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在组织培养和细胞杂交工作中,培养细胞的保种十分重要。目前保存细胞的唯一途径是液氮冻存。我们试用简易冷冻技术和不同的冻存液,对数种细胞株/系进行了冻存、复苏试验,现报告如下。 相似文献
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分泌抗肝片吸虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 总被引：3，自引：0，他引：3
用纯化的肝片吸虫可溶抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与骨髓细胞融合，经ＥＬＩＳＡ筛选和３次克隆化培养后获得３株分泌抗肝片吸虫单克隆抗体的杂交瘤细胞。３株杂交瘤细胞分泌的特异性单克隆抗体经ＥＬＩＳＡ检测均属ＩｇＧ１亚类，上述杂交瘤细胞经反复冻存、复苏和连续传代培养，证实其分泌抗体的性质稳定。 相似文献
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试验研究了北方地区黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。采用内蒙古地区健康黑白花奶牛的新鲜乳腺组织,将组织进行Ⅱ型胶原酶消化后原代培养,培养的细胞经5代纯化后将密度调整为1×106个/mL。采用6种处理方法进行冻存,各设3个重复。液氮冻存1个月后,分别将6种不同方法冻存的细胞复苏后测定细胞活性,包括冻存死亡率、贴壁细胞占活细胞的比率、凋亡率等,同时进行形态学观察。结果显示,处理1组与2、3、5组间冻存死亡率存在极显著差异（P〈0.01）,处理1、4、6组间冻存死亡率无显著差异（P〉0.05）,处理2、6组间冻存死亡率存在极显著差异（P〈0.01）;处理4组的贴壁率高于处理2、5、6组,存在极显著差异（P〈0.01）。形态学观察结果发现,处理1、4组细胞较其他组生长状态良好。因此,处理4可作为黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。 相似文献
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试验研究了北方地区黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。采用内蒙古地区健康黑白花奶牛的新鲜乳腺组织,将组织进行Ⅱ型胶原酶消化后原代培养,培养的细胞经5代纯化后将密度调整为1×106个/mL。采用6种处理方法进行冻存,各设3个重复。液氮冻存1个月后,分别将6种不同方法冻存的细胞复苏后测定细胞活性,包括冻存死亡率、贴壁细胞占活细胞的比率、凋亡率等,同时进行形态学观察。结果显示,处理1组与2、3、5组间冻存死亡率存在极显著差异(P<0.01),处理1、4、6组间冻存死亡率无显著差异(P>0.05),处理2、6组间冻存死亡率存在极显著差异(P<0.01);处理4组的贴壁率高于处理2、5、6组,存在极显著差异(P<0.01)。形态学观察结果发现,处理1、4组细胞较其他组生长状态良好。因此,处理4可作为黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。 相似文献
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本试验研究了北方地区黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。采用内蒙古地区健康黑白花奶牛的新鲜乳腺组织,将组织进行Ⅱ型胶原酶消化后原代培养,培养的细胞经5代纯化后将密度调整为1×106个/mL。采用6种处理方法进行冻存,各设3个重复。液氮冻存1个月后,分别将6种不同方法冻存的细胞复苏后测定细胞活性,包括冻存死亡率、贴壁细胞占活细胞的比率、凋亡率等,同时进行形态学观察。结果显示,处理1组与2、3、5组间冻存死亡率存在极显著差异(P0.01),处理1、4、6组间冻存死亡率无显著差异(P0.05),处理2、6组间冻存死亡率存在极显著差异(P0.01);处理4组的贴比率高于处理2、5、6组,存在极显著差异(P0.01)。形态学观察结果发现,处理1、4组细胞较其它组生长状态良好。因此,处理4可作为黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。 相似文献
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《中国畜牧兽医文摘》2012,(8)
<正>【目的】探讨绵羊前体脂肪细胞冷冻保存的最佳冻存保护剂种类和浓度。【方法】在含20%胎牛血清的DMEM/F12培养液中分别添加不同浓度的DMSO、EG、PG、G和PVP作为冻存液,对原代培养的绵羊前体脂肪细胞进行冷冻保存后,检测复苏细胞存活率、细胞增殖能力、细胞中脂肪沉积量,测量GPDH活性,并用实时荧光定量PCR检测PPARγ和LPL mRNA的表达水平,最后对复苏细胞进行染色体核型分析。【结果】各种冻存保护液中,10%DMSO和5%DMSO+5%PVP 相似文献
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试验研究了北方地区黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法.采用内蒙古地区健康黑白花奶牛的新鲜乳腺组织,将组织进行Ⅱ型胶原酶消化后原代培养,培养的细胞经5代纯化后将密度调整为l×106个/mL.采用6种处理方法进行冻存,各设3个重复.液氮冻存1个月后,分别将6种不同方法冻存的细胞复苏后测定细胞活性,包括冻存死亡率、贴壁细胞占活细胞的比率、凋亡率等,同时进行形态学观察.结果显示,处理1组与2、3、5组间冻存死亡率存在极显著差异(P＜0.01),处理1、4、6组间冻存死亡率无显著差异(P＞0.05),处理2、6组间冻存死亡率存在极显著差异(P＜0.01)；处理4组的贴壁率高于处理2、5、6组,存在极显著差异(P＜0.01).形态学观察结果发现,处理1、4组细胞较其他组生长状态良好.因此,处理4可作为黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法. 相似文献
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成年小鼠生精小管及睾丸的冷冻保存 总被引：1，自引：0，他引：1
采用含不同浓度抗冻剂二甲基亚砜(DMSO)、乙二醇(EG)、丙二醇(PG)及丙三醇(G)的DMEM培养基作为冻存液,对成年小鼠生精小管及完整睾丸进行慢速冷冻,液氮保存,37 ℃水浴复苏,并测定细胞复苏率。结果表明,成年小鼠生精小管在50 mL/L、100 mL/L 及150 mL/L DMSO冻存液中的细胞复苏率分别为92.6%、93.4%及69.4%,在50 mL/L、100 mL/L及150 mL/L PG 冻存液中的细胞复苏率分别为94.2%,93.3%及66. 9%,在50 mL/L、100 mL/L 及150mL/L EG 冻存液中的细胞复苏率分别为87.2%、91. 0%及62. 6%,在50 mL/L、100mL/L及150 mL/L G冻存液中的细胞复苏率分别为90.0%、90.5%及67.1%。各种抗冻剂的最高细胞复苏率之间差异不显著(P> 0. 05 )。成鼠完整睾丸在含100 mL/LDMSO、PG、EG或G的冻存液中的细胞复苏率分别为56.0%、50.0%、50.2%及50.2%。结果显示,DMSO、PG、EG 及G 均适宜用作成年小鼠生精小管的抗冻剂,最佳使用浓度均为50 mL/L~100 mL/L。完整睾丸冷冻后的细胞复苏率低于60%,仍需进一步研究。 相似文献
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《畜牧兽医学报》2016,(5)
为了改进奶牛乳腺上皮细胞原代培养技术和探究乳腺组织冻存方法,选用24月龄无泌乳史荷斯坦奶牛,采用组织块种植法,通过侧置和倒置两种方式,分别从新鲜和冻存(8个月)的乳腺组织中分离培养奶牛乳腺上皮细胞。结果表明,侧置处理能使乳腺细胞爬出时间缩短1~2d,并改善组织块贴壁速度和效果;回收于前次培养后的乳腺组织块再分离培养,贴壁第2天即有乳腺上皮细胞爬出;一步冷冻(-80℃)液氮保存较大奶牛乳腺组织块,冻存液A(FBS∶DMSO∶DMEM/F12=7∶2∶1)冻存的组织块存活率为50%,冻存液B(FBS∶DMEM/F12∶DMSO∶HEPES/丙酮酸钠贮存液=10∶7∶2∶1)冻存的组织块存活率为56%。可见,作者建立的侧置处理法和组织块回收法可以用于奶牛乳腺上皮细胞的分离培养,可以缩短组织块种植法实验周期,冻存液中加入缓冲液HEPES/丙酮酸钠后有利于组织块生物活性保持。 相似文献
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《中国兽医杂志》2016,(2)
本研究采用鸡胚繁殖NDV-XX08,差速离心法纯化NDV,用纯化的病毒免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与NSO细胞进行融合,用间接ELISA和血凝抑制试验(HJ)进行筛选,挑选效价高的杂交瘤细胞进行克隆和亚克隆,建立阳性杂交瘤细胞株,最终得到一株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞,命名为4F12。采用体外细胞培养和体内诱生腹水的方法制备了其McAb。对获得的单克隆抗体采用ELISA,HI,Western-Blotting方法进行鉴定。杂交瘤细胞培养上清和腹水的ELISA效价分别为1:160和1:3.2×10~4。获得的单克隆抗体与NDV具有良好的特异性反应,与鸡胚阴性尿囊液、鸡正常组织、鸡[gG、鸡传染性囊病病毒、鸡传染性支气管炎病毒、禽流感检测抗原均无交叉反应性。HI试验表明,制备的单抗没有血凝抑制活性。Western-Blotting证明获得的单抗与新城疫病毒蛋白有特异性反应。经连续传代20次,冻存、复苏3次,4F12杂交瘤细胞株仍能稳定分泌抗体。 相似文献
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对ST细胞不同的冻存密度与细胞复苏后活力的关系进行了分析。首先取处于对数生长期的细胞,以4种不同的密度进行冻存,冻存2周后,每种密度各复苏3支,测定其活力。分析密度与活力之间是否存在相关性。如此,平行做3次。结果发现,不同的细胞冻存密度与细胞复苏后的活力之间有相关性。 相似文献
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本文报道了用马鼻疽菌菌体抗原免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与NS—1骨髓瘤细胞在聚乙二醇(PEG)的作用下融合,接种于40孔微量培养板,用微量间接血凝和ELISA进行了测定。在应用鼻疽补体结合反应抗原进行间接血凝测定中,出现4个阳性孔,其中2B_1孔的血凝价为1:64。经扩大培养,细胞冻存,并利用有限稀释法经过2次克隆化。克隆化后的杂交瘤细胞接种BALB/C小鼠,腹水效价达1:4096,并对接种鼠诱发的病变进行了病理形态学及电子显微镜观察。用琼脂双扩散及免疫电泳发现杂交瘤分泌的单克隆抗体对兔抗鼠IgG 只出现一条沉淀线,进一步鉴定,证实属IgG_1亚类,染色体平均89条。经液氮冻存40余天,复苏后细胞活力为75％,细胞生长良好,仍有产生抗体的特性。 相似文献
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采用方瓶存放BHK21细胞悬液,在2℃～8℃冰箱存放不同时间后,按常规方法进行细胞复苏和传代。对比存放不同时间后细胞复苏时的驯化次数、细胞数量和细胞活力,寻求最佳存放时间和复苏代次以指导生产。同时将2℃～8℃冷藏保存方法与液氮冻存细胞方法在细胞复苏周期和达到所需扩繁细胞数方面进行比较。结果表明,方瓶冷藏保存BHK21细胞悬液最长可存放60d,经2—5代驯化后,细胞形态和活力恢复正常,细胞数量与收悬液前细胞数量无显著差异,并能稳定传20代以上。与液氮冻存细胞方法相比,该方法在快速恢复细胞产量时有较大优势,在生产周期紧张的情况下可作为辅助方法保障细胞传代的延续。 相似文献
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成年小鼠雄性生殖细胞的冷冻保存 总被引：1，自引：0，他引：1
在含10％小牛血清（NBS）的DMEM培养基中，分别各添加5％，10％，15％，20％和25％的二甲基亚砜（DMSO）,丙二醇（PG），乙二醇（EG）和甘油（G），对成年小鼠睾丸生殖细胞冷冻保存；复苏后台盼蓝染色测定细胞复苏率。结果显示，5％－25％DMSO冻存液组的细胞复苏率分别为88.5%,88.0%,65.6%及51.3%;5%-25%PG冻存液组的细胞复苏率分别为87.2%,86.4%,79.0%,73.4%及40.1%.;5%-25%EG冻存液组的细胞复苏率分别为6.6%,80.9%,60.8%,51.3%及30.0%;5%-25%G冻存液组的细胞复苏率分别为86．5％，86．3％，65．3％，36．0％及31．4％。其中各抗冻剂5％和10％组的细胞复苏率最高，与15％组相比均存在显著或极显著差异。4种抗冻剂的最高细胞复苏率之间无显著差异。DMSO，PG，EG和G分别冷冻保存成年小鼠睾丸生殖细胞对的最小损失率分别为4．8％，6．1％，6．7％，6．8％。结果表明，采用慢速冷冻时，DMSO，PG，EG及G均适宜用作成年小鼠睾丸生殖细胞的抗冷冻剂，最佳使用含量均为5％－10％。成年小鼠睾丸生殖细胞分别在含5％－10％的DMSO，PG，EG和G的DMEM（含10％NBS）冻存液中，2步慢速降温，液氮储存，37℃水浴复苏，是一种具有较高复苏率的冷冻保存方法。 相似文献