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运用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白(CPEP)基因,克隆至pMD-19T载体。经鉴定测序验证后,将获得的CPEP基因克隆至pET-32a(+)原核表达载体,构建原核表达质粒pET-32a-CPEP,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE以及Western blot分析免疫原性,纯化CPEP,并用纯化的蛋白免疫小鼠,检测其特异性血清IgG抗体水平及攻毒保护率。结果显示,成功构建原核表达质粒pET-32aCPEP;SDS-PAGE分析结果显示,得到约35ku的蛋白;Western blot分析显示,CPEP能与Hps SC-1阳性血清发生抗原抗体的特异性反应,证实该重组CPEP蛋白具有反应原性。以致死剂量的强毒株SC-1攻毒CPEP免疫小鼠,重组蛋白的免疫能够减缓发病,并表现出40%的保护率。重组蛋白CPEP的部分保护作用表明其可以作为免疫候选因子,为未来副猪嗜血杆菌标准化疫苗的研制奠定基础。 相似文献
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为研究猪链球菌2型(ss2)截短表达枯草杆菌素样蛋白酶(C5a-1)的免疫保护特性,本研究选择其B细胞线性表位优势区(aa 91～aa 323)进行PCR扩增,克隆至pET32a载体中进行原核表达,并接种小鼠鉴定其免疫保护性.Westemblot鉴定结果显示,截短表达的sspA重组蛋白分子量约45.6 ku,能够与SS2阳性血清反应,具有良好的反应原性.将纯化的重组蛋白经3次免疫CD-1小鼠,攻毒试验结果表明重组蛋白对小鼠的免疫保护率仅为菌体免疫所提供保护率的15％.本研究为利用该蛋白作为动物免疫制剂提供了实验数据. 相似文献
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研究猪肺炎支原体168(Mycoplasma hyopneumoniae 168,Mhp168)弱毒株重组蛋白p65的免疫原性。根据GenBank中Mhp168弱毒株P65基因的开放阅读框设计特异性引物,进行PCR扩增,构建原核表达载体pET-28a-P65,经原核表达并纯化获得的重组蛋白与佐剂以体积比1∶1乳化后免疫注射小鼠,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定小鼠血清的抗体效价;选取抗体效价较高的小鼠进行攻毒试验。经间接ELISA证明,重组蛋白p65具有良好的免疫原性,血清效价为1∶12 800。攻毒试验证明,p65重组蛋白疫苗的保护率可达80%,证明重组蛋白p65具有良好的免疫原性。 相似文献
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鞭毛蛋白FliC与外膜蛋白TolC均具有免疫保护效果,其中FliC蛋白具有疫苗佐剂的特性,但目前尚未有关迟缓爱德华菌(E.tarda)FliC-TolC融合产物免疫动物的免疫效果的相关报道。为研究E.tarda FliC-TolC融合蛋白的免疫特性,本研究利用融合PCR方法扩增获得fliC-tolC片段,构建重组载体pET-28a-fliC-tolC,并利用E.coli BL21表达系统表达了融合蛋白FliC-TolC。将纯化的FliC-TolC、TolC、FliC蛋白免疫小鼠后,以E.tarda强毒株攻毒评估免疫效果;并利用斑马鱼模型进行了平行试验。结果显示,本研究克隆了E.tarda fliC-tolC基因并表达和纯化了相应重组蛋白FliC-TolC;FliC-TolC蛋白激发小鼠产生的抗体水平优于FliC、TolC蛋白单独免疫组,表明FliC-TolC蛋白具有优良的免疫原性。攻毒试验表明FliC-TolC蛋白组小鼠对强毒株可产生较好的抵抗力,相对保护率为95%;斑马鱼攻毒试验相对保护率为60%。本研究证实了E.tarda重组蛋白FliC-TolC的免疫效力,为进一步研制E.tarda亚单位疫苗提供了参考和借鉴。 相似文献
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为研究简单异尖线虫肌钙蛋白类过敏原的免疫特性,本研究提取了线虫总RNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增肌钙蛋白类过敏原(Anis1)基因,克隆入pMD18-T载体,测序正确后将anis1基因亚克隆入带有组氨酸标签的表达载体pET-30a,转入大肠杆菌BL21中,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导,表达目的蛋白。通过Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,融合蛋白采用Western blotting分析。将纯化的Anis1重组蛋白免疫小鼠,分离血清,ELISA检测不同时期血清抗体效价。酶切和DNA测序结果显示重组质粒构建成功,并诱导出重组Anis1蛋白,重组蛋白经Western blotting分析证实为目的蛋白,纯化蛋白Anis1免疫小鼠后,与对照组相比,能产生较高的抗体水平。Western blotting分析显示,重组蛋白Anis1能被免疫血清识别,说明简单异尖线虫重组蛋白Anis1具有较好的免疫原性和免疫反应性。 相似文献
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《畜牧兽医学报》2017,(3)
旨在克隆表达猪丹毒丝菌SpaA蛋白,分析其免疫原性,为猪丹毒新型疫苗的研发奠定基础。运用PCR扩增SpaA基因,连接至pGEX-6P-1载体,将阳性重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,SDSPAGE分析表达产物,GST亲和层析纯化融合蛋白质,Western blot鉴定;纯化SpaA蛋白免疫小鼠,间接ELISA检测血清中IgG和Th1、Th2相关细胞因子;不同致病力猪丹毒丝菌攻击免疫小鼠,观察病理组织变化及其免疫保护率。结果显示,猪丹毒丝菌SpaA基因在大肠杆菌中实现表达,获得大小为75ku的纯化目的蛋白质。该蛋白质能特异性识别猪丹毒丝菌抗血清,可诱导小鼠产生较高水平的特异性抗体IgG,并使TNF-β、IFN-γ、IL-5、IL-10含量显著升高,对攻毒菌的免疫保护率均为100%,病理组织变化与攻毒对照组之间差异明显。可见成功获得的重组SpaA蛋白具有良好的免疫原性,能激发机体的体液免疫和细胞免疫,产生较强的免疫保护力,可以作为研发猪丹毒亚单位疫苗的候选抗原。 相似文献
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猪链球菌2型人源株MRP的表达及其单克隆抗体的制备与应用 总被引：1，自引：0，他引：1
将猪链球菌2型(SS2)人源株Habb mrp基因进行截短修饰后,克隆于pGEX4T-2载体中,转化大肠杆菌诱导表达约61 000的融合蛋白MRP-GST,该蛋白经凝血酶作用去除重组蛋白中的GST标签,得到约35 000纯化的MRP.Western blotting证实MRP可被SS2阳性血清特异性识别.以纯化的MRP抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,间接ELISA进行筛选获得了6株能稳定分泌抗MRP特异性单抗的细胞株.特异性试验表明该6株单抗与SS2的另外2种蛋白、大肠杆菌均不发生交叉反应.以2138单抗腹水和SS2多克隆抗血清建立夹心ELISA对71株标准菌株和122株猪链球菌野毒株进行MRP的表征鉴定,标准株检测结果与背景符合率为为97.2%(69/71),其中34株标准血清型菌株检测的符合率为100%.表明该方法可用于猪链球菌的快速诊断和流行病学调查. 相似文献
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将150只BALB/c小鼠随机分成5组。用猪链球菌2型pET32a-Sly、pET32a-38ku和pET32a-Sly-38ku表达的重组蛋白制备的疫苗,以及猪链球菌2型全菌灭活疫苗分别免疫A、B、C、D组小鼠,E组为生理盐水对照。首免后第2周加强免疫1次,二免后第2周,用致死量强毒猪链球菌2型四川分离株和江苏分离株以及马链球菌兽疫亚种安徽分离株攻毒,观察攻毒后对小鼠的免疫保护率。结果,A组与C、D组对猪链球菌2型感染的保护率差异显著（P〈0.05）,而C组与D组之间保护率无显著差异;A、B、C、D组之间对马链球菌兽疫亚种安徽分离株感染的保护率差异不显著;各免疫组的保护率极显著高于对照组。结果表明,3种重组疫苗具有良好的免疫原性,能对强毒株猪链球菌2型的攻击感染起到保护作用。 相似文献
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ObjectiveTo compare the accuracy of transcutaneous (tc) to arterial partial pressure of carbon dioxide (PaCO2) and partial pressure of oxygen (PaO2) in anesthetized rabbits.Study designProspective, randomized, experimental study.AnimalsEight healthy adult female New Zealand white rabbits weighing 4.05 ± 0.30 kg.MethodsIsoflurane anesthetized rabbits received six treatments in random order; PaCO2 < 35, 35-45, and >45 mmHg and PaO2 < 80, 100-200, >200 mmHg. Arterial and transcutaneous measurements were taken after 15 minutes of stabilization at each condition. Linear regression, correlation and Bland-Altman analysis were performed to compare PtcCO2 to PaCO2 and PtcO2 to PaO2.ResultsOver a range of measured PaCO2 values from 21 to 67 mmHg (n = 24) mean bias for PtcCO2 was -1 mmHg and the 95% limits of agreement were -7 to 5 mmHg. The correlation between PtcCO2 and PaCO2 was strong with R2 value of 0.9454. Over the entire range of measured PaO2 values (46-508 mmHg) mean bias for PtcO2 was -61 mmHg and the 95% limits of agreement were -226 to 104 mmHg. Correlation was poor with R2 = 0.5969. Comparing PtcO2 to PaO2 over a narrower range [PaO2 < 150 mmHg (n = 13)] improved the correlation, with an R2 value of 0.8518, mean bias of -7 mmHg and 95% limits of agreement from -33 to 19 mmHg.Conclusions and clinical relevanceIn healthy anesthetized rabbits, PtcCO2 closely approximated PaCO2. In contrast PtcO2 underestimated PaO2, particularly at high values. The PtcCO2 sensor may be a useful noninvasive way to assess adequacy of ventilation in anesthetized rabbits. 相似文献
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3因情施诈,实施多厂名多品牌战略孙子兵法里有一要点是“因情施诈”。饲料行业初期的只换品牌不换质量的作法最大的缺点就是难以“诈”过关,经不住细究。“诈”的结果就是要让我“误人”,让对方的判断“误于人”。这就需要适当的策略。饲料企业要想搞多品牌复式开发市场,得来一 相似文献
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The time periods and the behavioural pattern of mink euthanized with carbon dioxide (CO2), 100% and 70%, carbon monoxide (CO), 4%, and nitrogen (N2), 100%, are described. The time between the placement of the animal in a glass box and the first symptoms of incoordination (phase I), the period of loss of consciousness (phase II), and, finally, the coma phase until cessation of respiration (phase III) using three groups each of 10 pastel male mink each were recorded. Phase I times ranged from 14 s for CO2, 31 s for N2, and 49 s for CO. In phase II, the difference was even more pronounced, being 5 s for CO2, 15 s for CO, and 45 s for N2. In phase III, the time was 58 s for N2, 134 s and 151 s for CO2 and CO respectively. Hence, the critical period from the time when the animals were placed in the glass box till unconsciousness occurred (phase I and II) was 19 s for CO2, 64 s for CO, and 76 s for N2. The total course of euthanasia was 153 s for CO2, 215 s for CO, and 134 s for N2. The following minimum times will be required before it can be judged to be safe to remove the animals: CO2 and N2: 5 min, and for CO: 6.5 min. In a supplementary experiment, involving a mixture of 70% CO2 and 30% atmospheric air, it was not possible within the allotted time to kill adult male mink.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS) 相似文献
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质量控制和原料 宠物食品含有50种以上养分和非营养性添加物,通过细心配制,使各种养分之间和养分与能量之间保持适当的比率。对宠物食品营养全面性的控制,要比对人类食物营养的控制远为严格得多。有些宠物食品可供人类食用(尽管不建议这样做),因为除了人类所需的VC之外,它所提 相似文献
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在上一篇文章《(Feed Tech》Vol.11,№5:30-31,译文见本刊总第28卷(2008)第1期第60-61页)中,我们主要介绍了预混料添加剂的活性组分和载体材料的要求,本文将详细介绍预混料加工厂生产过程中的要求。 相似文献