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1.
马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原Ⅰ型特异性和群共同性决定簇的单克隆抗体 总被引：3，自引：1，他引：2
用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体。以Ⅰ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的２株单克隆抗体细胞株，定名为ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ＭＤＶ均呈阳性反应；单抗ＢＡ４只对Ⅰ型ＭＤＶ（包括ＣＶＩ９８８疫苗株）呈阳性反应。免疫沉淀反应进一步确证２株单抗识别的是ＭＤＶ糖蛋白Ｂ抗原。 相似文献
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抗牛病毒性腹泻／粘膜病病毒单克隆抗体的抗原结合位点分析 总被引：5，自引：0，他引：5
用ＥＬＩＳＡ测定了８株抗牛病毒性腹泻／粘膜病病毒（ＢＶＤ／ＭＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的抗原结合位点，通过ＥＬＩＳＡ相加试验证实，８株单克隆抗体识别的抗原位点大多数比较接近，其中５Ａ５与５Ｃ２，５Ａ９与５Ｆ１１，以及５Ｄ７、５Ｃ９、２Ｇ３、４Ｅ６四株所识别的抗原位点相同或非常接近。 相似文献
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用ＥＬＩＳＡ测定了８株抗牛病毒性腹泻／粘膜病病毒（ＢＶＤ／ＭＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的抗原结合位点，通过ＥＬＩＳＡ相加试验证实，８株单克隆抗体识别的抗原位点大多数比较接近，其中５Ａ５与５Ｃ２，５Ａ９与５Ｆ１１，以及５Ｄ７、５Ｃ９、２Ｇ３、４Ｅ６四株所识别的抗原位点相同或非常接近。 相似文献
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采用四种方法：即①单克隆抗体检测抗原的酶联免疫吸附试验（Ａｇ－ＥＬＩＳＡ）②检测抗体的酶联免疫吸附试验（Ａｂ－ＥＵＳＡ）③表膜检查（ＢＣＥ）④小白鼠接种（ＭＩ），检查了肯尼亚１８３头骆驼锥虫的循环抗原，ＢＣＥ查出３７头阳性２０％），ＭＩ６０头阳性（３３％），Ａｇ－ＥＬＩＳＡ６３头阳性（３４％），Ａｂ－ＥＬＩＳＡ检出９０头阳性（４９％）。其中ＢＣＥ未能检出的２４头中，Ａｇ－ＥＬＩＳＡ检出１８头（７５％）。所有阳性头数中，Ａｇ－ＥＬＩＳＡ检出９３％，Ａｂ－ＥＬＩＳＡ９５％。根据５５头的结果，阳性与阴性之间Ａｇ－ＥＬＩＳＡＯＤ值差异极显著（Ｐ＜０．０００１），Ａｂ－ＥＬＩＳＡＯＤ值差异不显著。因此，用Ａｇ－ＥＬＩＳＡ或结合ＢＣＥ诊断伊氏锥虫感染比用ＡＢ－ＥＬＩＳＡ更理想。 相似文献
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马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原I型特异性和群共同性决定簇的… 总被引：5，自引：0，他引：5
用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体，以Ｉ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的１株单克隆抗体细胞株，定义名ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ｉ，ⅡⅢ型ＭＤＶ均呈阳 相似文献
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用单克隆抗体（ＭＡｂ）作酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、免疫荧光试验（ＩＦＡ）、病毒中和（ＶＮ）试验及兔疫沉淀试验证明了牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）致细胞病变株８７－２５５２（现地分离）与ＮＡＤＬ和Ｓｉｎｇｅｒ（原型株）之间的抗原差异。两个抗ＢＶＤＶ８７－２５５２株的ＭＡｂ（Ｄ１１和Ｂ７）能强烈中和现地分离株，并对该病毒的４８－ＫＤａ糖蛋白呈特异性。这两个ＭＡｂ有不同的亚型，Ｄ１１为免疫球蛋白Ｇ１ 相似文献
7.
李国清 《国外兽医学(畜禽疾病)》1994,15(1):40-43
采用四种方法：即①单克隆抗体检抗原的酶联免疫吸附试验（Ａｇ－ＥＬＩＳＡ）②检测抗体的在酶联免疫吸附试验（Ａｂ－ＥＬＩＳＡ）③表膜检查（ＢＣＥ）④小白鼠接种（ＭＩ），检查了肯尼亚１８３头骆驼锥虫的循环抗原，ＢＣＥ查出尼亚１８３头骆驼锥早的循环抗原，ＢＣＥ查出３７头阳性２０％），ＭＩ６０头阳性（３３％），Ａｇ－ＥＬＩＳＡ６３头阳性（４９％），Ａｂ－ＥＬＩＳＡ检出出的２４头中，Ａｇ－ＥＬＩＳＡ检出１８头 相似文献
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用ELISA和PCR对猪,牛血清中HBV抗原,抗体及DNA的检测 总被引：4，自引：0，他引：4
用三个家生产的乙型肝炎（ＨＢ）ＥＬＩＳＡ试剂盒及聚合酶反应（ＰＣＲ）对牛、猪和羊血清分别进行了乙型肝炎病毒抗原（ＨＢＶ－Ａｇ）、抗体（Ａｎｔｉ－ＨＢＶ－Ａｂ）及ＤＮＡ的检测。ＥＬＩＳＡ共检出阳性牛血清１３份（１３／１３６），其中ＨＢ４Ａｇ阳性８份，ＨＢｅＡｇ阳性５份；阳性猪血清４份（４／３６），其中有ＨＢｅＡｇ阳性３份，ＨＢｅＡｇ阳性１份。全部阳性血清和部分阴性血清共１２０份经用ＰＣＲ检测ＨＢＶＤ 相似文献
9.
本试验用差束离心和非线性蔗糖密度梯度离心法从感染雏鸡血浆中分离和提纯了禽成髓细胞性白血病病毒（ＡＭＶ）。并以ＳＤＳ法裂解病毒，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析ＡＭＶ结构蛋白成分，最后选用（ＬＫＢ）水平板式电泳系统，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ比较大量地分离提纯了Ｐｇａｇ２７。用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和琼脂扩散试验检验其抗原活性，并且用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量和纯度。结果表明，提纯的病毒蛋白具有抗原活性，且达到电泳纯。 相似文献
10.
用几种电泳方法分析牦牛肝片吸虫不同部位抗原 总被引：1，自引：0，他引：1
应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等电聚焦电泳（ＩＥＦ）及双向电泳三种电泳方法分析牦牛肝片吸虫成虫四种抗原（头抗原－ＨＡ、体抗原－ＢＡ、体表抗原ＳＡ、分泌排泄抗原－ＥＳ）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ分子量在１２～１００ｋＤ之间，ＥＳ在１２．３～２６ｋＤ之间，蛋白质染色ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ、ＥＳ分别显示２５、２４、１８、９条带；ＩＥＦ分析肝片吸虫分别得３４、３３、２８、２２条带，主要由酸性蛋白质组成，主要谱带在ｐＩ４．２０～６．５５内；双向电泳分析ＢＡ、ＥＳ多肽斑点为６９、３０个 相似文献
11.
马立克氏病病毒（MDV）糖蛋白D基因的分离克隆,定序及其在大肠杆… 总被引：1，自引：0，他引：1
用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术，从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）基因组ＤＮＡ中扩增出ＭＤＶ糖蛋白（ｇＤ）抗原基因１２０９ｂｐ编码序列。将该ＰＣＲ扩增产物于ＥｃｏＲＩ和ＫｐｎⅠ位点克隆进行ｐＵＣ１８质粒载体中。将ｇＤ重组ｐＵＣ１８质粒ＤＮＡ用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（Ｄｉｇ）标记后，在Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ中，该探针能识别ＭＤＶ基因组ＤＮＡ的Ｂａｍ ＨＩ－Ａ克隆中的Ａ 相似文献
12.
腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒变异株的比较研究 总被引：6，自引：2，他引：4
腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）变异株Ｈ９５提纯样品经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ,证明Ｈ９５株单抗ＤＥ７和Ｍ４１株单抗６ＤＨ８均能识别Ｈ９５株５４０００蛋白多肽。采用单抗、多抗介导间接ＥＬＩＳＡ试验表明,Ｈ９５毒株能与抗ＩＢＶＭ４１Ｎ蛋白单抗６ＤＨ８和ＩＢＶＭ蛋白单抗ＭＣ发生反应,也能与抗Ｍ４１、Ｇｒａｙ、Ｈｏｌｔｅ、Ｔ、Ｈ５２、Ｎ１１５和分离株Ｃ９００１、ＤＬＺ９１１１的多抗血清反应,同时抗Ｈ９５株的４株单抗、多抗血清也能与上述毒株反应。卵磷脂酶Ｃ处理的Ｈ９５株的血凝活性能被相应的Ｈ９５株的单克隆抗体和高免血清所抑制,也能被Ｍ４１单抗和高免血清所抑制。通过ＲＴ－ＰＣＲ获得了Ｈ９５毒株的免疫原基因Ｓ１,经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ和ＩＢＶ的Ｓ探针检测呈阳性。 相似文献
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非洲猪瘟间接ELISA诊断试剂盒的研究 总被引：12，自引：6，他引：6
用带有编码非洲猪瘟病毒衣壳蛋白Ｐ７２ 基因的重组杆状病毒（Ｂａｃｐ７２）作载体,在ｓｆ９细胞中表达并得到重组Ｐ７２蛋白,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ可得到分子量在 ７２ｋＤａ左右的电泳带。用标准阳性非洲猪瘟血清对 Ｐ７２蛋白进行 ＥＬＩＳＡ检测,证明该蛋白具有生物学活性。用Ｐ７２作为间接法的包被抗原,对ＥＬＩＳＡ反应条件进行了优化。确定最佳包被液为ＰＢＳ（ｐＨ７．２）、最佳封闭液为１％ＰＣＴ、最佳血清稀释液为４％ＰＥＧ６０００／ＰＢＳ、最佳冲洗液为０．５Ｍ ＮａＣｌ／０．５％Ｔｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳ（ｐＨ７．２）。本实验反应体系采用５０μｌ的微量法,可节约试剂及抗原。反应在２小时内即可完成,达到了快速诊断的目的。包被了抗原并用封闭液封闭后的酶标板密封后保存于－２０℃的冰箱中,至少可以保存５个月。阻断试验和交叉试验表明ＥＬＩＳＡ法有良好的特异性。间接ＥＬＩＳＡ比Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法具有更高的灵敏性。血清学调查没有得到阳性结果,与我国实际情况相符。用Ｂａｃｐ７２表达的非洲猪瘟病毒Ｐ７２蛋白抗原作为间接ＥＬＩＳＡ的检测抗原来检测非洲猪瘟血清具有快速、简单、无感染的特点。本实验为非洲猪瘟ＥＬＩＳＡ检测试剂盒的最终组装提供了实验依据。 相似文献
14.
荒漠猫血液蛋白质和酶多态性的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对５只荒漠猫（Ｆｅｌｉｓｂｉｅｔｉ）血液中的血红蛋白（ＨＢ），运铁蛋白（ＴＦ），亲血色蛋白（Ｈｐ）以及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ），淀粉酶（ＡＭＹ），酯酶（ＥＳ）和碱性磷酸酶（ＡＬＰ）的多态性进行了研究。结果发现，被检荒漠猫的ＴＦ，Ｈｐ，ＲＢＣ－ＬＤＨ，Ｓ－ＥＳ和Ｓ－ＡＬＰ共５个基因座存在多态性，ＨＢ，ＲＢＣ－ＡＭＹ，Ｓ－ＡＭＹ，Ｓ－ＬＤＨ，ＲＢＣ－ＥＳ和ＲＢＣ－ＡＬＰ共６个基因座为单态，表明荒漠猫的血液蛋白质和酶具有颇大的遗传变异性 相似文献
15.
禽白血病／肉瘤病毒群特异性抗原P^gag27的分离和纯化 总被引：2，自引：0，他引：2
本试验用差速离心和非线性蔗糖密度梯度离心法从感染雏鸡血浆中分离和提纯了禽成髓细胞性白血病病毒，并以ＳＤＳ法裂解病毒，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析ＡＭＶ结构蛋白成分，最后选用水平板式电泳系统，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ比较大量地分离了Ｐ＾ｇａｇ２７。用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和琼脂扩散试验检验其抗原活性，并且用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量和纯度，结果表明，提纯的病毒蛋白具有抗原活性，且达到电泳纯。 相似文献
16.
作者建立了两种抗原捕捉酶联免疫吸附试验方法（多抗和单抗ＡＣ－ＥＬＩＳＡ），用于滴定用不同宿主系统增殖的传染性氏囊毒病，这些宿主系统包括ＢＧＭ－７０传代细胞系。鸡胚成纤维细胞和鸡法氏囊，两种检测方法都有较高的特异性，但是多克隆ＡＣ－ＥＬＩＳＡ比单克ＡＣ－ＥＬＩＳＡ更加敏感（Ｐ〈０．０５），结果还表明，滴定ＩＢＤＶ抗原的常规方法（细胞培养物和鸡胚）比多抗ＡＣ－ＥＬＩＳＡ更敏感。 相似文献
17.
用从当地分离鉴定的山羊Ｂ组轮状病毒ＫＢ－６３毒株，在剥夺初乳的山羊羔体内传代繁殖病毒，制备抗原，建立了酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）及生物素－亲和素系统酶联免疫吸附试验（ＢＡＢ－ＥＬＩＳＡ）。这三种方法经阻断试验、重复性试验以及交叉试验表明，其特异性、重复性好。以双盲法将此三种方法与对流免疫电泳法（ＣＩＥ）和聚丙烯酰胺凝胶电泳法（ＰＡＧＥ）作了对比研究， 相似文献
18.
旋毛虫肌幼虫可溶性抗原,排汇分泌抗原的电泳分析 总被引：2，自引：0，他引：2
枉文报道了应用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦（ＩＥＦ）电泳及二维电泳（ＩＥＦ／ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）对旋毛虫肌幼虫排汇分泌（ＥＳ）抗原和肌幼虫可溶性抗原的分析结果。肌幼虫ＥＳ抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后用考马斯亮蓝染色蛋白质，结果显示１６条蛋白带，分子量范围２１￣８０ＫＤ，其中主带９条。ＩＥＦ电泳后分别用ＰＡＳ染多糖、考马斯亮蓝Ｒ－２５０染蛋白质、Ｎｉｌｅ＇ 相似文献
19.
有丝分裂原对离体boPBMC增殖和分泌Ig的作用 总被引：2，自引：1，他引：1
应用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，ＥＬＩＳＡ和ＦＡＣＳ研究了离体奶牛外周血单核细胞（ｂｐＰＢＭＣ）对有丝分裂原的免疫应答。ＰＷＭ和ＣｏｎＡ能不同程度地诱导ｂｏＰＢＭＣ增殖和分泌Ｉｇ；而ＳＥＢ只能使ｂｏＰＢＭＣ高度增殖而不分泌Ｉｇ（Ｐ〉０．０５）。ＰＷＭ诱导的ｂｏＰＢＭＣ经１２ｄ培养，其中ＣＤ４＋／ＣＤ８＋细胞的比率为２．９：１；而ＳＥＢ诱导的细胞为０．３：１。离体ｂｏＰＢＭＣ主要分泌ＩｇＭ和ＩｇＧ１，只有 相似文献
20.
ELISAA法检测犬腹泻粪样中的犬冠状病毒 总被引：6，自引：0，他引：6
用ＦＥ细胞增殖犬冠状病毒（ＣＣＶ）参考株，分别免疫家兔和ＢＡＬＢ／ｃ小鼠制备ＣＣＶ多抗和单抗，建立了夹心ＥＬＩＳＡ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ诊断方法。在检测的８４例犬腹泻粪样中，多抗、单抗夹心法显示ＣＣＶ阳性１６例，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ阳性１３便，后１３例包括在前１６例中，从８４例腹泻犬粪样中随机取３例作ＣＣＶ、犬细小病毒（ＣＰＶ）双项检测，ＣＣＶ阳性１６例，ＣＰＶ阳性６例，ＣＣＶ、ＣＰＶ混合感染４例。结 相似文献