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我们经过四年的试验,建立了布氏杆菌基因检测技术。用细菌DNA(脱氧核糖核酸)分子热变性法和DNA浓相分子杂交法测定了布氏杆菌6个种18个生物型DNA分子基因,并测定了5株可疑布氏杆菌和与布氏杆菌有交叉抗原性的耶尔森氏菌(0:9)以及无交叉抗原性的大肠杆菌、绿脓杆菌,共29株菌。21株布氏杆菌的T_m值为76.9～77.9℃,G CMol％(鸟嘌呤 胞嘧啶克分子百分比)在56.1～58.6％,布氏菌DNA液相分子杂交率在82.7～104％。试验结果符合布氏杆菌文献值,测定了5株可疑菌,T_m值在76.9～77.8％、G CMol％为56.1～58.3％、液相分子杂交率81.8～98.4％,最后定为布氏杆菌。对照的大肠杆菌、绿脓杆菌、耶尔森氏菌等T_m值分别是75℃、82.4℃、72.5℃,G CMol％分别是51.5％、69.5％、45.4％.均在各自的文献值内。它们分别与布氏杆菌DNA作液相分子杂交,匹配率是31.1％、28.6％、21.4％,均小于75％,说明3株对照菌与布氏杆菌没有同源性。应用细菌DNA基因测定技术是区别布氏杆菌与非布氏杆菌最可靠的方法。 相似文献
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本研究旨在比较5种DNA提取方法对绵羊血液中布氏杆菌DNA的提取效果及对PCR检测的影响。将不同浓度的疫苗株布氏杆菌加入绵羊全血中,采用3种DNA提取试剂盒和酚/氯仿法以及碘化钠法等5种方法提取模拟的绵羊血液样品中的DNA,评价所获得DNA的浓度、纯度和完整性,并采用布氏杆菌特异性PCR进行检测。同时,对各提取方法所需时间及经济成本进行了比较。结果表明,各方法均能提取获得绵羊全血中布氏杆菌DNA,3种试剂盒和碘化钠法获取布氏杆菌DNA的效果相同,而酚/氯仿法获取布氏杆菌DNA的效率最低或存在PCR抑制剂而不适合用于绵羊血液中布氏杆菌的PCR检测。碘化钠法具有耗时较短、成本低、方便的优点,是从绵羊血液中提取布氏杆菌DNA的良好方法。本研究结果为临床绵羊血液中布氏杆菌DNA提取方法的选择提供了参考。 相似文献
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为了研究呼和浩特地区布氏杆菌的分子生物学特点,试验采用分子生物学手段,根据Gen-Bank已发表的布氏杆菌bp26基因序列设计1对引物,提取布氏杆菌分离株的DNA进行PCR扩增并测序,再与参考菌株的bp26基因序列进行同源性比较、分析。结果表明:成功扩增了布氏杆菌呼和浩特分离株bp26基因,包含1个完整的开放性阅读框753 bp,与羊种(马耳他)布氏杆菌16M、C68株的同源性为100%;与猪种1330株、牛种290株、S19的同源性分别为99.9%、99.9%、98.5%。 相似文献
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刘兴汉 《中国预防兽医学报》1991,(1)
分别以PBR328和λgt11为载体建立了布氏杆菌强毒M28株染色体基因库。用超声波切割染色体 DNA,EcoRV酶切 PBR328,经平端连接重组、转化 RRI,转化率为2.5×10~1/ml,重组率为30%,得重组子1500余个.用 EccRI 人工接头将超声波切割的染色体 DNA 片段与λgt11连接重组,转染 y1090,转染率为2×10~5PEU/ml,重组率为15.9%,得重组噬菌体16000余个。布氏杆菌染色体基因库需要重组克隆为1470～2950个. 相似文献
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《畜牧兽医学报》2016,(12)
对北京关忠动物医院送检的2例疑似感染布氏杆菌宠物犬的7份分泌物进行了布氏杆菌普通PCR、快速实时荧光PCR检测和Multi-PCR鉴定,并对部分基因序列测序分析,旨在对宠物犬感染犬布氏杆菌作出确诊,为宠物犬感染布氏杆菌诊断与防控提供资料。结果显示,布氏杆菌快速实时荧光检测试剂盒对两例犬的7份分泌物检测结果均为布氏杆菌阳性;Multi-PCR检测结果显示,感染犬布氏杆菌属于犬种布氏杆菌,且为非典型犬布氏杆菌;序列分析进一步验证了患犬感染样品扩增的序列均为布氏杆菌序列:BSCP31表面蛋白序列与已经发布的序列相比相似性在99%~100%;OMP25序列与中国内蒙古分离的犬布氏杆菌xue1分离株和韩国Brucella canis HSK A52141分离株亲缘关系最为亲近,核苷酸相似性均为99.9%;16SrRNA序列显示,进口斗牛犬和泰迪犬感染菌株均属于布氏杆菌序列。以上试验结果表明两例宠物犬均为犬布氏杆菌感染,这些数据将为布氏杆菌病的筛查和防控提供一定的基础。 相似文献
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内蒙古自1952～1986年从猪胎盘和病人血液中分离出6株猪布氏杆菌1型。国外曾从牛淋巴结中分离到猪布氏杆菌。1987年我们从羊和牛体分离到3株菌,鉴定为猪布氏杆菌第1生物型,这在内蒙古是首次。 相似文献
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应用实验室病原分离、血清学检测技术对西昌市某规模化奶牛场流产牛进行衣原体、布氏杆菌病原分离及血清学检查。结果表明,西昌市奶牛场以孕牛流产、早产、死产、干尸化胎、胎衣不下等症状的繁殖障碍性疾病与衣原体和布氏杆菌混合感染有关。采集病料分离出3株衣原体,5株布氏杆菌;从7个牛群集血清97份血清,阳性率为：衣原体病22.68%,布病47.43%,两病均阳性者13.40%。 相似文献
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犬种布氏菌地方株的DNA中G Cmol%测定 总被引：1，自引：0，他引：1
首次利用热变性法对9株地方犬种布氏菌DNA的G C含量进行了测定,同时以2株国际标准株为对照。G C mol％值在56.6～58.4范围内,与文献报道的犬种布氏菌和我们所用的2株标准株所得的G C mol％值是一致的。各株菌经常规检定、噬菌体裂解试验、血清学检查所得的结果均符合于犬种布氏菌的特性。说明本试验测定的G C mol％值代表了犬种布氏菌的DNA分子结构比值。为我国地方菌种、特别是粗糙型布氏菌的检定提供了一个新的方法。此外,对传统的DNA提取法进行了改进,使之更便于本试验的要求。 相似文献
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《畜牧兽医科技信息》2001,3(2):61
西伯利亚兽医学院和远东兽医学院免疫实验室的专家研究出一种快速诊断布氏杆菌免疫羊的新方法.该法是应用O-多糖抗原的免疫扩散试验,免疫羊,用流产布氏杆菌82株制成的弱毒疫苗免疫.目前这一方法已被公认. 相似文献
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8株布氏杆菌BCSP31基因的序列分析 总被引：4，自引：0，他引：4
参照GenBank中布氏杆菌的全基因组序列，设计一对特异性引物，通过PCR方法，扩增了8株来自3个布氏杆菌种的布氏杆菌表面蛋白31（BCSP31）全基因。PCR产物经克隆和序列分析后发现，该基因非常保守，8株不同菌株间的同源性高于99．3％；进化关系分析显示，5株中国来源的菌株（S2，M5，M111，M28，A387）显示了最近的同源关系，其中2个弱毒菌株S2和M5的BCSP31基因序列100％同源。3株外国来源的菌株（S19，2308，Rev．1）中，S19和2308同源性为100％。Rev．1与其他7株布氏杆菌BCSP31基因均有较大的差异。序列分析结果表明，BCSP31基因序列差异与布氏杆菌的种属和毒力无相关性。 相似文献
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《中国畜牧兽医文摘》2012,(9)
<正>布氏杆菌病是由布氏杆菌引起的一种人畜共患传染病。该病对人、动物危害极大,它的特点是临床发病率高,死亡率低,我国将其列为二类动物疫病。布氏杆菌病有6个种,即马耳他布氏杆菌(Brucella melitensis)、流产布氏杆菌(Br.abortus)、猪布氏杆菌(Br.suis)、林鼠布氏杆菌(Br.neotomae)、绵羊布氏杆菌(Br.ovis)和犬布氏杆菌(Br.canis)。习惯上,马耳他布氏杆菌为羊布氏杆菌,流产布氏杆菌为牛布氏杆菌。 相似文献
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布氏杆菌和结核杆菌二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用 总被引：4，自引：1，他引：3
本试验旨在利用二重实时荧光定量PCR技术建立鉴别诊断布氏杆菌和结核杆菌的方法。通过筛选布氏杆菌omp10、omp19、omp17、omp25、omp31和结核杆菌cfp10基因的最佳引物组合,建立二重实时定量PCR鉴别诊断方法,对该方法进行稳定性、特异性和敏感性试验,并对临床样品及模拟样品进行检测。经筛选布氏杆菌的omp25基因与结核杆菌cfp10基因引物组合最佳,该二重实时荧光定量PCR方法中布氏杆菌Tm值为88～89℃,结核杆菌Tm值为90～91℃,对其他供试的菌株则为阴性;该方法对布氏杆菌的DNA最低检出量为20拷贝.μL-1,结核杆菌为50拷贝.μL-1,两病原都存在时为100拷贝.μL-1,比常规PCR高100倍。利用所建立的二重荧光定量PCR方法及常规PCR,对24份结核痰样、11份布氏杆菌基因粗提物及30份模拟奶样进行检测,符合率为100%。本试验建立的方法可用于同时检测布氏杆菌和结核杆菌,并且具有良好的特异性、敏感性和稳定性。 相似文献
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本试验以禾本科牧草为研究对象,从人工种植的无芒雀麦(Bromus inermis)、披碱草(Elymus dahuri-cus)和野生牧草老芒麦(E.sibiricus)、野生冰草(Agropyroncristatum)、羊草(Leymus chinensis)上共分离得到8株异型发酵乳酸菌(Lactobacillus),依据生理生化试验方法,将8株异型发酵乳酸菌鉴定到种的水平,其中布氏乳杆菌(L.buchneri)4株、短乳杆菌(L.brevis)2株、果糖乳杆菌(L.fructivorans)2株。通过测定8株异型发酵乳酸菌的生长曲线和产酸速率,研究这8株异型发酵乳酸菌的生长特性,最终筛选出生长速度快、产酸性能好、适宜用作青贮饲料添加剂的2株布氏乳杆菌。 相似文献
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制品生产用及地方疑难布氏菌DNA基因同源性的研究 总被引：3，自引：1，他引：2
本文以布氏菌19株国际标准菌种为对照,对国内外实验室参考菌种14株及地方疑难菌种11株结合常规方法进行了DNA G+Cmol％测定,同时以羊种菌M16 DNA为标准,与布氏菌所有种和型的24个代表株及8株地方疑难菌种进行了DNA-DNA杂交测定,布氏菌及地方疑难菌种的G+Cmol％值范围为54.1～59.3,M16株与布氏菌参考菌种的杂交率81.7～109％,与地方疑难菌种的杂交率除一株为72.1外,其余为84.2～109％,属高度同源,鉴定为布氏菌。本试验首次使用进口新仪器“PEKIN LAMBDA 17UV/Vis SPECTROPHOTOMETER”采用热变性法测DNA G+Cmol％,复性速率法进行DNA-DNA杂交,使杂交的DNA样品变性和复性在同一比色杯中进行,省去半导体点温计操作带来的麻烦,减小了实验误差,缩短测时,结果精确、操作简便、重复性好。 相似文献
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《畜牧与兽医》2017,(8):62-67
为了鉴别羊种布氏杆菌自然感染和S2疫苗(猪种)免疫羊,选用布氏杆菌S2疫苗株进行了全基因组测序,预测出的编码基因与已公布的布氏杆菌基因组数据库比对分析,找出S2特有基因GL_0002181,对GL_0002181基因进行原核表达及免疫原性验证,同时用BP26蛋白作为对照组。Western blot结果显示:以S2疫苗免疫绵羊血清作为检测抗体,重组菌BL21(pETGL_0002181)、BL21(pETBP26)与BL21(DE3)空菌比较,分别在31 ku、32 ku处出现了特异性条带,说明重组蛋白能够与S2免疫血清中的抗体发生特异性反应,具有较好的免疫原性;而重组表达菌BL21(pETGL_0002181)菌体蛋白与自然感染血清不反应,重组蛋白BP26与自然感染血清反应,说明GL_0002181基因在S2疫苗株中存在,在羊种自然流行株中不存在。结果表明:GL_0002181抗原可用于布氏杆菌S2疫苗免疫与羊种布氏杆菌自然感染鉴别诊断,为布氏杆菌病有效诊断提供理论依据。 相似文献