共查询到20条相似文献，搜索用时 171 毫秒
1.
分泌抗犬细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 总被引：1，自引：1，他引：0
将用犬细小病毒(CPV)免疫的BALB/C小鼠脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,用血凝抑制试验(HI)筛选,以有限稀释法克隆3次,得到6株分泌抗CPV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,其中4株分泌IgG_1,2株分泌IgM;6株杂交瘤细胞染色体数目介于96—103之间;在半年传代期间(45代),均能稳定地分泌McAb。将杂交瘤细胞注射BALB/C小鼠诱生腹水,其HI效价介于1:128—1:512之间,置-20℃保存1年,其效价不变。用交又HI法对2株单克隆抗体作特异性分析,该McAb只特异地与CPV发生反应,而不与猫泛白细胞减少症病毒(FPLV)、水貂肠炎病毒(MEV)发生反应。 相似文献
2.
将猪细小病毒(PPV)免疫的BALB/C小鼠脾细胞与SP_2/O细胞在聚乙二醇作用下融合,用血凝抑制试验(HI)筛选,以有限稀释法克隆3次,得到5株分泌抗PPV单克隆抗体(McAb),选择抗体分泌较高的4F_4、A_4或E_8进行较详细的研究,结果表明,其核内染色体数为93和87,抗体属性为IgG_1,其中1株为K轻链,用交叉HI法对2株McAb作特异性分析,该McAb只特异地与PPV发生反应,而不与日本乙型脑炎(JEV)、犬细小病毒(CPV-b)发生反应,将其中3株杂交瘤细胞注射BALB/C小鼠,抗体HI效价介于1:256～1:10240之间。 相似文献
3.
用广西骡株伊氏锥虫可溶性抗原免疫的BALB/C小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP_2/O)融合,获得了在ELISA中能与广西骡株伊氏锥虫可溶性变异表面糖蛋白反应的2个分泌IgG_1的单克隆抗体(McAb)。用McAb于ELISA抑制试验对四份不同期的广西骡株伊氏锥虫阳性血清的抗体成分进行了分析,结果四份锥虫阳性血清对于McAb与相应抗原决定簇的结合均未出现明显的抑制作用。表明血清样本间很少或完全没有与McAb相类似的抗体。这证明伊氏锥虫存在多个血清型亦即变异抗原型。 相似文献
4.
刘长明 《中国预防兽医学报》1994,(3)
以纯化的兔出血症病毒(RHDV)免疫BALB/C鼠,应用杂交瘤技术获的了分泌抗RHDV单抗(McAb)杂交瘤细胞17诛。其中有3株杂交瘤细胞分泌单抗的ELISA效价为1:409600(腹水)、1:4096(上清);5株单抗具有血凝抑制活性。兔抗RHDV高免血清对17株McAb的ELISA抑制率都大于90％。5株McAb亚类为IgG_1,8株为IgG_20,4株为IgG_20。各株McAb与欧洲棕色兔病病毒无抗原交叉反应,也无沉淀反应特性。 相似文献
5.
以差速离心和密度梯度离心法纯化的新城疫病毒(NDV)F_(48)E_6株免疫接种 BALB/C 小鼠,取其脾脏制备脾细胞,与 SP2/0骨髓瘤细胞融合,经用 ELISA 检测和有限稀释法克隆化,筛选出3株对 NDV 特异的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞。其产生的 McAb 仅与 NDV 发生特异性反应。3个 McAb 分别属 IgG_1和 IgG_3,所有McAb 均不具有沉淀反应特性. 相似文献
6.
用含1%甲醛的磷酸盐缓冲液对相思子毒素-a(abrin-a)减毒处理制备类毒素,以类毒素为免疫抗原分4次免疫3只BALB/c小鼠。采用聚乙二醇(PEG)法,取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选分泌抗abrin-a的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株。将阳性细胞株接种BALB/c小鼠制备McAb腹水,根据亚类鉴定结果,分别采用蛋白A或蛋白G亲和层析柱纯化腹水,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测McAb特异性,Western-blot法分析McAb抗原识别位点。结果获得1G5、3C2和4G1共3株McAb杂交瘤细胞株,均为抗abrin-a的特异性McAb,与相思子凝集素、蓖麻毒素(ricin)和蓖麻凝集素均无交叉反应,其中4G1为特异性结合abrin-a A链的McAb,1G5和3C2两株为特异性结合abrin-a B链的McAb;制备的McAb可用于abrin-a含量的检测。 相似文献
7.
分别用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和纯化的重组N蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体(McAb)。用纯化的PRRSV免疫小鼠,经细胞融合获得2株可分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为4B8、4D8。用重组N蛋白免疫的小鼠,经细胞融合获得3株可分泌特异性McAb的抗PRRSV N蛋白的杂交瘤细胞2F3、4D5、5D11。间接ELISA检测4D8、4B8、4D5和5D11杂交瘤上清效价为1∶32~1∶512,而2F3的腹水效价为1∶12 800。单抗2F3、4B8和4D8与纯化病毒的Western blotting反应都为阳性,而4D5和5D11为阴性。IFA检测结果5株单抗都有明显的荧光,与PRRSV呈阳性反应。2F3的Ig亚型为IgM。5株单抗杂交瘤细胞连续传代至20代,分泌相应McAb的效价基本一致。本研究为PRRSV生物学诊断和方法研究提供有用工具。 相似文献
8.
相思子毒素-α单克隆抗体的制备与鉴定 总被引：2，自引：1，他引：1
用含1%甲醛的磷酸盐缓冲液对相思子毒素-a(abrin-a)减毒处理制备类毒素,以类毒素为免疫抗原分4次免疫3只BALB/c小鼠.采用聚乙二醇(PEG)法,取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选分泌抗abrin-a的单克隆抗体(MeAb)杂交瘤细胞株.将阳性细胞株接种BAI.B/c小鼠制备McAb腹水,根据亚类鉴定结果,分别采用蛋白A或蛋白G亲和层析柱纯化腹水,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测McAb特异性,Western-blot法分析McAb抗原识别位点.结果获得1G5、3C2和4G1共3株McAb杂交瘤细胞株,均为抗abrin-a的特异性McAb,与相思子凝集素、蓖麻毒素(ricin)和蓖麻凝集素均无交叉反应,其中4G1为特异性结合abrin-a A链的MCAb,1G5和3C2两株为特异性结合abrin-a B链的MCAb;制备的MCAb可用于abrin-a含量的检测. 相似文献
9.
用淋巴细胞杂交瘤技术获得3株能稳定分泌抗沙门氏菌Ⅰ群主因子(O_(16))单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系,并对其部分生物学特性进行测定。这些单抗不仅特异性强,而且反应效价高,其中以A—12—4单抗反应滴度最高,腹水ELISA效价为10~5,在pH 3—9范围内稳定,在-70℃至37℃反复冻融3次和在56℃3小时单抗的效价无明显下降。琼扩试验表明3株单抗亚类分别为IgM,IgG_1和IgG_3,用竞争ELISA试验证明,这3株单抗都是对同一抗原决定簇,都是针对Ⅰ群主因子抗原O_(16)。 相似文献
10.
为了制备抗牛γ-干扰素(IFN-γ)的单克隆抗体(McAb),并对其部分生物学特性进行初步研究,试验用重组牛IFN-γ蛋白免疫小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术和间接ELISA方法进行试验.结果表明:共获得5株抗IFN-γ的单克隆抗体,Ig亚类鉴定均为IgGI,轻链为k链;经Weatern-blot试验证实5株McAb均能与IFN-γ发生特异性反应,而与其他蛋白不发生反应,特异性好;以5株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株制备腹水,效价均达到1:50 000以上. 相似文献
11.
<正> 南京农业大学陈永萱教授等用Percoll密度梯度离心提纯的桑萎缩病类菌原体(MD)免疫BALB/C小鼠,其脾脏细胞与SP_2/O鼠骨髓瘤细胞融合,经克隆分别得到3株稳定分泌抗MD单克隆抗体(McAb)的杂交细胞株。在三次近2000孔杂交细胞株 相似文献
12.
13.
小鼠SP2/0骨髓瘤细胞和用产气荚膜梭菌ε类毒素免疫BALB/C鼠的脾细胞,以PEG为融合剂进行融合,伙得分泌抗产气荚膜梭菌ε毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株13株。经鉴定,杂交瘤所分泌的单克隆抗体在ELISA中均特异地与产气荚膜梭菌ε毒素反应,而不与α和β毒素反应。13株单克隆抗体均为IgG_1亚类,经毒素抗毒素中和试验 测定,13株单克隆抗体中,12株具有中和ε毒素的活性。 相似文献
14.
用纯化的蓝舌病病毒(BTV)免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA方法筛选,有限稀释法克隆,获得2株稳定分泌抗BTV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1F5和4E5).其细胞培养上清ELISA效价分别为1:512和1:256,腹水ELISA效价分别为1:512 000和1:128 000.亚型鉴定表明,1F5和4E5分别为IgGl和IgG2a.ELISA结果显示,2株单克隆抗体仅与BTV反应,不与其他相关病毒反应,表明2株单克隆抗体特异性良好.2株单克隆抗体1F5和4E5的相对亲和力指数分别为5.14×106mol/L和6.71×106mol/L.这2株单克隆抗体的获得为建立BTV免疫学检测方法奠定了基础. 相似文献
15.
将NS-1小鼠骨髓瘤细胞与经羊型布鲁氏菌M23菌种免疫的Bal B/C鼠脾细胞融合,获得一株分泌高滴度单克隆抗体的M2B 1D_2C-1杂交瘤细胞。染色体数为87～104,平均为97±3.4。分泌物以ELISA法检测,滴度在1:30,000以上。抗体经ProteJnA Sepharose-CL4B亲和层析法提纯,在十二烷基磺酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)泳出一条区带。抗体用2-ME还原后出现两条区带,显示了抗M28的McAb均来自免疫鼠脾细胞的重链和轻链,是均一性的单克隆抗体(McAb)。本抗体与抗鼠IgG_3标准血清免疫扩散试验呈阳性反应。杂交瘤细胞连续传代所产生的抗体,滴度稳定,将为研究其理化性质和生物学特性等问题提供了方便试剂。 相似文献
16.
制出13株能够分泌抗Brescia株猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法用P_3×63-Ag8.653株鼠骨髓瘤细胞与经过纯化猪瘟病毒(HCV)免疫的BALB/C小鼠脾脏融合后,而获得杂交瘤细胞。使用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫过氧物酶单层细胞分析法(IMPA)进行培养上清液的筛选。在冰冻切片上进行IMPA和免疫过氧物酶试验(IPT),标化这些单克隆抗体(McAb)和几株瘟疫病毒属的关系,结果所有McAb都在不同程度上与被检的一株以外的所有HCV株发生反应。全部McAb与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)都无反应。现已用其中两株McAb按常规方法进行野外HCV株感染和中国C株疫苗株以及BVDV株之间的区别诊断。 相似文献
17.
为了制备牛分枝杆菌的单克隆抗体,本试验利用制备的原核表达的牛分枝杆菌重要抗原蛋白MPB70作为免疫原皮下多点注射免疫BALB/c小鼠。利用细胞融合技术,经过5次亚克隆与筛选,取已免疫好的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG3500的作用下进行细胞融合。筛选得到了2株分泌抗牛分枝杆菌MPB70蛋白的杂交瘤细胞,分别命名为Anti-B-MPB70:8和Anti-B-MPB70:12。采用间接ELISA方法对获得的单克隆抗体进行亲和常数检测、效价分析及亚类鉴定,通过SDS-PAGE凝胶试验对单克隆抗体进行纯度分析,并检测其浓度,通过Western blotting方法对单克隆抗体的反应特性进行鉴定。结果显示,纯化后的MPB70蛋白分子质量大小为20 ku,浓度为0.5 mg/mL。两株单克隆抗体的亲和常数分别为9.95×10~9和9.53×10~8;抗体效价分别为1∶102 400和1∶12 800;抗体亚类分别为IgG_(2b)和IgG_1,轻链类型均为κ型;纯度90%;浓度分别为3.0和2.2 mg/mL;且具有良好的反应特性。以上研究结果表明,本试验成功制备了抗MPB70蛋白单克隆抗体,可为牛结核病病原和抗体检测技术研究奠定基础。 相似文献
18.
用持续感染BLV的羊胎肾细胞(BLV/FLK)制备的BLV抗原免疫2月龄BALB/c小鼠,取血清抗体阳性的小鼠细胞与SP_(2/0)小鼠骨髓瘤细胞融合,以PPA-ELISA为抗体检测方法,通过有限稀释法,克隆出E_4和C_9两株分泌抗BLV-gp抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞,其核内染色体数均为97～107。杂交瘤细胞诱生BALB/C小鼠腹水的酶标抗体滴度可达20000倍,经琼扩试验,两株分泌的MAB都仅与兔抗鼠IgG_3标准血清呈现明显而均一的沉淀线,经蛋白质渍印试验和斑点试验,两株的MAB也都只与BLV-gp抗原发生特异性反应,经过连续传代和冻存,两株细胞的抗体滴度稳定。 相似文献
19.
《中国畜牧兽医文摘》2012,(10)
<正>用纯化的重组HIS标签N蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体(McAb),经细胞融合获得5株可分泌特异性McAb的抗PRRSV N蛋白的杂交瘤细胞1A12,3F11,5A3,5F9,4E4。其中1A12,3F11,5A3,4E4杂交瘤上清与HIS-N蛋白与GST-N蛋白两种抗原包被的ELISA反应均为阳 相似文献
20.
鸡白血病／肉瘤病毒杂交瘤细胞株的建立及其单抗特性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
用提纯的RSV-1抗原免疫BALB/C小鼠,将其脾细胞与SP2/0癌细胞进行融合,获得10株能稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞系。用间接ELISA、IFA、AGP对其生物学特性进行了分析,10株MCA均属小鼠免疫球蛋白IgG_1、R_5C_(21)a、R_5C_(22)a、R_7C(32)、R_7C(34)四株MCA与RAV-1、RAV-2、SR-RSV-A、Pr-RSV-C、RAV-50病毒株均有强交叉反应,其余6株对上述病毒反应情况不尽一致,10株单抗与REV(T株)均无交叉反应。文章还讨论了单克隆抗体在我国SPF鸡群和普通鸡群白血病检测、净化中实际应用的可能性。 相似文献