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研究旨在构建弓形虫鸡尾酒DNA疫苗并评价其对小鼠的免疫保护效果。研究将编码弓形虫棒状体蛋白ROP5、ROP9和ROP17的基因分别构建至真核表达载体p VAX1上，获得重组真核表达质粒p VAX1-ROP5、p VAX1-ROP9和p VAX1-ROP17，将上述质粒进行PCR和双酶切验证，并通过Western blot检测重组质粒在真核细胞中表达。将三种重组质粒按1∶1∶1的比例混合后，取100μg通过腿部肌肉注射免疫小鼠，加强免疫后，检测小鼠血清抗体、脾淋巴细胞增殖及细胞因子水平，并接种弓形虫RH强毒株进行攻毒，评价免疫后小鼠的保护效果。真核表达质粒p VAX1-ROP5、p VAX1-ROP9和p VAX1-ROP17经PCR和双酶切验证的结果显示：分别在1 686 bp、1 128 bp和1 836bp处出现特异性目的条带；Western blot检测结果发现，在约为62、41和68 kDa处出现目的条带，分别与预期目的蛋白ROP5、ROP9和ROP17的分子量大小相符。与空载体组和生理盐水组小鼠相比，疫苗免疫组小鼠产生的血清中抗体IgG和淋巴细胞产生的细胞因子IFN-γ和IL... 相似文献
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ROP蛋白是植物特有的一类小G蛋白,在植物信号传导途径中起重要作用.拟南芥共编码11种ROP蛋白,为明确ROP蛋白在拟南芥抗病反应中的作用,将病原细菌Pseudomonas syringaepv.tomatoDC3000接种于各AtROP的激活和失活突变体后,观察其增殖情况.结果表明,AtROP2和AtROP11抑制病原菌的增殖,而AtROP10则促进病原菌的增殖,其他At-ROP对Pst.DC3000的增殖没有影响. 相似文献
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【目的】克隆弓形虫（Toxoplasma gondii）RH虫株速殖子的棒状体蛋白15(ROP15)基因,原核表达、纯化重组蛋白,并制备多克隆抗体。【方法】根据GenBank登录的弓形虫RH株ROP15(DQ096561.1)基因序列设计了1对引物,以提取的弓形虫RH虫株速殖子RNA为模板,通过RT-PCR获得该虫株的ROP15基因,将该基因连接至原核表达载体pGEX-4T-1上,获得重组质粒pGEX-4T-ROP15,测序结果与预期结果一致;转化BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导获得重组融合蛋白,运用亲和层析法纯化可溶性ROP15重组蛋白,SDS-PAGE对表达和纯化的目的蛋白进行分析。用纯化的ROP15重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,运用Western blot分析特异性。【结果】成功克隆了弓形虫RH虫株速殖子ROP15基因,大小为924 bp;菌液PCR和酶切鉴定表明重组质粒pGEX-4T-ROP15构建成功,获得了约59 ku的可溶性融合蛋白表达产物;以纯化的可溶性ROP15重组表达蛋白为抗原制备兔源性抗血清,Western blot显示该多克隆抗体与ROP... 相似文献
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应用PCR法从弓形虫QHO株速殖子基因组DNA中扩增ROP2的基因片断,连接到pMD18-T载体中,转化大肠杆菌JM109,经酶切及PCR鉴定后进行测序,并进行序列分析.结果表明,自然弱毒株的开放阅读框架(ORF)与ROP2基因已知序列(Z36906)的ORF具有97%的同源性,氨基酸序列具有95%的同源性. 相似文献
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为研究ROP(Rho-related GTPase of plants,ROP)在豆科植物共生固氮过程中的功能和作用机制,从百脉根逆转录转座子LORE1插入突变体库(http://www.kazusa.or.jp/lotus)中搜索到6个ROP相关基因突变体,通过分离和鉴定,得到不同突变体的M1代和M2代纯合体种子,对M2代进行表型鉴定及统计分析。结果表明:在早期共生表型的鉴定中,突变体与野生型植株相比,rop-like1植株的根瘤原基数明显下降,rop-like4植株的侵入线数和侵入线密度也明显下降;但仅rop-like1植株在接种14d后的结瘤数明显减少。 相似文献
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为探究棉花ROP基因在非生物逆境胁迫及外源激素处理下的表达模式,利用同源克隆的方法获得2个陆地棉(Gossypium hirsutum L.)ROP基因GhROP1和GhROP8,通过生物信息学方法分析其理化性质、结构及进化关系,并利用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术对其组织表达的特异性及不同逆境胁迫和外源激素处理下的表达模式进行分析。结果表明：1)GhROP1和GhROP8基因的开放阅读框(ORF)分别为591和630 bp,各编码197和210个氨基酸,均含有1个保守的RHO结构域。2)多序列比对显示2个GhROPs蛋白均符合ROP蛋白结构特征且与其他物种ROP蛋白具有高度的相似性,聚类分析表明,GhROP1蛋白属于Ⅰ类ROP蛋白,GhROP8蛋白属于Ⅱ类。3)2个GhROPs基因在不同组织中均有表达且存在组织特异性：GhROP1基因在真叶中表达量最高,在根部和茎部表达量较低;GhROP8基因在根部表达量最高,其他组织中均为低表达量。2个GhROPs基因对于干旱、高盐、低温及高温等非生物逆境胁迫和外源脱落酸(ABA)、生长素(IAA)的处理均有响应：2个GhROPs基因表达均受... 相似文献
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目的：对早产儿视网膜病变（retinopathy of prematurity．ROP）进行筛查分析。以了解早产儿视网膜病变的发病状况。方法：2004年12月～2005年12月在出生的早产儿45例．在生后4～6周或矫正胎龄32周开始定期眼底检查至周边视网膜血管化。结果：45例早产儿发生ROP6例．占13．3％．其中达到或超过闻值前病变者3例（6．7％）；早产儿出生体质量在1200～1500g者．ROP发病率为20．0％（1／5）。出生体质量在1501～2500g者。ROP发病率为12．5％（5／40）；孕周在28～31^＋6、32～33^＋6和34周者．ROP发病率分别为50％（3／6）、9．1％（2／22）和5．9％（1／17）。结论：出生体质量轻、胎龄小为早产儿发生ROP的重要危险因素；尽早进行眼底筛查是早期发现、诊断及治疗ROP的关键。 相似文献
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ROP是植物特有的一类Rho相关GTPases,在植物体内通过GTP结合形式与GDP结合形式的切换而对生长发育和适应环境起调节作用.由GTP结合形式向GDP结合形式的转换主要依赖于鸟苷酸交换因子(guanine nucleotide exchangefactor,GEF).本文以锁定于GDP结合形式的辣椒DN-CaROP1突变体为诱饵,采用ProQuestTM酵母双杂交体系,从辣椒幼苗cDNA文库中分离了辣椒GEF阳性克隆,其推导的氨基酸序列与其他植物中发现的GEF具有较高的同源性,并含典型的植物ROPGEF保守域DUF315及N端与C端的高度变化域,将之命名为CaROPGEF1;RT-PCR分析表明,CaROPGEF1在辣椒多种组织中均有表达;进一步酵母双杂交分析表明,CaROPGEF1可与GDP结合态的ROP结合,而不能与GTP结合态的ROP结合.上述结果暗示CaROPGEF1调节的ROP从DN态向CA态的转化在辣椒植株中频繁发生,可能参与辣椒ROP介导的生长、发育和对环境适应的调控. 相似文献
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A secreted serine-threonine kinase determines virulence in the eukaryotic pathogen Toxoplasma gondii
Taylor S Barragan A Su C Fux B Fentress SJ Tang K Beatty WL Hajj HE Jerome M Behnke MS White M Wootton JC Sibley LD 《Science (New York, N.Y.)》2006,314(5806):1776-1780
Toxoplasma gondii strains differ dramatically in virulence despite being genetically very similar. Genetic mapping revealed two closely adjacent quantitative trait loci on parasite chromosome VIIa that control the extreme virulence of the type I lineage. Positional cloning identified the candidate virulence gene ROP18, a highly polymorphic serine-threonine kinase that was secreted into the host cell during parasite invasion. Transfection of the virulent ROP18 allele into a nonpathogenic type III strain increased growth and enhanced mortality by 4 to 5 logs. These attributes of ROP18 required kinase activity, which revealed that secretion of effectors is a major component of parasite virulence. 相似文献
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Saeij JP Boyle JP Coller S Taylor S Sibley LD Brooke-Powell ET Ajioka JW Boothroyd JC 《Science (New York, N.Y.)》2006,314(5806):1780-1783
The majority of known Toxoplasma gondii isolates from Europe and North America belong to three clonal lines that differ dramatically in their virulence, depending on the host. To identify the responsible genes, we mapped virulence in F(1) progeny derived from crosses between type II and type III strains, which we introduced into mice. Five virulence (VIR) loci were thus identified, and for two of these, genetic complementation showed that a predicted protein kinase (ROP18 and ROP16, respectively) is the key molecule. Both are hypervariable rhoptry proteins that are secreted into the host cell upon invasion. These results suggest that secreted kinases unique to the Apicomplexa are crucial in the host-pathogen interaction. 相似文献
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【目的】对蒺藜苜蓿ROP进行克隆与表达分析,为深入研究ROP在共生互作过程中的功能提供理论依据。【方法】通过比较基因组学和RT-PCR方法克隆了蒺藜苜蓿的MtROP5,采用半定量RT-PCR方法检测了MtROP5在蒺藜苜蓿不同组织中的表达水平,采用荧光实时定量PCR方法检测了MtROP5在根瘤菌侵染宿主植物根系后72h内不同时间阶段的表达水平。【结果】从蒺藜苜蓿中克隆了含有MtROP5完整编码区的cDNA序列,长度826bp,编码197个氨基酸。序列分析表明,MtROP5编码的蛋白具有典型的ROP蛋白特征结构域,与其它几种植物中ROP蛋白具有高度的同源性和相似性。半定量RT-PCR分析表明,MtROP5在蒺藜苜蓿的根、茎、叶、花、根瘤中均有表达,茎和花中表达量最高,根和根瘤中次之,在叶中表达最弱。荧光实时定量PCR分析表明,与未接种根瘤菌的对照处理相比较,MtROP5在根瘤菌侵染的72h内不同时间阶段的根系中都增强表达。【结论】克隆的cDNA序列是一个蒺藜苜蓿小G蛋白ROP,推测MtROP5可能在共生互作的早期信号传导过程中行使一定的调控作用。 相似文献
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所有RhoG TPase组成一个特殊的亚家族,命名为ROP GTPase,这个家族参与并调控肌动蛋白细胞骨架的重组等一系列信号转导过程。小麦ROP GTPase的高效纯化技术和手段是对其功能和性质等进行研究的重要基础和关键,并且这对小麦ROP GTPase关于信号转导以及F-actin的研究有着极为重要的理论和实践意义。采用凝胶过滤层析和分辨率较高的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native-PAGE）等技术对小麦的ROP蛋白进行了提取、纯化和鉴定。 相似文献
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鸡柔嫩艾美耳球虫田间分离株对抗球虫药物的敏感性试验 总被引：1，自引：0，他引：1
分别从辽宁省沈阳市新立堡和新民地区肉鸡场分离到2株柔嫩艾美耳球虫(Eimena tenella).经雏鸡增殖后.选用地克珠利、马度霉素、三宝盐霉素和三宝球精对虫株进行药物敏感性试验,并以抗球虫指数、最适抗球虫活性百分率、病变记分减少率、相对卵囊产量为试验指标进行综合评定.结果表明,柔嫩艾美耳球虫新立堡株除对三宝球精中度敏感之外,对其他3种药物均不敏感.而新民株则对三宝球精中度敏感.对地克珠利轻度敏感,而对其他的2种药物均不敏感. 相似文献
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柔嫩艾美耳球虫野外分离株对4种抗球虫药的耐药性检测 总被引：1，自引：0，他引：1
该试验采集安庆、肥东及巢湖3个地区的3株盲肠球虫,进行柔嫩艾美耳球虫(E.tellena)单卵囊的分离,采用鸡体实验法对癸氧喹酯、尼卡巴嗪、球痢灵和磺胺氯吡嗪钠进行耐药性检测,以抗球虫指数(ACI)、病变记分减少率(RLS)、相对盲肠卵囊产量(ROP)和最适抗球虫活性百分率(POAA)4项指标综合判定.结果表明,安庆株、肥东株及巢湖株均对癸氧喹酯敏感,对尼卡巴嗪均完全产生耐药;安庆株对球痢灵中度耐药,对磺胺氯吡嗪钠重度耐药;肥东株对球痢灵轻度耐药,对磺胺氯吡嗪钠重度耐药;巢湖株对球痢灵重度耐药,对磺胺氯吡嗪钠完全耐药. 相似文献
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所有RhoGTPase组成一个特殊的亚家族,命名为ROP GTPase,这个家族参与并调控肌动蛋白细胞骨架的重组等一系列信号转导过程。小麦ROPGTPase的高效纯化技术和手段是对其功能和性质等进行研究的重要基础和关键,并且这对小麦ROP GTPase关于信号转导以及F-actin的研究有着极为重要的理论和实践意义。采用凝胶过滤层析和分辨率较高的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)等技术对小麦的ROP蛋白进行了提取、纯化和鉴定。在小麦幼叶ROPGTPase的提取中,初期蛋白质样品使用硫酸铵进行盐析脱盐并去除杂质,在提高目的蛋白纯度的同时也去除了一部分非目的蛋白,缩小了蛋白质的分子量范围。获得的蛋白样品提取液加入SephadexG25进行浓缩,浓缩后的蛋白使用紫外分光光度计进行纯度鉴定,测得蛋白质的纯度比较高,经凝胶过滤层析洗脱后利用SDS-PAGE电泳进行纯度鉴定,得到了较为清晰的电泳图谱,目的蛋白质的含量有所提高,并且可有效去除其他杂蛋白的干扰,为进一步对小麦ROP蛋白功能和性质的研究提供了一定的理论和试验基础。 相似文献
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柔嫩艾美耳球虫甘肃株抗药性的试验研究 总被引：1，自引：0，他引：1
用柔嫩艾美耳球虫甘肃株(E.tenella G S,E t G S)对15日龄雏鸡进行感染,以最适抗球虫活性百分率、抗球虫指数、相对卵囊产量和病变记分减少率为指标,进行综合评定,研究了该虫株对三九球痢灵、地克珠利、氯苯胍和地克珠利氯苯胍合剂等几种常用抗球虫药的敏感性。结果表明,该虫株对三九球痢灵有中度抗药性,对地克珠利和地克珠利氯苯胍合剂有轻度抗药性,对氯苯胍无抗药性。 相似文献