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1.
本试验旨在研究H9N2流感病毒感染MDCK细胞引发的细胞自噬对病毒复制的影响。试验首先建立了稳定表达GFP-LC3的 MDCK细胞系,该细胞系经H9N2流感病毒感染后,激光共聚焦观察到了绿色荧光的点状聚集,得出H9N2流感病毒感染MDCK细胞引发细胞自噬。随后试验利用3-MA抑制细胞自噬、Rapamycin诱导细胞自噬,荧光定量PCR检测NP mRNA水平,TCID50检测病毒的滴度进行细胞自噬与病毒复制的研究。结果表明： Rapamycin可显著增加NP mRNA水平和病毒滴度（P ＜ 0.01）|3-MA可以显著降低NP mRNA水平和病毒滴度（P ＜ 0.01)。说明H9N2流感病毒感染MDCK细胞引发的细胞自噬可促进流感病毒的复制。
[关键词] H9N2 流感病毒|细胞自噬|病毒复制|MDCK细胞|诱导 相似文献
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苦参碱对微小隐孢子虫体内外感染的抑制作用 总被引：1，自引：0，他引：1
应用犬肾细胞(MDCK)模型和BALB/c小鼠模型,研究了苦参碱(MT)对隐孢子虫(C.parvum)感染的抑制作用。用C.parvum感染MDCK细胞和BALB/c小鼠,通过检测感染MDCK细胞中C.parvum的数量和BALB/c小鼠的排卵囊数来评价不同剂量的MT对C.parvum活性与感染性的体内外抑制作用。体外试验表明,MT高、中、低3个剂量组均能显著或极显著降低MDCK细胞模型中的C.parvum感染数量(P<0.05或P<0.01);体内试验表明,MT高、中、低3个剂量组均能显著减少BALB/c小鼠的排卵数(P<0.05)。 相似文献
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为了探讨H9亚型禽流感病毒对MDCK细胞增殖及其培养基过氧化氢含量的影响,将不同剂量的H9亚型禽流感病毒接种MDCK细胞单层,吸附1.5h后弃去再加入新的DMEM维持液,每隔12h取上清液测定HA滴度、乳酸脱氢酶(LDH)活力以及过氧化氢(H2O2)含量。同时,本试验采用MTT法测定不同剂量病毒接种对MDCK细胞增殖的影响。结果表明,以10-3EID50、10-4EID50病毒剂量接种细胞后,病毒HA滴度分别在36h和48h达到滴度最大值(9log2)以及LHD活力的最大值,上清液中H2O2含量在48h时显著(P<0.05)高于空白对照组和低剂量病毒接种组;接种病毒后36h以内对MDCK细胞生长具有显著地(P<0.05)促进作用,之后会显著(P<0.05)抑制细胞的增殖。综上所述,H9亚型禽流感病毒能在前期促进MDCK细胞的增殖,随着病毒增殖对细胞损伤加大,LDH漏出量增加,促凋亡因子H2O2参与介导了这一过程。 相似文献
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《中兽医学杂志》2017,(1)
目的:从体外抗病毒试验观察中草药红茶菌制剂抗甲I型流感病毒(H1N1)作用。方法:利用细胞共培养法测定中草药红茶菌的细胞毒性;体外试验以H1N1感染MDCK细胞,观察用鸡红细胞凝集抑制法测试中草药红茶菌制剂体外对H1N1流感病毒的抑制效果。结果:中草药红茶菌制剂在1:2稀释度时对MDCK细胞存在66.25%的毒性作用,其在MDCK细胞上的半数毒性浓度TC50约为2-5倍稀释度;中草药红茶菌制剂在半数毒性浓度1:2和无毒浓度1:3稀释度时对流感病毒FM1株具有完全抑制作用,而在1:4稀释度下对病毒有50%的抑制作用,高于1:4稀释度的受试样品则不能抑制流感病毒FM1株的对鸡红细胞的凝集作用。 相似文献
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将传代MDCK细胞以8×104/cm2的密度接种于6孔细胞培养板,H9亚型禽流感病毒以不同剂量0(对照组)、10-3(高剂量组)、10-4(中剂量组)、10-5×EID50(低剂量组)分别接种,检测H9亚型禽流感病毒对MDCK细胞内抗氧化功能的影响。结果表明,与对照组相比,高剂量H9亚型禽流感病毒接种MDCK细胞使细胞内过氧化氢(H2O2)和羟基自由基(·OH)含量均显著增加(P>0.05),细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力均显著下降(P>0.05),细胞内的丙二醛(MDA)含量显著增加(P>0.05)。说明H9亚型禽流感病毒可显著提高MDCK细胞内活性氧自由基(ROS)含量,并降低抗氧化酶活力,阻碍ROS在细胞内的清除机制,引起细胞脂质过氧化作用,从而损伤细胞。 相似文献
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将H8N4亚型流感病毒的HA和NA基因插入双向转录/表达载体pHW2000中,并与本实验室保留的适应毒株A/PR/8/34(H1N1)的6个质粒pHW2000-PB2、pHW2000-PB1、pHW2000-PA、pHW2000-NP、pHW2000-M、pHW2000-NS共转染293T和MDCK混养细胞,在细胞内部完成病毒粒子的组装,然后接种SPF鸡胚,经3代扩毒后,成功拯救了H8N4亚型重组流感病毒,并对其进行鉴定及生物学特性分析。本研究结果为该亚型禽流感病毒变异机理研究及疫苗的研制等奠定了基础。 相似文献
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《中国畜牧兽医文摘》2012,(8)
<正>目的检测盐酸阿比朵尔体外对2009新型流感病毒A(H1N1)复制的影响。方法采用2009新型流感病毒A(H1N1)感染MDCK细胞系统,检测盐酸阿比朵尔抗流感病毒的活性。血凝实验、细胞病变保护实验、RT-PCR和定量RT-PCR实验用于病毒滴度确定。使用Chou软 相似文献
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研究硫酸酯化酵母β-葡聚糖对H1N1猪流感病毒的体外抑制作用及对神经氨酸酶活性的影响。采用细胞感染模型,应用MTT法检测药物对MDCK细胞的半数毒性浓度(TC50)、半数抑制浓度(IC50)及治疗指数(TI),并结合神经氨酸酶抑制试验检测药物对其活性的影响。结果表明,硫酸酯化酵母β-葡聚糖对MDCK细胞最大无毒浓度为5.34 mg/m L,其半数抑制浓度(IC50)为0.58 mg/m L,治疗指数(TI)为18.0;当药物浓度≥1.25 mg/m L时,能明显降低H1N1猪流感病毒神经氨酸酶的活性。提示硫酸酯化酵母β-葡聚糖有确定的体外抑制H1N1猪流感病毒的作用,并能影响病毒神经氨酸酶的活性。 相似文献
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本试验旨在建立一种针对检测抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验（immunoperoxidase monolayer assay,IPMA）筛选方法。通过优化MDCK细胞接毒量、细胞接毒后培养时间、封闭液的种类和工作浓度、工作时间等各个反应条件,并对建立的IPMA筛选方法的特异性、敏感性和重复性进行评价。结果显示,建立的IPMA检测方法的最优反应条件为MDCK细胞接毒102.63 TCID50/100 μL H1N1亚型猪流感病毒,37℃培养24 h,含3‰ H2O2的甲醇室温固定15 min,5%脱脂乳37℃封闭2 h,50 μL杂交瘤细胞上清作为一抗,37℃孵育2 h,羊抗鼠HRP-IgG二抗37℃孵育1 h。所建立的IPMA方法能特异性地检测H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）和猪瘟病毒（CSFV）阳性血清不发生交叉反应;其敏感性检测结果显示,可检测1：3 200的HI=2-9标准H1N1猪阳性血清;批间和批内重复性试验结果较好。综上所述,本试验成功建立了抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的IPMA检测方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,为生产鉴定H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体提供了一种简便、实用、有效的检测手段。 相似文献
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为了筛选对H9N2亚型禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）有独特防治效果的中药复方,本试验基于禽流感发病临床症状、结合中药复方用药基本原则,组方芩根提取液（Qingen extract,QG）,以奥司他韦（达菲,DF）为阳性对照药,通过研究药液对神经氨酸酶（neuraminidase,NA）的抑制作用,采用CCK-8法测定药液对犬肾上皮细胞（MDCK）毒性作用,并从病毒吸附、增殖和灭活3个方面做了药效评价。结果表明,QG对NA的抑制作用在一定浓度范围内呈浓度依赖性增高,半数抑制浓度（IC50）约为1 130 μg/mL;QG和DF的最大安全浓度分别为2 500和500 μg/mL,H9N2 AIV的TCID50为10-4.36/100 μL;QG浓度为156.25~2 500 μg/mL范围内,对H9N2 AIV的病毒毒力有一定抑制作用,并在MDCK细胞上呈现出一定的抗吸附、抑制病毒复制作用。表明QG在对抗H9N2 AIV的NA活性、抑制H9N2 AIV吸附靶细胞和在细胞内复制有一定的作用。 相似文献
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目的：探索H5N1亚型禽流感病毒在MDCK中增殖规律,确定最佳增殖条件。方法将H5N1亚型禽流感病毒接种到6孔板培养的MDCK细胞进行增殖试验,检测不同病毒感染量、不同浓度TPCK-胰酶,接毒后不同时间病毒的HA滴度。根据确定的最佳增殖条件将病毒接种到微载体培养的MDCK细胞中进行大规模增殖。结果：最佳病毒增殖条件接毒量MOI为5＆#215;10-4、TPCK-胰酶浓度为4μg/mL,在5 L生物反应器中重复验证,获得稳定的试验结果,病毒血凝价最高为8 log2。结论：本研究为禽流感疫苗的生物反应器规模化生产奠定了基础。 相似文献
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Antigenic variant of swine influenza virus causing proliferative and necrotizing pneumonia in pigs. 总被引：13，自引：0，他引：13
S Dea R Bilodeau R Sauvageau C Montpetit G P Martineau 《Journal of veterinary diagnostic investigation》1992,4(4):380-392
A new antigenic variant of swine influenza virus was isolated from the lungs of pigs experiencing respiratory problems in 7 different swine herds in Quebec. Pigs of different ages were affected, and the main clinical signs were fever, dyspnea, and abdominal respiration. Coughing was not a constant finding of the syndrome. At necropsy, macroscopic lesions included the overall appearance of pale animals, general lymphadenopathy, hepatic congestion, and consolidation of the lungs. Histopathologic findings were mainly proliferative pneumonia with a significant macrophage invasion, necrotic inflammatory cells in the alveoli and the airways, a marked proliferation of type II pneumocytes, and thickening of the alveolar septae. Fluorescent antibody examination of lungs of sick piglets did not demonstrate porcine parvovirus, transmissible gastroenteritis virus, or encephalomyocarditis virus. However, evidence of the presence of an influenza type A infection was demonstrated by indirect immunofluorescence (IIF) staining using monoclonal antibody directed to nucleocapsid protein (NP) of human type A influenza virus. The virus was isolated either by intra-allantoic inoculation of specific-pathogen-free embryonating hens' eggs or propagation in canine kidney (MDCK) cells in the presence of trypsin. By hemagglutination inhibition tests, no cross-reactivity was demonstrated with human influenza H1N1, H2N2, and H3N2 strains, and infected MDCK cells did not react by IIF with monoclonal antibodies to NP protein of type B influenza virus. The hemagglutination activity of plaque-purified isolates was only partly inhibited by hyperimmune serum produced to subtypes A/Wisconsin/76/H1N1 and A/New Jersey/76/H1N1 of swine influenza virus. Gnotobiotic piglets that were infected intranasally with egg-adapted isolates of this new antigenic variant of swine influenza virus developed the very same type of lesions observed in field cases. 相似文献
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为了构建H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Shandong/LY1/2017的反向遗传操作平台,通过RT-PCR技术分别扩增该毒株的8个基因片段,并分别克隆至双向转录表达载体PHW2000中.8个质粒共转染293T/MDCK混合细胞,96 h后将细胞板反复冻融3次收获细胞悬液,将其接种10日龄SPF鸡胚,96 h后收集尿囊液并将拯救毒株命名为rH9N2,测定其HA效价为1:256.rH9N2在HA、MDT、EID50、TCID50以及病毒生长曲线、空斑等方面保持了与亲本毒株一致的生物学特性.本研究成功构建了A/Chicken/Shandong/LY1/2017的感染性克隆,为今后通过基因替换、定点突变技术研究H9N2亚型禽流感病毒致病性的分子机制奠定了基础. 相似文献
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为了研究禽流感病毒的反向遗传,试验采用霍夫曼发明的8质粒拯救系统,将分离得到的AIV Isolate3(H9N2)基因组,通过RT-PCR得到HA基因,并克隆到以pcDNA3质粒为骨架自行构建的双向转录/表达载体pHW2008上,得到HA转录/表达质粒,再将HA表达质粒与构建好的包含A/Puerto Rico/8/34(H1N1)7个内部基因双向转录/表达质粒共转染人肾上皮细胞(293T)与犬肾细胞(MDCK)混养细胞。结果表明:试验成功构建了重配H9N1亚型流感病毒减毒株。 相似文献