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《中国兽医学报》2015,(9):1476-1482
胸腺肽Tβ4和法氏囊活性五肽BP5均能够调节机体的免疫反应,为探讨重组融合肽Tβ4-BP5是否也与免疫功能相关,本试验按照大肠杆菌偏嗜密码子设计并合成重组融合肽Tβ4-BP5基因,将其克隆至pET-32α表达载体中,重组表达载体在大肠杆菌BL21中诱导表达。为进一步评价重组融合肽Tβ4-BP5的免疫佐剂特性,以Tβ4-BP5联合灭活H9N2型AIV疫苗免疫鸡,检测免疫后鸡的HI抗体效价、抗原特异性IgG抗体、AIV中和抗体效价及Th1型(IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4)的分泌水平,并通过动物免疫保护试验来评价其对鸡的免疫保护作用。结果显示,重组融合肽Tβ4-BP5在大肠杆菌中获得表达;Tβ4-BP5能够增强机体免疫后HI抗体、特异性IgG抗体水平、促进AIV中和抗体的产生、提高Th1型(IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4)的分泌水平,表明Tβ4-BP5既能增强机体体液免疫应答,又能增强细胞免疫应答。动物免疫保护试验结果显示Tβ4-BP5有助于鸡肺脏中H9N2型AIV病毒的清除。以上结果提示,重组融合肽Tβ4-BP5具有良好的免疫佐剂的潜能。本研究为新型疫苗佐剂的研究开发奠定了基础。 相似文献
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《中国动物传染病学报》2019,(6)
本研究旨在评价表达柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)顶膜抗原1(Apical membrane antigen 1,Et AMA1)基因的DNA疫苗对雏鸡柔嫩艾美耳球虫人工感染的免疫保护效果。将Et AMA1基因和鸡IFN-γ基因插入真核表达载体p CAGGS中,分别构建了真核表达重组质粒p CAGGS-Et AMA1和p CAGGS-Et AMA1-IFN-γ。将重组质粒p CAGGS-Et AMA1转染进293T细胞中,经间接免疫荧光和Western blot实验鉴定,观察其在体外表达情况。将p CAGGS-Et AMA1和p CAGGS-Et AMA1-IFN-γ于7日龄和14日龄腿部肌肉注射免疫雏鸡,21日龄人工感染1×104个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,第29日龄时处死试验鸡,以平均增重、卵囊产量和病变记分来评价重组质粒的免疫保护效果。结果显示,p CAGGS-Et AMA1转染的293T细胞出现明显的红色荧光;两种真核表达重组质粒免疫组鸡的平均增重与未攻虫组的平均增重差异不显著,不具有统计学意义,而未免疫攻虫组则与未攻虫组在增重方面差异具有显著统计学意义;免疫组鸡相较于未免疫攻虫组在病变记分方面显著下降;免疫组的卵囊减少率分别为67.43%和72.89%;p CAGGSEt AMA1-IFN-γ组在增重、盲肠病变记分和卵囊减少率方面都优于p CAGGS-Et AMA1组,但差异不具有统计学意义。表明构建的2种重组质粒对雏鸡柔嫩艾美耳球虫感染有一定的免疫保护效果。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2016,(4)
胸腺素α1(Tα1)和法氏囊活性五肽(BP5)均具有重要的免疫学功能,但二者在蛋白水平上的联合应用尚未见报道。为探究重组表达融合肽Tα1-BP5(r Tα1-BP5)是否具有免疫佐剂特性,本实验设计合成融合肽Tα1-BP5基因,将其克隆至p ET-32a中进行原核表达,并采用MTT法检测其体外活性。同时以rTα1-BP5联合H9N2型禽流感病毒(AIV)灭活疫苗免疫小鼠,检测免疫后小鼠的HI抗体、IgG抗体亚型和细胞因子(IL-4和IFN-γ)的分泌水平,并通过攻毒试验评价其对小鼠的免疫保护作用。结果显示,rTα1-BP5在大肠杆菌中获得可溶性表达;rTα1-BP5能够增强机体免疫后HI抗体、平衡IgG1和IgG2a抗体、提高Th2型(IFN-γ)和Th1(IL-4)型细胞因子的分泌水平,表明rTα1-BP5能够同时增强机体体液和细胞免疫应答。动物免疫保护试验结果显示rTα1-BP5有助于鼠肺脏中H9N2型AIV的清除。以上结果提示,rTα1-BP5具有良好的免疫佐剂的潜能。本研究为新型疫苗佐剂的研究开发奠定了基础。 相似文献
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《中国动物传染病学报》2016,(3)
本研究利用PCR技术扩增到日本血吸虫C1q BP基因,构建了重组表达质粒p ET-32a(+)-Sj C1q BP,并在大肠杆菌中进行表达。将重组蛋白免疫小鼠评估其免疫保护效果,采用Western blot检测其免疫原性,ELISA检测其特异性抗体水平,应用补体溶血试验分析重组蛋白对补体溶血的抑制效果。结果显示日本血吸虫C1q BP基因含729 bp的编码序列,在大肠杆菌中BL21(DE3)中表达后,用His-Bind亲和层析纯化可获得50 k Da的重组蛋白r Sj C1q BP。应用重组蛋白r Sj C1q BP免疫BALB/c小鼠可产生较高水平的特异性Ig G抗体,诱导36.08%的减虫率和43.45%的肝脏减卵率;补体溶血试验结果表明该重组蛋白能够抑制补体溶血。本研究结果为进一步研究日本血吸虫Sj C1q BP的生物学功能奠定了基础。 相似文献
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《畜牧与兽医》2017,(5):83-88
为了研究法氏囊多肽的免疫调节作用,本试验用BSP-Ⅰ和BPP-Ⅰ分别与禽流感灭活疫苗或抗原混匀后免疫鸡。结果显示,BSP-Ⅰ和BPP-Ⅰ均明显提高免疫鸡体内禽流感抗体水平,且两者均促进Th1和Th2型细胞因子产生。采用鸡B淋巴细胞cDNA T7噬菌体文库筛选法氏囊活性肽相互作用的受体蛋白,PCR扩增富集噬菌体克隆的插入片段。序列分析结果表明,BSP-Ⅰ相互作用的蛋白受体有3种,分别为VSTM2、N-钙黏蛋白和v-myc。BPP-Ⅰ相互作用的蛋白分子主要是Ryanodine受体、MGC83917蛋白和BTB/POZ1。这些结果表明,法氏囊活性肽参与机体中多种生物学过程,为深入研究法氏囊活性肽的功能提供了理论基础。 相似文献
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为了制定科学有效的鸡新城疫疫苗免疫程序,提高免疫效果,减少鸡只的应激反应,本研究设计了4种免疫程序,即禽流感-新城疫重组二联活疫苗、鸡新城疫灭活油乳剂疫苗分别单独免疫和共同交叉免疫,通过血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验对以上组别进行免疫效果检测和母源抗体消长分析。结果表明:商品肉鸡15日龄为最佳疫苗接种时点,首免接种禽流感-新城疫重组二联活疫苗,35日龄和55日龄分别加免新城疫灭活油乳剂疫苗,这种免疫程序可维持稳定持久的抗体水平,且大大减少鸡只的应激反应和养禽户的投资成本。 相似文献
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不同高致病性禽流感疫苗的免疫效果试验 总被引：1，自引：0，他引：1
应用重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）,禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）对三组肉鸡进行禽流感免疫效果观察,首免用重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）,二免用禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）。结果表明：接种重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）的免疫效果比接种禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）的效果好;首免用重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）,二免用禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）的效果比仅接种重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-1株）的效果好。 相似文献
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为研究M细胞靶向肽co1的免疫增强作用,本研究从肠产毒素性大肠杆菌(ETEC)全基因组中扩增FaeG基因,通过重叠延伸PCR的方法将人工合成的co1靶向肽编码序列连接到FaeG基因的3'端,获得FaeG-co1融合基因.并分别将FaeG和FaeG-co1基因克隆到pET-30b表达载体中,转化于大肠杆菌BL21 (DE3)进行表达.SDS-PAGE和western blot分析显示,FaeG和FaeG-co1基因在大肠杆菌中均获得了高效表达,表达产物主要以包涵体形式存在.分别用两种重组菌表达的包涵体免疫昆明鼠,测定特异性IgG、sIgA抗体水平,并用ETEC强毒株对免疫鼠进行攻毒.结果表明,FaeG-co1重组蛋白免疫小鼠诱导机体产生的特异性IgG和sIgA抗体水平均显著高于FaeG组;FaeG-co1组两次免疫后即可对ETEC致死剂量的攻毒保护率达到100％.这些结果表明M细胞靶向肽对抗原具有免疫增强作用,是一种极具应用前景的免疫增强分子. 相似文献
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高致病性禽流感严重制约着禽类产业链的健康发展,以H5N1为代表的高致病性禽流感病毒能够跨越种间障碍感染人,对公共卫生安全造成极大危害。而预防禽流感的传统疫苗主要是全病毒灭活苗,该类疫苗使用量大,灭活不全时易造成散毒,并给流行病学监测带来困难。研发更加安全、高效的新型疫苗势在必行。本研究选取H5N1亚型流感病毒的HA蛋白作为靶抗原,构建重组杆状病毒BV-G-H5N1-HA。重组病毒本身可刺激机体天然免疫反应,通过基因改造一方面能在真核细胞内大量表达靶抗原,同时可以将靶抗原展示在重组杆状病毒囊膜表面,兼具DNA疫苗和亚单位疫苗的安全性和有效性。小鼠试验结果表明,BV-G-H5N1-HA免疫组能产生较高水平的中和抗体、HI抗体,BV-G-H5N1-HA免疫组攻毒保护率达91.7%。以上数据表明,BV-G-H5N1-HA可以作为一种新型候选疫苗,为H5N1亚型高致病性禽流感的防控贡献力量,为其他亚型疫苗的研究提供参考。 相似文献
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《中国动物传染病学报》2019,(1)
目前,我国现有的商品化灭活苗无法完全保护免疫鸡免受H9N2亚型禽流感病毒流行株的感染。病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗的免疫效果及其安全性优于灭活苗,成为近年研究的热点。本研究旨在建立一种H9N2亚型流感病毒VLP疫苗制备的方法。将优化的H9N2亚型禽流感病毒的HA、NA基因和未优化的HA、NA基因分别插入到pFastBack~(TM)Dual载体中,得到相应的重组供体。然后将这些重组供体转化至含Bacmid的DH10Bac感受态细胞中,获得含有目的基因的重组杆粒。将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,红细胞凝集试验、SDS-PAGE和Western blot结果显示,优化的HA、NA基因编码的蛋白在Sf9昆虫细胞中获得了成功表达。通过透射电子显微镜观察细胞上清的浓缩液,能检测到VLP。结果表明,本研究在Sf9昆虫表达系统中成功表达了H9N2亚型禽流感病毒的HA和NA蛋白,并形成了VLP,为进一步研究该病毒VLP疫苗奠定了基础。 相似文献
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《中国动物传染病学报》2016,(6)
猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCo V)是一种新发现的肠道冠状病毒,可引起仔猪的腹泻。冠状病毒编码的非结构蛋白Nsp5是一种3C样蛋白酶,在病毒多聚前体蛋白加工以及免疫调节中发挥重要作用。本研究以PDCo V CHN-HN-2014株为模板,通过RT-PCR扩增Nsp5基因并将其克隆到原核表达载体p ET-28a(+)中,构建了重组表达质粒。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后SDS-PAGE检测,结果表明Nsp5可在大肠杆菌中高效、可溶性表达。采用镍亲和层析对表达的Nsp5蛋白进行纯化,并通过荧光共振能量转移方法检测了其蛋白酶活性,结果表明纯化的Nsp5蛋白能够有效切割含有PDCo V Nsp5氨基端自切割位点的十二肽底物,证实体外表达的Nsp5重组蛋白具有良好的蛋白酶切割活性。猪δ冠状病毒Nsp5蛋白的克隆、表达及其蛋白酶活性检测,为深入研究该蛋白的功能奠定了基础。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2015,(2)
为研究和比较牛病毒性腹泻病毒(BVDV)囊膜蛋白E0和E2基因作为核酸疫苗候选基因的免疫效果,本实验构建了真核重组表达质粒p VAX1-E0和p VAX1-E2,并转染至293T细胞中,通过RT-PCR和western blot方法检测目的基因在293T细胞中的转录和表达情况。同时将重组质粒联合基因佐剂p VAX1-IL-2免疫小鼠,ELISA检测其中和抗体,结果表明,p VAX1-E0免疫组能够有效的诱导特异性血清抗体的产生,而p VAX1-E2免疫组效果不明显。MTT检测显示两组均显著促进了特异性淋巴细胞的增殖,并且p VAX1-E2组效果优于p VAX1-E0组。由此表明,p VAX1-E0可以诱导较好的体液免疫,而p VAX1-E2在细胞免疫方面效果较好。 相似文献
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根据GenBank中报道的猪抑制素基因序列设计两对引物，克隆含有抑制素抗原决定簇基因片段α（1～32）的p1INH和p2INH，在这两个片段中都设有限制性内切酶XbaⅠ的酶切位点，通过XbaⅠ把plINH与p2INH串联起来。串联抑制素基因片段与pcDNA3．1载体通过EcoRⅠ、HindⅢ酶切位点连接后经过转化DH5a感受态细菌构建重组载体。以重组载体作为模板，以含有EcoRⅠ、HindⅢ酶切位点的引物进行PCR，产物经验证为含串联的抑制素基因。串联的抑制素基因产生的融合蛋白具有抑制素的免疫原性，且不会与体内其他蛋白发生免疫交叉反应。串联后的基因片段在单位体积内的抗原位点数增多，免疫效果也会加强。可以反馈性地抑制FSH的分泌，提高母畜的排卵数，提高产仔数。 相似文献