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为研发一种安全、特异、高效的抗肿瘤基因治疗候选药物，本试验基于人端粒酶启动子（hTERTp）、人5型腺病毒复制必需基N（Ela）和特异性抑癌基N（Apoption），利用RAPAd．I腺病毒载体系统，构建了一种具有肿瘤特异性杀伤和特异性复制能力的双特异性抗肿瘤重组腺病毒Ad—VT。并利用人肝癌细胞（HepCr2）、人肺癌细胞（A549）、人宫颈癌细胞（Hela）、人胚胎肺细胞（WI-38）和非洲绿猿肾细胞（Vero）对hTERTp的肿瘤特异性进行鉴定。结果显示，hTERTp可在HepC-2、A549和Hela等肿瘤细胞内特异性启动外源基因的表达，而在WI-38、Vero等正常细胞内不能启动相关基因表达。用RT—PCR及Western—blot等方法对Apoptin基因和Ela基因的转录和表达进行了鉴定。结果表明，Ad—VT能够有效表达Apoptin和Ela等外源基因。 相似文献
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为探讨重组腺病毒Ad－HP对人肝癌细胞BEL－7402的影响及其对鼠肝癌肺转移模型的抑制作用,本研究利用MTT染色法进行了Ad－HP的体外抑瘤研究,并应用AnnexinV检测、Caspase活性检测、AO／EB染色和DAPI染色等方法分析了Ad－HP的抑瘤方式。另外,本研究利用鼠肝癌细胞H22,建立了肝癌肺转移动物模型,并检测了Ad－HP对肝癌肺转移的抑制作用及其对模型动物免疫的影响。结果表明,Ad－HP能够有效抑制BEL－7402细胞的生长,且其作用具有一定时效和剂效关系趋势;Ad－HP感染导致BEL7402细胞呈现磷脂膜外翻、细胞核皱缩、细胞膜通透性增加和Caspase酶活性增强等典型凋亡特征;应用Ad－HP治疗肿瘤模型能够有效延长模型动物平均生存期,控制转移灶形成,增强NK和CTL活性,上调Thl类细胞因子水平。总之,Ad－HT能够通过诱导细胞凋亡抑制BEL－7402肿瘤细胞增殖,并且能够有效控制肝癌肺转移灶形成,延长模型动物平均生存期。 相似文献
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将H8N4亚型流感病毒的HA和NA基因插入双向转录/表达载体pHW2000中,并与本实验室保留的适应毒株A/PR/8/34(H1N1)的6个质粒pHW2000-PB2、pHW2000-PB1、pHW2000-PA、pHW2000-NP、pHW2000-M、pHW2000-NS共转染293T和MDCK混养细胞,在细胞内部完成病毒粒子的组装,然后接种SPF鸡胚,经3代扩毒后,成功拯救了H8N4亚型重组流感病毒,并对其进行鉴定及生物学特性分析。本研究结果为该亚型禽流感病毒变异机理研究及疫苗的研制等奠定了基础。 相似文献
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通过在E3L同源重组臂中插入含有增强型痘苗病毒早晚期启动子（pE／L）、增强型绿色荧光蛋白基因和同向Loxp（Locus of X-overP1）序列的表达盒构建穿梭质粒pTE—EGFP。利用pTE—EGFP和野生型天坛株痘苗病毒共转染仓鼠肾细胞（BHK-21）,通过对绿色荧光蚀斑的10次筛选,构建缺失E31．基因并含有EGFP基因的重组痘苗病毒rTTVV-TE-EGFP＋利用rTTVV—TE-EGFP＋和含有Cre（Cyclization recombination）重组酶基因的重组质粒pVAX1-Cre共转染BHK-21细胞,通过对无荧光蚀斑的10次筛选,构建无筛选标记的天坛株痘苗病毒减毒株rTTVV—TE一,并利用聚合酶链式反应（PCR）对其进行鉴定。鉴定结果显示,rTTVV-TE-中无ESI。基因转录和EGFP基因表达。以上结果说明,所构建的痘苗病毒减毒株rTTVV—TE--完全缺失了E3L基因和外源筛选标记EGFP基因,且具有良好的遗传稳定性。 相似文献
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