维氏气单胞菌菌影疫苗的构建及其溶菌动力学研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

徐展  孟庆峰  王伟利  钱爱东  刘琪  崔洁 《中国预防兽医学报》2014,36(12)

细菌菌影(Bacterial ghosts)是通过诱导PhiX 174噬菌体中裂解基因E在革兰氏阴性菌中的表达所获得的无细胞内容物的空细菌体.它保持了与活菌相同的膜蛋白成分、天然结构、细胞表面抗原等特性,是一种新型的死菌疫苗.为优化维氏气单胞菌(A.veronii)菌影制备条件,本实验将带有庆大抗性的裂解基因E转入A.veroniiATCC35624株中,通过温度变化对其进行溶菌动力学试验,每隔30 min对菌液OD600nm及其活菌数进行测定,当OD600nm稳定不再下降时,通过扫描电镜观察裂解后菌体的形态变化.结果显示,在诱导30 min后OD600nm值开始持续下降,当其下降到最低值时,活菌检测结果表明几乎无活菌存在.本研究利用菌影形成机制构建A.veronii菌影,为新型疫苗的制备提供依据.  相似文献   

菌影的制备方法及应用     

张玉敏  张金玲  刘文华 《动物医学进展》2014,(11)

菌影是细菌在物理、化学或生物的因素作用下,其核酸等内含物流失而形成的细菌空壳。论文介绍了目前菌影的不同形成机制和制备方法———基因灭活、抗菌肽穿孔细胞膜、化合物处理等方法,并通过分析不同制备方法的菌体裂解率,总结高效制备菌影的方法,为大规模生产安全有效的菌影及其作为疫苗、外源抗原载体的应用提供参考。  相似文献   

牛致病性大肠杆菌菌影的制备     

《现代畜牧兽医》2016,(8)

制备牛源大肠杆菌菌影,为其作为疫苗及载体奠定基础。将裂解质粒PHH43-E电转入牛大肠杆菌中,并通过温度的改变诱导细菌裂解,即其在37℃条件下生长到对数生长期,然后进行42℃升温诱导。经温控诱导裂解质粒表达后可将细胞壁裂解,形成细菌空壳,成功制备了菌影。  相似文献   

副猪嗜血杆菌菌影的制备   总被引：2，自引：1，他引：1  

胡明明  常月红  张艳禾  司薇  谢芳  于申业  刘慧芳  刘思国  沈楠  王春来 《中国预防兽医学报》2011,33(1)

为研制副猪嗜血杆菌(H.parasuis)菌影疫苗,本实验通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将其连接到含有λPL/PR-cI857启动阻遏系统的pBV220载体中,使裂解基因E与λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建重组质粒pBV-E。并将含有E基因的裂解盒插入pMD18-T载体中,构建H.parasuis打孔质粒(pMD-E)。采用电击穿孔法将其转入E.coliβ2155中,利用接合的方式将打孔质粒转入H.parasuis 5型菌株中。将含有打孔质粒的H.parasuis在28℃培养至对数生长期,升温到42℃诱导E基因表达,制备H.parasuis菌影。电镜观察菌影形态完整,内容物全部被释放到胞外。本实验为进一步研究菌影疫苗奠定了基础。  相似文献   

菌影的研究进展及其在猪生产中的应用     

邓奇风  陈颀  刘志强 《中国猪业》2017,(9):54-58

菌影是细菌在外界因素干扰下,其核酸等内含物流失而形成的空壳.菌影具有细菌完整的细胞膜结构,保留了细菌原有的形态、 黏附性和抗原特性,是一种生物安全性高、 诱导机体免疫应答效果好的免疫促进剂.本文就菌影的形成机制与制备、 使用途径及在猪生产中的应用进行综述,以促进菌影在养猪业的推广应用与研究.  相似文献   

致禽肾脏、肠道病变大肠杆菌菌影的制备及其裂解效率的测定     

《中国预防兽医学报》2017,(3)

为制备高裂解效率的致禽肾脏、肠道病变大肠杆菌菌影,本研究通过编码15个柔性氨基酸linker采用融合PCR法将噬菌体中Φ174的裂解蛋白E基因和金黄色葡萄球菌核酸酶A基因(SN)串联(E-15L-SN),插入温控表达质粒pBV220,构建重组温控双裂解表达质粒(pBV-ES),采用PCR扩增其温控双基因裂解表达盒(DLS-ES)插入E.coli-Pasteurella(大肠杆菌和巴氏杆菌)穿梭质粒pBA1100,构建重组温控双基因裂解穿梭质粒pBA1100-DLS-ES。该质粒可以通过温控制备高裂解率的E.coli和Pasteurella两种菌的菌影。本实验将构建的pBA1100-DLS-ES电转化至致禽肾脏、肠道病变E.coli中,28℃集菌,42℃温控诱导裂解蛋白E和核酸酶A表达。OD_(600nm)值及电镜结果表明,双基因裂解率高于单基因,同时收集菌影时间也比单基因裂解短,42℃诱导2 h含双裂解基因的菌液处理菌体裂解率达到99.9999%,本实验利用菌影形成机制将含青霉素抗性的致禽肾脏、肠道病变E.coli制备成菌影,为新型菌影疫苗的制备提供实验依据。  相似文献   

迟缓爱德华菌外膜蛋白TolC原核表达及其免疫原性     

《中国兽医学报》2020,(2):339-344

TolC是革兰阴性细菌一种外膜通道蛋白,参与细菌应对外界不利环境的耐受,沙门菌TolC蛋白作为免疫原对动物沙门菌感染的保护效果优良,具有潜在的应用价值。目前,迟缓爱德华菌(Edwardsiella tarda,E.tarda)该蛋白的研究尚未见有报道,本研究以E.tarda TolC蛋白作为研究对象,原核表达并纯化TolC蛋白,进一步通过动物试验确定该蛋白具有较强的免疫原性,免疫动物对致病性E.tarda ET-13强毒株感染具有较高的抵抗力。结果表明,E.tarda TolC蛋白具有较强的免疫原性和潜在的疫苗价值,为进一步研制E.tarda亚单位疫苗提供理论资料。  相似文献   

粗糙型布鲁菌M111菌壳的制备     

张瑞安  刘军  蒋大伟  夏力亮  孙洋  祝令伟  纪雪  郭学军  冯书章 《兽医大学学报》2014,(1):66-69

将含有裂解酶基因重组温控裂解质粒pBBR1MCS：：PR-PL-E电转化至粗糙型布鲁菌M111中，构建重组布鲁菌M111（pBBRlMCS：：PR-PL-E）。重组菌株在28℃培养，42℃诱导表达裂解酶E，从而制备布鲁菌菌壳。绘制布鲁菌生长曲线及裂解曲线，计算裂解率并用透射电镜观察布鲁菌菌壳的形态。结果显示，成功制备了布鲁菌菌壳，温控裂解质粒pBBRIMCS：：PR-PL-E对布鲁菌的裂解率为100％。透射电镜观察可见细菌内容物部分流出，细菌表面出现不同程度的皱缩，细胞形态发生变化。结果表明，本试验成功制备了粗糙型布鲁菌菌壳，初步研究了其基本特性，为下-步开展布鲁菌菌壳疫苗的研究奠定了基础。  相似文献   

犬布鲁氏菌菌壳疫苗的制备简     

钱晶  尹秋丹  卜昭阳  陈思  王兴龙  王秀然  郎需龙  王晓旭 《中国畜牧兽医》2014,41(1):38-43

菌壳技术是一种新型的灭活疫苗制备方法,通过非变性的灭活方式保存细菌表面多个抗原表位,所制备的菌壳可作为预防细菌病的理想疫苗。本试验从噬菌体PhiX174 DNA钓取裂解E基因,连接至温控原核表达载体pBV220,通过PCR在所构建的pBV220+E上扩增出蛋白裂解部件（protein lysis component,PLC）,该部件包含阻遏蛋白cI857、溶菌E基因及终止序列rrnbT1T2,然后将其克隆至广宿主表达载体pBBR1MCS-2中,最终将构建的广宿主裂解质粒pBBR+PLC电转入犬布鲁氏菌RM6/66中。试验结果表明,经42 ℃诱导后,广宿主裂解质粒对犬布鲁氏菌RM6/66的裂解率达100%,成功制备了犬布鲁氏菌RM6/66菌壳疫苗。本试验通过菌壳技术制备的犬布鲁氏菌疫苗对预防宠物犬布鲁氏菌病起到重要作用,同时也对人兽布鲁氏菌疫苗的研制提供新策略。  相似文献   

布鲁菌分子标记菌壳株的构建与鉴定     

《中国兽医学报》2019,(8):1533-1539

旨在构建一种安全、高效的犬布鲁菌分子标记疫苗株。本试验将温控裂解部件(TLC)插入布鲁菌自杀质粒pBK-CMV-SacB-ΔB0419中,构建温控裂解型自杀质粒pBK-CMV-SacB-ΔB0419-TLC;通过电转化方式转入犬布鲁菌RM6/66感受态中,经卡那抗性和蔗糖培养基的正、负向筛选,将TLC片段定点插入布鲁菌B0419基因中,获得犬布鲁菌分子标记菌壳株。采用PCR法对连续30代次的菌株进行鉴定,结果显示裂解E基因和靶向插入位点区域(B0419基因)并未出现丢失和回复突变现象,表明该菌壳株具有良好的遗传稳定性。该菌壳株在培养至D_(600)值为0.6时,经42℃诱导60 h后,可获得裂解率达100%的犬布鲁菌菌壳;经超薄切片和染色处理后,在透射电镜观察下可见形态完整的空心结构,其内容物明显减少。本试验结合细菌菌壳技术与同源重组技术,成功构建了具有分子标记特征的犬布鲁菌菌壳株,为新型布鲁菌疫苗的研制提供策略。  相似文献