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抗逆生防木霉筛选及其相关因子诱导 总被引：1，自引：0，他引：1
对供试各木霉菌株经303、5、404、55、0℃保温24 h后,于28℃培养6~7 d,进行耐高温菌株筛选。结果表明,耐高温生防木霉菌株T-30经热激后可产生抗逆蛋白,且表达量较大。对高温抗逆蛋白进行DEAE-32及Sephadex G-100柱层析得到单一蛋白洗脱峰。SDS-PAGE电泳发现该抗逆蛋白含有2个亚基,分子量分别为30和42 kD。酶学检测发现,该高温抗逆蛋白有几丁质酶活力,其最适pH值为5.0,最适温度为50℃,Km值为0.91 mg/ml,对Na+有较强的耐受性。 相似文献
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稻瘟病菌一假定几丁质酶在毕赤酵母中的表达 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究从稻瘟病菌菌株Guy11中提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增到一假定几丁质酶基因MGG_08054.6的cDNA序列,将其亚克隆至带有His-tag标签的酵母表达载体pPIC3.5K中,构成重组质粒pPIC3.5K-ws,电击转化至毕赤酵母菌菌株GS115,通过MD-MM平板筛选及PCR验证获得重组酵母转化子GS115-PICH-ws;阳性转化子在甲醇诱导下,成功分泌出重组蛋白.SDS-PAGE分析表明,重组蛋白分子质量为48 ku,与其理论计算值基本相符;Ni-NTA法分离纯化后的重组蛋白经DNS法测定具有几丁质酶活性. 相似文献
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海洋产几丁质酶菌株的筛选及发酵条件优化 总被引：1，自引：0，他引：1
通过透明圈法初筛、DNS复筛,从大连近海海域的海泥中分离出一株高产几丁质酶的菌株,经初步鉴定为扩展短杆菌(Brevibacterium linens).采用不同碳源、氮源、温度、pH值等对培养条件进行了优化及正交试验.结果表明:该菌产酶最适条件是在28℃、pH7.0、蛋白胨1g/L、胶体几丁质10g/L、NaCl 20g/L条件下,几丁质酶活力可达0.508 U/mL,比优化前其产酶活力提高了9倍. 相似文献
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从海南热带海洋红树林土样中分离得到一株高产几丁质酶菌株HN12,经形态、生理生化和16S rDNA基因手段鉴定,其为一新种,命名为Chitiniphilus haikoumanggrovensis(GenBank No.HQ877498,type strain CGMCC No.5142)。单因素试验研究菌种酶学性质,结果显示:其最适酶反应温度为50℃,但在此温度下酶活力下降较快,综合酶的温度耐受性,酶促反应温度定为40℃;最适酶促反应pH值为7.0;在测试的9种金属离子中,未发现有金属离子能提高酶活力;酶解产物主要为几丁四糖;在优化后的酶解反应条件下测定酶活力达到2.1 U/mL。 相似文献
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大豆种子经甲壳低聚糖处理后发芽，其体内的几丁质酶活力比发芽前提高了46倍，比发芽的大豆提高了1．3倍。大豆种子经甲壳低聚糖处理后发芽的提取物作用于DD值为71．1％的壳聚糖15min，可使其乙酸盐溶液的VDP值达60％以上。初步纯化的大豆几丁质酶可降解壳聚糖释放还原糖且较适合降解DD值低的壳聚糖，其作用于DD值71．1％的壳聚糖37．5h可得到平均聚合度为4—5的水溶性甲壳低聚糖，得率为40％左右。 相似文献
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使用RT-PCR方法,从高毒力金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae HN1中,克隆得到一个全长为1275bp的几丁质酶基因,经Blast分析此基因序列与M．anisopliae E6的chil基因（AF02749）同源率为96％。将此基因克隆到pGEX-6p-1载体上,使之与载体上一个约26kD大小的谷胱甘肽S-转移酶（GST）相连,构建pGEX-chi融合表达载体,转化到大肠杆菌（Escherichia coli）BL21中,经SDS-PAGE结果分析显示：表达出的融合蛋白大小为68kD,此目的蛋白占表达总量的64．5％。经破碎处理后可检测到几丁质酶活性。 相似文献
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大豆种子经甲壳低聚糖处理后发芽，其体内的几丁质酶活力比发芽前提高了46倍，比发芽的大豆提高了1．3倍。大豆种子经甲壳低聚糖处理后发芽的提取物作用于DD值为71．1％的壳聚糖15min，可使其乙酸盐溶液的VDP值达60％以上。初步纯化的大豆几丁质酶可降解壳聚糖释放还原糖且较适合降解DD值低的壳聚糖，其作用于DD值71．1％的壳聚糖37．5h可得到平均聚合度为4—5的水溶性甲壳低聚糖，得率为40％左右。 相似文献
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油菜几丁质酶的纯化及其在抗菌核病中的作用 总被引：6，自引：0，他引：6
油菜叶片经油菜菌核病菌 （ Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ ） 或水溶性壳聚糖处理后, 几丁质酶活性明显提高, 分别在处理后 １ ｄ 和 ２ ｄ 达活性高峰, 比对照分别高５ 倍和２ 倍左右。被激发提高的几丁质酶表现为内切酶活性, 细胞间的几丁质酶比活力显著高于细胞内的酶比活力。菌核病菌侵染后的油菜叶片提取液经６０％ 饱和度的硫酸铵沉淀,再通过再生几丁质柱亲和层析得到了纯化的几丁质酶, 经 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 显示单一的谱带, 其相对分子质量为 ３２ ０００。纯化的油菜叶片几丁质酶能降解油菜菌核病菌菌丝细胞壁, 在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上可抑制菌丝生长。 相似文献
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[目的]从紫花芸豆中分离纯化胰蛋白酶抑制剂。[方法]以紫花芸豆为材料,采用脱脂、酸抽提、热变性、硫酸铵分级沉淀及离子交换层析和凝胶过滤层析等方法,分离纯化胰蛋白酶抑制剂。[结果]胰蛋白酶抑制剂经PAGE和IEF电泳显示单一条带。凝胶过滤法测定其表观分子量约为59kD。SDS电泳结果显示它有3个亚基,分子量分别为34、16、15kD。等电聚焦法测定其等电点为5．25。动力学的方法检测PVTT与胰蛋白酶发生不可逆抑制作用。[结论]离子交换层析和凝胶过滤层析法能快速地分离纯化紫花芸豆中的胰蛋白酶抑制剂。 相似文献
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为弄清少孢节丛孢菌几丁质酶的生物学功能,对少孢节丛孢菌XJ-A1几丁质酶AO-483基因进行克隆及分子特征分析,并在大肠埃希菌中进行诱导表达;采用DNS还原糖法检测经镍柱纯化的重组几丁质酶活性,将其作用于秀丽隐杆线虫幼虫,分析其生物活性。结果显示,AO-483基因编码309个氨基酸,与少孢节丛孢菌标准株(ATCC 24927)的几丁质酶AO-483基因序列的同源性为96.88%,氨基酸序列同源性为97.73%;AO-483含有1个Glyco-hydro-18结构域,位于20~297位氨基酸,属于糖苷水解酶18家族,还含有特征序列GMLGG和LDGLDLDVE;三级结构为典型的三磷酸异构酶桶形结构。SDS-PAGE分析结果表明,重组蛋白AO-483分子质量约为52 ku,与预测大小一致;Western blot分析证实,该重组蛋白能与小鼠抗少孢节丛孢菌多克隆血清抗体发生特异性反应。经DNS还原糖法检测,该重组几丁质酶活性为223.31 U·mL-1;重组几丁质酶对秀丽隐杆线虫Ⅰ期和Ⅳ期幼虫有较强的降解活性。 相似文献
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马盛群 《金陵科技学院学报》2003,19(4):44-46
采用先“盐析”后“亲和吸附”的方法分离虾几丁质酶,纯化倍数为15.3倍,比活率73.3ImU·mg-1,产品得率50.6％;亲和分离胶为商品化的脱乙酰几丁质经再生后制备而成。方法简单易行适于放大生产。 相似文献
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[目的]探讨犬血清IgG的纯化方法。[方法]采用硫酸铵盐析法结合SephadexG-200凝胶柱层析提取纯化犬血清IgG,利用SDS-PAGE电泳和免疫印迹法鉴定所得产品的纯度和免疫活性。[结果]获得的纯化犬血清IgG的SDS-PAGE图谱中存在2条蛋白条带,表明获得了高纯度的犬血清IgG;重链分子量为58kD,轻链分子量为27kD,IgG分子量为170kD。特异性检测发现犬血清IgG重链和轻链都能与鼠抗犬血清IgG抗体结合,表明纯化犬血清IgG具有免疫原性和反应原性。[结论]硫酸铵盐析法结合SephadexG-200凝胶柱层析可获得纯度高、活性好的纯化犬血清IgG,为犬血清IgG相关的免疫学试验提供了高质量的免疫材料。 相似文献
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为了探索维氏气单胞菌B565低酶活几丁质酶ChiC的性质及突破其低酶活的应用瓶颈,构建了重组ChiC毕赤酵母工程菌GS115/PIC9\|ChiC,进行甲醇诱导表达纯化,研究其基本酶学性质。结果表明,ChiC在毕赤酵母中分泌表达,甲醇诱导48 h后,达到摇瓶水平最大表达量232.6 mg/L。ChiC最适反应pH为8.0,温度为40℃。最适反应条件时比活力为7.6 U/mg。ChiC具有较宽的pH及温度适应性,在pH 3.0~10.0,40℃或者0~40℃,pH 7.0, 均可以保持80%以上最适酶活力。同时几丁质结合蛋白CBP21于大肠杆菌中实现胞内可溶表达,其表现出对虾壳几丁质和胶体几丁质的具有不同的结合能力。但CBP21促进ChiC降解胶体几丁质的能力(提高约9倍)明显高于其促进ChiC降解虾壳几丁质的能力(提高约2倍)。上述结果为该几丁质酶基因的深入研究奠定了理论基础,为突破该低酶活几丁质酶的应用瓶颈提供了一种可能的解决方案。 相似文献