素、头孢霉素对菜心子叶和下胚轴的愈伤组织的诱导影响较小,对农杆菌LBA4404有较强的抑菌作用,作为抑菌剂羧苄青霉素、头孢霉素的浓度以200~400 mg/L为宜。 相似文献
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栽培型与野生型青蒿愈伤组织及毛状根的诱导 总被引：1，自引：1，他引：0
为了比较栽培型与野生型引种青蒿愈伤组织及毛状根的诱导差异,以2种类型青蒿种子为材料,在不加激素的MS培养基中诱导青蒿苗,并利用青蒿的根、茎和叶片在MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L诱导愈伤组织,发根农杆菌C58C1、ATCC15834和Accc10600诱导毛状根。结果表明青蒿愈伤组织诱导效率以根最佳,其次为茎和叶片。农杆菌C58C1和ATCC15834分别以青蒿的根和叶片的诱导率可达100%和70%;Accc10600菌种不能诱导青蒿叶片毛状根发生,但是可诱导根生出毛根的芽点。该研究为青蒿素的生物反应器规模化生产奠定了基础。 相似文献
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为建立西兰花毛状根高增殖能力悬浮培养体系,实验对通过发根农杆菌ATCC15834浸染西兰花叶片获得的毛状根进行PCR检测,高增殖液体悬浮培养体系条件的优化,毛状根生长动态与萝卜硫素合成动力学研究。实验结果表明,诱导出的毛状根整合了发根农杆菌ATCC15834的rol B基因。毛状根液体悬浮培养的最佳条件为:接种量为1mg/mL、转速为110r/min、培养基体积100mL、培养温度为25℃,增殖倍数达26.47倍。毛状根悬浮培养生长分为迟滞期、分化期、增殖期、静止期、衰亡期五个时期,萝卜硫素的合成于培养的静止期,并向培养基中少量释放,且最佳收获时间为接种后的第21天。这一研究结果可为次生代谢产物萝卜硫素的生产提供一定的理论基础。 相似文献
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番茄遗传转化体系的建立及LC和GFP标记基因的表达 总被引：2，自引：0，他引：2
本研究以小型番茄(miniature Lycopersicon esculentum Mill.)Micro-Tom为试材,建立其以子叶、下胚轴为外植体的高效、稳定再生体系及遗传转化体系。结果表明,以子叶、下胚轴为外植体时,诱导愈伤组织和芽分化的适宜培养基均为MS 6-BA2.0mg/L IAA0.2mg/L,芽分化率均可高达92%。两种外植体适宜的生根培养基均为MS NAA0.1mg/L。同时,通过根癌农杆菌介导法,建立了Micro-Tom的遗传转化体系。而乙酰丁香酮能大大提高根癌农杆菌转化番茄的效率,当AS=180μm/L时,芽分化率为52.8%;OD600=0.14是转化的最佳菌液浓度;子叶外植体与农杆菌共培养后,经过诱导,根的再生,获得了抗性苗,利用绿色荧光蛋白(GFP)检测和整株表型为紫色(Lc)基因的表达,初步证明外源基因已经整合到Micro-Tom中,为番茄激活标签体系的建立奠定了基础。 相似文献
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Zeynab Shahabzadeh Bahram Heidari Reza Faramarzi Hafez 《Journal of Crop Science and Biotechnology》2013,16(4):263-268
An important feature of A. rhizogenes-induced hairy roots is their unique ability for investigation of gene function and production of secondary metabolites such as diosgenin in fenugreek. In order to evaluate the transformation frequency and the efficiency of transgenic hairy root induction, leaf and stem explants from two fenugreek ecotypes, Karaj and Bushehr, were infected with three concentrations of OD600= 0.8, 1.2, and 1.6 of A. rhizogenes strain K599 harboring a GFP gene. Regardless of ecotype, the ability of stem explants for the induction of hairy roots (8.09) and the transformation frequency (81.3%) was higher compared with leaf explants with the values of 5.97 and 71.88%, respectively. The number of transgenic GFP-positive hairy roots ranged from 4.2 to 13.5 in the Karaj ecotype and 3.8 to 9.9 in Bushehr. The highest transgenic hairy root (8.76), the transformation frequency (79.76%), and the growth rate of transgenic roots (0.77 d?1) were obtained from infection with K599 at OD600= 1.2, while the lowest belonged to the bacterial concentration of OD600=1.6. Although the ecotype Bushehr had lower total roots (7.53) and transgenic hairy roots (6.08), it showed higher transformation frequency (79.56%) than Karaj (73.63%). Therefore, the results indicate the importance of genotype, type of explant and bacterial concentration in breeding for induction of transgenic hairy roots and consequently, production of secondary metabolites in fenugreek. 相似文献
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为研究影响刺五加毛状根产生的因素,以农杆菌R15834、R1601、C58C1为试验菌株,叶片、叶柄、幼茎为外植体,探讨发根农杆菌种类、菌液浓度、共培养时间和乙酰丁香酮(As)等因素对刺五加毛状根转化率的影响。结果表明菌株R15834以浓度OD600=0.4左右对刺五加毛状根的诱导能力较好;叶片诱导毛状根能力较好;共培养时间以4天左右为最佳;As浓度以400 μmol/L左右有利于促进刺五加毛状根的产生。试验对刺五加毛状根的诱导体系进行了比较系统的研究,为产业化生产毛状根工作提供参考。 相似文献
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Alex C. McCormac Huixia Wu Manzhu Bao Yibing Wang Ruiji Xu Malcolm C. Elliott Dong-Fang Chen 《Euphytica》1998,99(1):17-25
Transfer of T-DNA from Agrobacterium tumefaciens and A. rhizogenes to cells of wheat (Triticum aestivum L.) and barley (Hordeum vulgare L.) is demonstrated following the inoculation of immature embryos and immature embryo-derived callus. Agrobacterium T-DNA vectors containing the C1/Lc anthocyanin-biosynthesis regulatory genes, the gusA gene or a synthetic green fluorescent protein gene (sgfp-S65T) were constructed from original binary vectors. The visual T-DNA markers were used as cell-autonomous reporters of early Agrobacterium-mediated transformation events in the wheat and barley cells. This localization of the transformed cells revealed a non-random distribution throughout each embryo and callus piece. 相似文献
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农杆菌介导玉米遗传转化体系的研究 总被引：4，自引：1，他引：3
为了提高玉米自交系的遗传转化率,建立农杆菌介导玉米遗传转化体系。通过农杆菌菌株EHA105侵染玉米自交系7922的胚性愈伤组织,以β-葡萄糖苷酶基因(GUS)为报告基因研究几种因素对遗传转化体系的影响。结果表明：（1）当农杆菌浓度OD600=0.6时,GUS瞬时表达率最高为35.3%;（2）当侵染时间为15 min时,GUS瞬时表达率最高为37.3%;（3）当共培养时间为3天和恢复培养时间为4天时,GUS瞬时表达率最高为29.1%。因此选择农杆菌浓度OD600=0.6,侵染时间15 min,共培养3天和恢复培养4天,为最佳遗传转化条件。通过优化影响遗传转化体系的因素,初步建立了农杆菌介导的玉米遗传转化体系。 相似文献
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为建立农杆菌介导的紫花苜蓿高效遗传转化体系,以'中苜1号'和'保定苜蓿'为试验材料,选用离体叶片为外植体,采用农杆菌介导法将双元质粒载体pCA-GR导入紫花苜蓿,研究了不同浓度的两种抑菌剂(羧苄青霉素和特美汀)、Ag+、激素(KT和NAA)组合以及基因型对紫花苜蓿转化频率的影响.结果表明:当选择培养基中无其它添加时,两... 相似文献