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《畜牧与兽医》2014,(10):74-77
制备鸡刺鼠相关蛋白(agouti-related protein,AgRP)多肽抗体并鉴定。根据GenBank中报道的AgRP一级结构信息,用TMHMM 2.0和DNA Star软件分析其蛋白跨膜结构域、二级结构、疏水性、亲水性等,设计出1段13个氨基酸的多肽。将合成后的多肽与牛血清白蛋白(BSA)偶联,用与BSA偶联的AgRP多肽免疫新西兰大白兔,获取血清后亲和纯化出抗AgRP多肽抗体。通过ELISA法检测效价,Western blot和免疫组化法检测抗体特异性。结果获得了高效价的鸡AgRP多肽抗体,ELISA法测定其效价可达到1∶128 000,并可用于免疫组化研究。 相似文献
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雌二醇多克隆抗体的制备与鉴定 总被引：4，自引：0，他引：4
制备雌二醇完全抗原,并通过免疫家兔得到多克隆抗体,为下一步制备雌二醇单克隆抗体和雌二醇检测ELISA试剂盒奠定基础。试验以牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)为载体,采用碳化二亚胺法,合成了雌二醇(E2)的2种免疫偶合物:免疫原E2-BSA和包被原E2-OVA;通过紫外光谱定性证明偶合物偶联成功与否,并对偶合物的蛋白含量、结合比进行测定并以免疫原E2-BSA免疫家兔,制备多克隆抗体,用包被原E2-OVA进行ELISA,对多克隆抗体特异性及效价进行检测。结果表明成功合成了雌二醇人工抗原即免疫原E2-BSA和包被原E2-OVA,二者的蛋白浓度分别为5.455和7.533mg/mL,结合比分别为7:1和8:1;制备的多克隆抗体特异性好,血清效价为1:106。 相似文献
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三聚氰胺抗原合成及其多克隆抗体的制备 总被引：1，自引：0，他引：1
以2-氯-4,6-二氨基-1,3,5-三嗪为原料,强碱条件下与3-巯基丙酸反应,制备三聚氰胺半抗原并经质谱和红外鉴定;应用碳二亚胺法将半抗原与BSA和OVA偶联制备三聚氰胺免疫原和包被原,完全抗原经紫外扫描鉴定偶联成功,偶联比分别为16:1和10:1,通过免疫新西兰大白兔成功制备三聚氰胺多克隆抗体,抗体效价可达1:128000以上。本研究为三聚氰胺人工抗原的制备提供了有效途径,为三聚氰胺免疫检测方法的研发奠定了基础。 相似文献
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为了合成恩诺沙星（enrofloxacin,EFLX）完全抗原,制备兔源多克隆抗体血清,试验通过活化酯法将小分子的EFLX偶联到牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白(OVA)上,形成偶联物EFLX-BSA和EFLX-OVA,以EFLX-BSA为免疫原免疫兔,以EFLX-OVA为检测原通过ELISA方法检测兔血清效价。结果表明,免疫兔血清效价都在1∶51200以上,其中2号兔效价最高,达到1∶204800,敏感性好,半数抑制浓度IC50为169.91 ng/mL,检测范围为37.52～302.31 ng/mL。本试验成功制备了EFLX完全抗原,获得了敏感的兔源多克隆抗体血清,为以后ELISA试剂盒和胶体金试纸条的研发奠定了基础。 相似文献
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为了合成沙丁胺醇(Sal)人工抗原、制备沙丁胺醇多克隆抗体,试验采用碳二亚胺法和琥珀酸酐法合成了免疫抗原Sal-HS-BSA和检测抗原Sal-HS-OVA,通过紫外扫描(UV)法和SDS-PAGE电泳法进行鉴定,并以Sal-HS-BSA免疫新西兰大白兔,获得了高效价和高敏感性的多克隆抗体。结果表明:Sal与载体蛋白上的牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵白蛋白(OVA)耦联成功,耦联比分别为7.7∶1和8.6∶1;抗体效价达到1∶1×105,对Sal的半数抑制浓度(IC50)为9.12 ng/mL。说明对人工合成抗原进行免疫可获得高效价、敏感的多克隆抗体。 相似文献
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用牛血清白蛋白（BSA）免疫普通级试验兔（新西兰白兔）,获得高滴度的抗BSA血清。以系列含量的BSA溶液绘制标准曲线,测定兔血清中抗BSA抗体效价。结果表明：普通级试验兔BSA4次免疫后,兔血清中抗BSA抗体效价为1：9000。ELISA间接法敏感度高,优化了酶免疫反应条件,标准曲线线性范围内r=0．9965,可初步用于抗BSA抗体含量检测。 相似文献
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氨苯磺胺多克隆抗体的制备 总被引：2，自引：0，他引：2
采用重氮化法将氨苯磺胺与人血清白蛋白偶联形成免疫原，免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。通过紫外扫描分析，免疫原中药物分子与蛋白质分子的偶联比为32：1，改良辛酸-饱和硫酸铵法纯化抗体，多克隆抗体效价达1：10^5，间接ELISA建立的氨苯磺胺检测的线性范围为1ng／mL～100μ/mL，70％抑制率可检测最低浓度为0．09μ/mL，以抗体与氨苯磺胺的反应率为100％，抗体与其他7种磺胺药交叉反应率很低。结果表明，制备的氨苯磺胺多克隆抗体具有很高的特异性，可用于动物性食品中氨苯磺胺残留的检测。 相似文献
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为制备鸡β-防御素-9(AvBD9)多克隆抗体,本试验将AvBD9基因插入pGEX-6 P-1载体,构建重组基因pGEX6 P-AvBD9大肠杆菌表达质粒。将通过切胶纯化获得的表达产物包涵体谷胱甘肽转移酶-AvBD9(GST-AvBD9)融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗AvBD9血清,并检测抗体效价。结果表明,经间接酶联免疫分析(ELISA)及蛋白质免疫印迹(Western blot)方法证实,获得的融合蛋白免疫新西兰大白兔得到了特异性的多克隆抗体,抗体效价为1∶38 400。 相似文献
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《畜牧与兽医》2015,(10):97-101
为制备鼠骨骼肌肌球蛋白轻链激酶(sk MLCK)多肽抗体,根据NCBI Gen Bank中报道的sk MLCK的一级结构信息,利用TMHMM2.0和DNA Star软件分析此蛋白的跨膜结构域、二级结构、亲水性、疏水性等,以及综合分析考虑抗体设计的其他相关因素,设计出一段14个氨基酸的多肽。将合成后的多肽同牛血清白蛋白(BSA)进行偶联,将BSA偶联后的sk MLCK多肽免疫新西兰大白兔,3个月后采集血清,亲和纯化抗sk MLCK多肽抗体。ELISA法检测效价,Western blot和免疫荧光法检测抗体特异性。结果得到了高效价和高特异性的鼠sk MLCK多肽抗体,ELISA法测定其效价可达到1∶128 000,并可用于免疫荧光和Western blot的研究,为后续研究sk MLCK基因提供物质基础。 相似文献
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为研究奶牛S100A12蛋白功能提供一种灵敏、高效的免疫学检测试剂,将纯化好的S100A12蛋白分别与弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂乳化制备成抗原,免疫新西兰大白兔制备S100A12多克隆抗血清,应用琼脂双扩散法、间接ELISA法和Western blot方法检测该抗体的效价及其特异性。结果表明,所制备的S100A12抗血清经琼扩法和间接ELISA法检测效价分别达到1∶8和1∶409 600,同时免疫印迹法证实该抗体能与S100A12蛋白特异性结合。本试验成功获得了特异性强、效价高的S100A12多克隆抗体,为进一步深入研究S100A12基因功能提供了有力工具。 相似文献
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莱克多巴胺多克隆抗体的制备 总被引：3，自引：0，他引：3
采用多元酸酐法活化盐酸莱克多巴胺，用混合酸酐法将活化的莱克多巴胺与载体蛋白（KLH，BSA）偶联，制备了莱克多巴胺免疫原KLH-Rac和包被抗原BSA-Rac。以KLH-Rac免疫新西兰白兔获得了莱克多巴胺多克隆抗体，以BSA-Rac为包被抗原，采用间接ELISA检测抗血清，其效价达到1：6000，间接竞争ELISA测得抗血清的IC50值约为5ng／mL，其与克伦特罗、沙丁胺醇、特布它林的交叉反应性小于0．01％。 相似文献
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为了合成氯霉素(CAP)人工抗原并制备抗体,试验建立CAP残留的酶联免疫吸附试验(ELISA)法,采用重氮化法将半抗原CAP与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联,制得免疫抗原,然后与卵清白蛋白(OVA)进行偶联,制得包被抗原,通过紫外光谱扫描鉴定是否偶联成功;用免疫抗原免疫KM小鼠,制备CAP多克隆抗体,并通过间接ELISA法测定抗体效价。结果表明:通过紫外光谱扫描,CAP-BSA在275 nm处为最大吸收峰,CAP-OVA在276 nm处为最大吸收峰;并且免疫KM小鼠得到的抗体效价高达1∶128 000。说明试验成功制备了CAP人工抗原,并且获得了高效价的多克隆抗体,也进一步证明了药物偶联成功。 相似文献
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莱克多巴胺人工抗原的合成与鉴定 总被引：8，自引：0，他引：8
用戊二酸酐将盐酸莱克多巴胺活化成莱克多巴胺-戊二酸酐半醛,用混合酸酐法将莱克多巴胺-戊二酸酐半醛与KLH和BSA偶联,合成免疫原和包被抗原,经核磁共振法和紫外吸收法鉴定,偶联成功.用紫外吸收法测定免疫原和包被抗原的偶联比分别为24：1和2.5：1.用免疫原免疫新西兰白兔,采用间接ELISA法检测抗体效价,采用间接竞争ELISA法检测IC50值,获得了效价为1：6 000以上、IC50值为10 ng/mL的多克隆抗体,证明合成的人工免疫原具有免疫原性. 相似文献
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副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种世界范围内广泛存在的革兰氏阴性食源性致病菌,其vscF基因编码的T3SS1针状蛋白VscF,在侵袭宿主细胞过程中扮演重要角色。为深入研究VscF蛋白在T3SS1针状结构组装过程中的功能,并制备VscF特异性多肽抗体,利用OptimumAntigenTM抗原多肽设计软件,筛选最佳抗原目标肽段,然后将肽段与KLH载体蛋白偶联后免疫新西兰大白兔,收集兔血清制备多克隆抗体,并利用间接ELISA、Western Blot、间接免疫荧光检测方法,鉴定多抗效价和特异性。间接ELISA检测结果显示,该多肽抗体效价达1:512 000,显示出该多肽抗体的高敏感度;Western Blot与间接免疫荧光检测结果显示,该多抗能与原核表达的VscF蛋白发生特异性反应。结果表明,筛选的VscF短肽制备的多克隆抗体敏感度高,可作为VscF验证试验中具有特异性结合作用的抗体,能够为后续生物试剂机理研究奠定基础。 相似文献
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采用重氮化法,将半抗原副品红(Pararosaniline,PA)分别与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,反应得到免疫抗原和包被抗原,其偶联最佳结合比分别为8.8∶1,12.7∶1,6.9∶1,经紫外扫描光谱和蛋白电泳鉴定得到全抗原。用制备的抗原乳化后免疫小鼠获得了效价较高的多克隆抗体。为进一步制备抗孔雀石绿单克隆抗体打下基础。 相似文献
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本试验旨在建立N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc) IgY抗体的制备及鉴定方法。通过碳二亚胺法将Neu5Gc和载体蛋白进行偶联,制备Neu5Gc人工完全抗原,用制备的完全抗原免疫海兰褐蛋鸡制备Neu5Gc-IgY抗体,经ELISA检测分析鉴定抗体活性。经紫外光谱扫描、琼脂糖凝胶电泳法初步判断Neu5Gc人工完全抗原制备成功,获得的特异性Neu5Gc-IgY抗体经ELISA检测分析,首次免疫后第7天产生抗体,抗体效价呈动态变化,随着免疫次数的增多,血清效价和抗体效价逐步上升,至初次免疫后63 d达到高峰,效价达1:10 000,停止加强免疫后抗体效价可持续一个月左右,1号鸡产生的IgY抗体具有很好的抗原竞争活性,获得竞争回归方程y=30.28x+16.923,线性系数R2=0.9581。以上结果表明,本试验制备的Neu5Gc IgY抗体取得了理想效果,为红肉、牛奶及肿瘤组织中Neu5Gc的检测奠定了基础。 相似文献