外源褪黑素对鹿茸软骨细胞生长发育的影响     

《中国畜牧兽医》2020,(7)

试验旨在探讨褪黑素对体外培养的鹿茸软骨细胞增殖、周期及凋亡的影响。利用甲苯胺蓝、茜素红S、阿利新蓝染色鉴定软骨细胞,采用外源添加褪黑素的方法,用不同浓度(0、400、800、1 200、1 600和2 000 pg/mL)、不同时间(24、48和72 h)处理鹿茸软骨细胞,CCK-8法检测细胞增殖。选取800 pg/mL褪黑素处理软骨细胞24 h,利用流式细胞仪检测细胞周期的分布及细胞凋亡情况,采用ELISA试剂盒检测细胞培养液中睾酮含量。结果显示,经不同浓度的褪黑素处理鹿茸软骨细胞不同时间后,800 pg/mL褪黑素处理鹿茸软骨细胞24 h细胞活力极显著增加(P0.01)。软骨细胞经褪黑素处理后,与对照组相比,褪黑素处理组细胞G1期比例显著降低(P0.05);G2期比例极显著增加(P0.01),细胞被阻滞在G2期;褪黑素处理组细胞早期凋亡率无显著变化(P0.05),晚期凋亡率显著下降(P0.05);ELISA检测睾酮分泌水平均显著上升(P0.05)。综上,外源添加800 pg/mL褪黑素可以促进鹿茸软骨细胞的增殖,抑制软骨细胞的晚期凋亡,促进睾酮的分泌;以上结果可为阐明褪黑素参与鹿茸生长发育机制提供参考。  相似文献   

不同浓度褪黑素刺激对内蒙古绒山羊毛囊干细胞增殖活性的影响     

曹春花  高峰  王宏  王亚娟  刘迎春  周欢敏 《中国畜牧兽医》2016,43(2):438-443

试验旨在探究不同浓度褪黑素刺激对内蒙古绒山毛囊干细胞增殖活性的影响.采用0 (对照组)、100、300、500、700 pg/mL 5个浓度梯度分别对内蒙古绒山羊毛囊干细胞连续刺激5 d,MTT法分别检测各组细胞活性.结果表明,不同浓度褪黑素刺激2 d后,相较于对照组 (0 pg/mL),褪黑素刺激组未见成团细胞出现,开始出现长梭形细胞且细胞生长不再均一,各刺激组均表现出较高的增殖活性;刺激4 d后,500 pg/mL褪黑素刺激组毛囊干细胞增殖活性显著高于0、100 pg/mL (P<0.01;P<0.05),但与700 pg/mL褪黑素刺激组差异不显著 (P>0.05).因此,500 pg/mL是内蒙古绒山羊毛囊干细胞增殖的最适浓度.  相似文献   

DDR1对奶牛乳腺上皮细胞增殖与凋亡的调控作用     

华丽萍  刘双行  赵鑫哲  叶挺柱  熊家军  杨利国  梁爱心 《畜牧兽医学报》2020,51(9):2109-2119

旨在通过干扰或过表达盘状蛋白结构域受体1（DDR1）基因,探讨其对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡及周期的影响。本研究将DDR1基因小干扰RNA片段和过表达载体pcDNA3.1-DDR1转染奶牛乳腺上皮细胞,采用qRT-PCR和Western blot检测细胞中DDR1的干扰和过表达效果;利用CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡（早凋、晚凋）的变化;利用qRT-PCR检测增殖与凋亡相关基因的表达情况。结果,在奶牛乳腺上皮细胞中干扰DDR1基因后,其mRNA和蛋白表达分别下调94%和30%,而过表达DDR1基因后,其mRNA和蛋白表达分别上调68.24和1.38倍;干扰DDR1极显著抑制细胞的增殖（P<0.01）,细胞早凋与晚凋比例极显著上升（P<0.01）;干扰组G1期细胞比例极显著上升（P<0.01）,S期细胞比例极显著下降（P<0.01）,G2期细胞比例显著下降（P<0.05）,提示细胞阻滞在G0/G1期。相反,过表达DDR1能显著促进细胞增殖（P<0.05）,显著抑制细胞晚期凋亡（P<0.05）,G1期细胞比例极显著下降（P<0.01）,S期细胞比例极显著上升（P<0.01）,促进细胞由G1期向S期的转换。qRT-PCR检测结果显示,干扰DDR1后显著上调BAX、Caspase9基因的表达（P<0.05）,极显著上调P53、FAS基因的表达（P<0.01）,且显著下调PCNA、CyclinB1基因的表达（P<0.05）;过表达DDR1后,分别显著和极显著下调Cytc与BAX基因的表达（P<0.05,P<0.01）,并极显著上调CyclinB1基因的表达（P<0.01）。综上可见,DDR1能够调控奶牛乳腺上皮细胞的增殖、凋亡和周期,可为阐明DDR1参与奶牛乳腺上皮细胞生长发育的分子机制提供参考。  相似文献   

敲低SQLE基因对奶牛乳腺上皮细胞增殖及凋亡的影响     

胡祥维  杨帅  袁婧  陈超  杨利国 《中国畜牧兽医》2020,47(8):2510-2517

为了探讨角鲨烯环氧酶（squalene epoxidase,SQLE）基因对体外培养奶牛乳腺细胞凋亡及增殖的影响,本研究用RNAi技术敲低奶牛乳腺上皮细胞中SQLE基因;用实时荧光定量PCR方法检测奶牛乳腺上皮细胞中SQLE基因及凋亡和周期相关基因的表达;用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;用周期和凋亡检测试剂盒筛选细胞,用流式细胞术准确计数处于不同周期的细胞数和凋亡细胞数。结果显示,奶牛乳腺上皮细胞转染siRNA后,SQLE基因相对表达量显著下降（P<0.05）,细胞增殖受到极显著抑制（P<0.01）;G1期细胞数量显著下降（P<0.05）,G2期细胞数量没有显著性改变,S期细胞数量显著上升（P<0.05）;肿瘤坏死因子超家族成员6（又称Fas或CD5）的相对表达量显著上升（P<0.05）,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B（cyclin dependent kinase inhibitor 1B,P27）相对表达量显著上升（P<0.05）,而细胞周期素D1（Cyclin D1）、B淋巴细胞瘤因子2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（cyclin dependent kinase inhibitor 1A,P21）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X,apoptosis regulator,Bax）显著下降（P<0.05）。综上所述,敲低SQLE基因通过调节相关基因的表达抑制乳腺上皮细胞的增殖。  相似文献   

GnIH过表达载体构建及其对小鼠睾丸间质细胞的作用研究     

汤亚茹  阳美霞  贾金美  张虹亮  王水莲 《畜牧兽医学报》2021,52(10):2969-2977

本试验通过构建GnIH过表达载体,探究其对小鼠睾丸间质细胞（TM3细胞系）的凋亡效应及睾酮合成的调节作用。从6~8周雄性小鼠睾丸组织中提取RNA,反转录获得cDNA样本,利用PCR扩增并纯化GnIH基因,应用T4连接酶将其连入PLVX-IRES-ZsGreen1载体,进一步转化到感受态菌中,通过PCR、双酶切及测序鉴定后提取质粒。随后将构建好的重组质粒转染TM3细胞系72 h,分为空质粒组和GnIH过表达组,通过显微镜观察细胞荧光、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法、ELISA法和流式细胞术检测GnIH表达水平、细胞凋亡率及相关凋亡基因表达变化、睾酮分泌水平和睾酮合成酶基因表达水平。结果显示,GnIH扩增片段序列与参考序列一致,将GnIH过表达质粒转染至TM3细胞系72 h后,可见高强度绿色荧光,过表达组中GnIH基因水平极显著升高（P<0.01）,表明GnIH过表达载体构建成功且在TM3细胞系中高表达。转染72 h后,与空质粒组相比,过表达组中细胞凋亡率极显著升高（P<0.01）,凋亡基因P53和Bax/Bcl-2表达量比值也极显著升高（P<0.01）。与空质粒组相比,过表达组中睾酮浓度极显著降低（P<0.01）。与此同时,睾酮合成相关酶基因P450 scc mRNA表达量极显著降低（P<0.01）,StAR、3β-HSD和P450c17 mRNA表达量显著降低（P<0.05）,17β-HSD mRNA表达量在两组间无显著性差异（P>0.05）。综上所述,在体外培养的TM3细胞中过表达GnIH能诱导TM3细胞凋亡、抑制睾酮分泌且降低睾酮合成相关酶的基因表达水平,推断GnIH在小鼠睾丸间质细胞生长和睾酮合成过程中发挥负调控作用。本研究可为揭示GnIH在雄性哺乳动物生殖调控过程中的作用提供科学理论依据。  相似文献   

雌激素调控奶牛乳腺上皮细胞凋亡及生长周期作用机制的研究     

武开乐  库西塔别克·买买提依不拉音  马静  肖凡  余雄  邵伟 《中国畜牧兽医》2019,46(9):2575-2582

试验旨在研究雌激素对奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）凋亡及生长周期的影响。通过添加MAPK/ERK信号通路阻断剂探索雌激素调控BMECs凋亡及生长周期具体的作用机制,采用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化情况,实时荧光定量PCR检测Bcl-2、Caspase3及CyclinD1基因mRNA的表达丰度。结果显示,对照组BMECs凋亡率极显著低于BMECs+PD98059、BMECs+E₂+PD98059组（P<0.01）,Bcl-2 mRNA表达丰度极显著高于BMECs+PD98059组（P<0.01）,Caspase3 mRNA表达丰度显著低于BMECs+PD98059组（P<0.05）;对照组细胞比例在G1期显著高于BMECs+E₂组（P<0.05）,极显著低于BMECs+E₂+PD98059组（P<0.01）,S期细胞比例极显著高于BMECs+PD98059、BMECs+E₂+PD98059组（P<0.01）,G2期细胞比例极显著低于BMECs+PD98059、BMECs+E₂+PD98059组（P<0.01）;对照组CyclinD1 mRNA的表达丰度极显著高于BMECs+PD98059组（P<0.01）;BMECs+E₂+PD98059组的Bcl-2 mRNA的表达量极显著高于BMECs+PD98059组（P<0.01）,Caspase3 mRNA的表达量显著低于BMECs+PD98059组（P<0.05）。结果表明,MAPK/ERK信号通路参与BMECs的增殖及细胞生长周期调节的过程,且雌激素可通过MAPK/ERK信号通路抑制BMECs的凋亡,MAPK/ERK信号通路可能参与由雌激素调控的细胞生长周期的进程。  相似文献   

CTSD对黔北麻羊卵泡颗粒细胞的调控机制及功能分析     

周志楠  陈祥  张艳  杨沛方  惠茂茂  唐文  洪磊 《畜牧兽医学报》2021,52(5):1278-1292

旨在分析组织蛋白酶D（cathepsin D, CTSD）对黔北麻羊卵泡颗粒细胞的调控机制并初步探究其对产羔性状的影响机理。本研究以36周龄、健康、多胎黔北麻羊母羊（n=5）为研究对象,屠宰后采集卵巢组织分离培养卵泡颗粒细胞,构建真核表达载体pEGFP-N3-CTSD,将其导入细胞后在转录与翻译水平验证真核表达效率;通过CCK-8法检测在不同时间段内重组质粒对颗粒细胞增殖的影响;通过流式细胞仪检测重组质粒对颗粒细胞凋亡及周期的影响;随后使用RT-qPCR法在细胞水平检测重组质粒对细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3,细胞周期相关因子Cyclin A1、Cyclin D2、Cyclin E mRNA表达水平的影响,最后,以多胎性状候选基因BMPR-IB、FSHR、INHA为功能基因,在转录与翻译水平上验证重组质粒对其mRNA与蛋白表达的影响。双酶切及测序结果证实,黔北麻羊CTSD基因真核表达载体pEGFP-N3-CTSD构建成功,且在转录与翻译水平极显著上调CTSD在颗粒细胞中的表达（P<0.01）;细胞增殖检测结果表明,颗粒细胞中上调CTSD后能够抑制细胞的增殖,其中在12、24、48、72 h对细胞增殖的抑制效率达到极显著（P<0.01）;细胞凋亡检测结果表明,CTSD的过表达能够极显著促进颗粒细胞的凋亡（P<0.01）,且能够显著下调细胞抗凋亡基因Bcl-2的表达（P<0.05）,极显著上调细胞促凋亡相关基因Bax、Caspase-3的表达（P<0.01）;此外,细胞周期检测发现,pEGFP-N3-CTSD在转染后能够极显著上调G0/G1期与G2/M期的细胞数量（P<0.01）,极显著下调S期细胞数量（P<0.01）,同时能够极显著提高细胞周期相关因子Cyclin A1的表达（P<0.01）,极显著降低Cyclin D2的表达（P<0.01）。RT-qPCR及Western blot检测结果表明,在颗粒细胞中上调CTSD后,能够极显著的下调多胎性状候选基因与蛋白BMPR-IB、FSHR、INHA在转录和翻译水平中的表达（P<0.01）。本研究发现,CTSD的高表达能抑制细胞的增殖,促进细胞凋亡,改变颗粒细胞的周期进程;还能改变细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Caspase-3与细胞周期相关因子Cyclin A1、Cyclin D2、Cyclin E的表达;同时也能够极显著降低颗粒细胞中多胎性状候选基因与蛋白BMPR-IB、FSHR、INHA的表达量（P<0.01）。这提示,CTSD可能通过改变细胞水平相关因子的表达量来调控颗粒细胞的生物学行为以及影响山羊多胎性状候选基因的表达进而间接的成为影响山羊产羔性状的重要因子,本研究为进一步探明CTSD对山羊产羔性状调控机理及对颗粒细胞的影响机制奠定基础。  相似文献   

猪肝星状细胞内质网应激模型的建立及对泛素化的影响     

辛海瑞  张闯  郝月  顾宪红 《中国畜牧兽医》2020,47(2):399-406

试验对衣霉素（tunicamycin,TM）处理猪肝星状细胞的浓度和培养时间进行筛选,以期成功构建内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）模型,并在此基础上探究ERS下猪肝星状细胞泛素化的变化。试验采用浓度为0、1、2、5、10和15 μg/mL的TM处理猪肝星状细胞,培养2、4、8、16、24和36 h。通过检测细胞抑制率对TM浓度和培养时间进行初筛;通过检测细胞周期及ERS标志基因和蛋白表达对TM浓度和培养时间进行终选,以确定是否成功构建ERS模型,同时,在ERS下检测猪肝星状细胞泛素化相关基因的表达变化。结果表明：由细胞抑制率检测结果初步确定TM浓度5 μg/mL、培养8或24 h后有可能出现ERS。5 μg/mL TM在培养8或24 h时,ERS标志基因表达均极显著上调（P < 0.01）。在培养8 h时,ERS标志蛋白中仅ATF4显著上调（P < 0.05）,细胞周期中仅G2/M期细胞比例显著下降（P < 0.05）;在培养24 h时,ERS标志蛋白均显著上调（P < 0.05）,细胞周期在G1期出现阻滞,并导致S期和G2/M期细胞比例极显著下降（P < 0.01）。以上结果说明,5 μg/mL TM培养24 h可成功构建细胞ERS模型。在ERS下,细胞泛素化相关基因UBA2和UBE2E的表达均极显著升高（P < 0.01）。综上,猪肝星状细胞经5 μg/mL TM处理24 h,可成功建立ERS模型,并启动泛素化机制。  相似文献   

精料中维生素A添加水平对生茸期马鹿日粮营养物质消化、血液生化指标及鹿茸产量的影响     

曹英  库尔班&#  吐拉克  杨开伦  贺贺千  华兴耀  李璐  金大智  杨玮  李彦林 《中国畜牧兽医》2020,47(8):2454-2463

为研究精料维生素A（VA）添加水平对生茸期马鹿日粮营养物质消化、血液生化指标及鹿茸产量的影响，以阿尔泰马鹿为研究对象，选择健康、体重相近的5~7岁龄公鹿18头，随机分为3组，分别为试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组，每组6头。试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别饲喂VA添加水平为12 800、18 800和24 800 IU/kg的精料，粗饲料由苜蓿干草和麦秸组成，自由采食。预试期15 d，正试期66 d。结果表明：①试验Ⅰ组干物质（DM）、有机物（OM）、钙（Ca）、磷（P）的采食量极显著高于试验Ⅱ组（P<0.01），且粗蛋白质（CP）、粗脂肪（EE）采食量显著高于试验Ⅱ组（P<0.05）。试验Ⅲ组粗蛋白质、磷采食量显著高于试验Ⅱ组（P<0.05）。②试验Ⅰ组磷消化率显著高于试验Ⅱ组和试验Ⅲ组（P<0.05），其余营养物质消化率各组间无显著差异（P>0.05）。③精料VA添加水平对阿尔泰马鹿的蛋白质代谢和糖脂代谢没有产生显著影响（P>0.05）。但血液总蛋白（TP）、血糖（GLU）随着VA添加水平的升高有升高的趋势，而总胆固醇（TC）、尿素氮（UREA）等则有下降的趋势。④血液谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）和碱性磷酸酶（ALP）活性随着VA水平的升高而降低，其中试验Ⅱ和Ⅲ组的碱性磷酸酶活性显著低于试验Ⅰ组（P<0.05）。⑤血液免疫球蛋白含量随着VA添加水平的升高而升高，其中试验Ⅲ组的免疫球蛋白G（IgG）含量极显著高于试验Ⅰ和Ⅱ组（P<0.01）。⑥试验Ⅲ组的丙二醛（MDA）含量显著低于试验Ⅰ组（P<0.05）、谷胱甘肽-过氧化物酶（GSH-PX）活性极显著高于试验Ⅰ组（P<0.01）。超氧化物歧化酶（SOD）活性和总抗氧化能力（T-AOC）随着VA添加水平升高呈极显著升高变化（P<0.01）。⑦试验Ⅱ和Ⅲ组血液生长激素（GH）含量极显著高于试验Ⅰ组（P<0.01），试验Ⅲ组的胰岛素样生长因子-1（IGF-1）和VA含量极显著高于试验Ⅰ组（P<0.01），血液雌二醇（E₂）含量随着饲喂精料VA水平的升高而升高（P<0.01）。血液睾酮（T）和25-羟基维生素D₃（25-OH-VD₃）含量有随VA水平升高而升高的趋势（P>0.05）。⑧各组之间鹿茸产量无显著性差异（P>0.05），其中试验Ⅰ组最高，试验Ⅲ组产茸量最低。综上，在本试验条件下，精料VA添加水平为12 800 IU/kg时阿尔泰马鹿有较高的采食量和鹿茸产量，精料VA添加水平为24 800 IU/kg时阿尔泰马鹿有较强的免疫和抗氧化功能。综合生产效益，推荐马鹿精料VA添加水平为12 800 IU/kg。  相似文献   

丁酸钠通过AMPK通路调控LPS造成牛乳腺上皮细胞脂代谢紊乱的作用机制   总被引：2，自引：2，他引：0  

李林  曹萌  宫彬彬  赵梅  王婕  张晓辉 《畜牧兽医学报》2022,53(9):3221-3230

通过向脂多糖（LPS）诱导牛乳腺上皮细胞系（MAC-T）脂代谢紊乱模型中添加不同浓度（2、8、16 μmol·L^-1）的丁酸钠,探讨其对细胞脂代谢的调控机理及炎症损伤的修复作用。分别用1 000 ng·mL^-1 LPS刺激MAC-T细胞9 h后,检测细胞脂滴面积及三酰甘油（TG）含量;用不同浓度的丁酸钠刺激MAC-T细胞12 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率;试验共分为5组：对照组、LPS处理组、2 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组、8 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组和16 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组,分别对细胞TG含量、AMPK信号通路蛋白、脂代谢关键基因以及相关炎症因子进行检测。结果显示：LPS会造成MAC-T细胞总脂滴面积显著下降（P<0.05）,TG含量极显著下降（P<0.01）;不同浓度的丁酸钠对MAC-T细胞凋亡率没有影响;与对照组相比,LPS处理组TG含量极显著下降（P<0.01）、P-AMPK表达水平显著上升（P<0.05）、脂合成代谢相关基因ACC、SCD-1以及FAS mRNA表达水平均显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）下降、脂分解代谢相关基因CPT-1、CPT-2以及ACO mRNA表达水平均显著上升（P<0.05）、炎症因子TNF-α和IL-6含量显著上升（P<0.05）;与LPS处理组相比,（2、8、16 μmol·L^-1）丁酸钠+LPS处理组TG含量有一定程度上升,P-AMPK表达水平下降,脂合成代谢相关基因表达水平上升,脂分解代谢相关基因表达水平有一定程度下降,炎症因子TNF-α和IL-6含量下降。本研究表明丁酸钠会通过AMPK通路激活脂合成代谢,调控TG的合成,并且对MAC-T细胞的炎症损伤具有一定的缓解作用。  相似文献   

Effect of Different Concentrations of Melatonin on Proliferative Activity of Hair Follicle Stem Cells in Inner Mongolia Cashmere Goat     

CAO Chun-hua  GAO Feng  WANG Hong  WANG Ya-juan  LIU Ying-chun  ZHOU Huan-min 《中国畜牧兽医》2016,43(2):438-443

This study aimed to investigate the effect of different concentrations of melatonin on proliferative activity of hair follicle stem cells in Inner Mongolia cashmere goat.The five levels melatonin including 0,100,300,500 and 700 pg/mL were designed to stimulate the hair follicle stem cells in Inner Mongolia cashmere goat,the MTT method was used to detect cell proliferation activity for 5 days.The result showed that 2 days later,the groups stimulated by melatonin did not cobble-stone arrangement and began to appear spindle cell and cell growth was not uniform compared with the control group (0 pg/mL),the groups showed obvious effect on cell proliferation relatively.4 days later,the cell proliferation of groups stimulated by 500 pg/mL melatonin were significantly greater than that of 0,100 pg/mL (P<0.01;P<0.05),but there was no significant difference with 700 pg/mL melatonin stimulation group (P>0.05).The optimal melatonin concentration of hair follicle stem cell proliferation was 500 pg/mL in Inner Mongolia cashmere goat.  相似文献   

Effects of Interference and Overexpression of DDR1 on Proliferation and Apoptosis of Mammary Epithelial Cells in Dairy Cows     

HUA Liping  LIU Shuanghang  ZHAO Xinzhe  YE Tingzhu  XIONG Jiajun  YANG Liguo  LIANG Aixin 《畜牧兽医学报》1956,51(9):2109-2119

The aim of this study was to investigate the effect of discoidin domain receptor 1 (DDR1) gene on the proliferation, apoptosis and cell cycle of dairy cow mammary epithelial cells through interfering and overexpressing DDR1. The small RNA interference fragment of DDR1 gene and overexpression vector pcDNA3.1-DDR1 were transfected into dairy cow mammary epithelial cells, qRT-PCR and Western blot were used to detect the interference and overexpression efficiency of DDR1; CCK-8 was employed to detect cell proliferation; Flow cytometry was performed to detect the changes of cell cycle and apoptosis (early apoptosis and late apoptosis). qRT-PCR was used to detect the expression of genes related to proliferation and apoptosis. After interfering DDR1 gene in dairy cow mammary epithelial cells, mRNA and protein expression levels of DDR1 were down-regulated by 94% and 30%, respectively; While after overexpressing DDR1 gene, its mRNA and protein expression were up-regulated 68.24 and 1.38 times, respectively. Interfering DDR1 extremely significantly inhibited the proliferation of cells (P<0.01), the ratio of early and late apoptotic cells was extremely significantly increased (P<0.01); the ratio of G1 phase cells in the interference group was extremely significantly increased (P<0.01), and the proportions of S and G2 phase cells were significantly decreased (P<0.01 and P<0.05), which suggested that the cells were blocked in G0/G1 phase. Conversely, overexpression of DDR1 could significantly promote cell proliferation (P<0.05), significantly inhibit the late apoptosis of cells (P<0.05), the proportion of G1 phase cells was extremely significantly decreased (P<0.01), and the proportion of S phase cells was extremely significantly increased (P<0.01), suggesting the enhancement of transition from G1 to S phase. The results of qRT-PCR detection showed that after interfering DDR1, the expressions of BAX and Caspase9 genes were significantly up-regulated (P<0.05), and the expressions of P53 and FAS genes were extremely significantly up-regulated (P<0.01), while the expressions of PCNA and CyclinB1 genes were significantly down-regulated (P<0.05). After overexpression of DDR1, the expressions of Cytc and BAX genes were significantly (P<0.05) and extremely significantly down-regulated(P<0.01), respectively, and the expression of CyclinB1 gene was extremely significantly up-regulated (P<0.01). In summary, DDR1 can regulate the proliferation, apoptosis and cycle of dairy cow mammary epithelial cells, this result will provide a reference for elucidating the molecular mechanism of DDR1 involved in the growth and development of dairy cow mammary epithelial cells.  相似文献   

TMEM219基因可变剪切体相对表达量及其对鹿茸重量的影响     

赵佩  王磊  王洪亮  邢秀梅  胡鹏飞 《中国畜牧兽医》2020,47(7):2150-2158

试验旨在研究TMEM219基因3种剪切体在不同重量鹿茸尖端的表达规律及TMEM219基因表达对鹿茸重量的影响,以期探究TMEM219基因对鹿茸生长发育的调控机理。利用实时荧光定量PCR技术对TMEM219基因及其3种剪切体在同一重量组鹿茸的不同组织及不同重量组鹿茸的同一组织mRNA的相对表达水平进行检测,同时测定并比较不同产茸量梅花鹿的血清中胰岛素生长因子1（IGF-1）和胰岛素样生长因子结合蛋白3（IGFBP-3）的浓度。结果表明,TMEM219基因的3种剪接体在梅花鹿鹿茸的间充质及前成软骨组织（RP）、过渡组织（TZ）及软骨组织（C）中均有表达,TMEM219-918基因相对表达量极显著高于TMEM219-1005与TMEM219-1960基因（P<0.01）,TMEM219-1005与TMEM219-1960基因相对表达量无显著差异（P>0.05）;高重量组TMEM219基因表达量显著高于低重量组（P<0.05）;同时,高重量组个体血清中IGF-1浓度显著高于低重量组个体（P<0.05）,而IGFBP-3浓度显著低于低重量组个体（P<0.05）。结果提示,TMEM219基因高表达可能会促进鹿茸的生长,增加鹿茸重量;推测其可能的机理是TMEM219竞争性结合IGFBP-3,减少与其结合的IGF-1,加强IGF-1与IGF-1R的亲和力,进而提高IGF-1对鹿茸生长的促进作用。TMEM219基因可能成为影响鹿茸生长发育的候选基因,为提高鹿茸生长提供理论基础。  相似文献   

白果内酯对IL-1β诱导的ATDC5软骨细胞自噬、增殖和凋亡的影响     

马天文  于跃  吕良钰  贾丽娜  阮红日  王颢然  王新宇  张雨欣  张建涛  高利 《畜牧兽医学报》2023,54(2):837-846

旨在探讨白果内酯对白介素1β(IL-1β)诱导的ATDC5软骨细胞自噬、增殖和凋亡的影响。采用10 ng·mL^-1 IL-1β诱导ATDC5软骨细胞构建体外炎症模型,随机分为对照组、IL-1β组、白果内酯组(低、中、高剂量)。利用EdU检测细胞新合成的DNA,并结合细胞核标记物(Hoechest)进行双重标记检测细胞增殖速度。使用膜Annexin-V/PI通过流式细胞仪分析ATDC5软骨细胞凋亡情况。通过mRFP-GFP-LC3双荧光系统的组合测量方法检测自噬流。蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测各组软骨细胞中LC3-II、Beclin1、BAX、Caspase-3和Bcl2的蛋白和mRNA表达情况。结果显示,IL-1β诱导ATDC5软骨细胞后,细胞增殖减弱,下调自噬促进凋亡,而白果内酯干预能够过促进自噬和细胞增殖,抑制凋亡。白果内酯促进ATDC5软骨细胞的增殖(P<0.05),与IL-1β组相比,抑制了LC3-II、Beclin1、BAX和Caspase-3的蛋白和mRNA表达(P<0.05),促...  相似文献   

白藜芦醇和褪黑素对绵羊胎儿成纤维细胞转染及卵母细胞体外成熟的影响     

姚昱君  李广栋  吴昊  马文奎  杨海  关盛宇  吕东颖  付瑶  朱天奇  姬鹏云  谭鑫星  赵万民  连正兴  张鲁  刘国世 《中国畜牧兽医》2021,48(12):4497-4507

试验旨在利用白藜芦醇(Re)和褪黑素(MT)提高绵羊胎儿成纤维细胞电穿孔转染(电转)效率、优化卵母细胞体外成熟体系,以提高转基因动物生产效率。将绵羊胎儿成纤维细胞分为6组:对照组、添加白藜芦醇高、中、低(R^-5、R^-6、R^-7)3种浓度组及白藜芦醇和褪黑素联合添加组(R^-5M^-5、R^-6M^-7),通过电转效率和细胞凋亡情况确定电转体系优化方案;通过对细胞周期、线粒体膜电位及活性氧(ROS)的检测研究其作用机制。将绵羊卵母细胞分为对照组及白藜芦醇和褪黑素(R^-5M^-5、R^-6M^-7)联合添加组,通过绵羊卵母细胞体外成熟后卵丘细胞扩展、第一极体排出及体外受精胚胎的卵裂率检测其对卵母细胞体外成熟的作用。研究结果显示,分离的绵羊胎儿成纤维细胞P3代增殖旺盛,细胞生长曲线呈典型的S型;与对照组相比,所有试验组胎儿成纤维细胞的电转效率均显著提高(P<0.05),R^-5M^-5组电转效率最高;R^-6M^-7组显著降低细胞凋亡率(P<0.05),R^-5、R^-6、R^-5M^-5和R^-6M^-7组均显著促进细胞增殖(P<0.05);R^-6、R^-7、R^-5M^-5和R^-6M^-7组G1期细胞增加,S期细胞相对减少,但差异均不显著(P>0.05);R^-6、R^-7、R^-5M^-5和R^-6M^-7组成纤维细胞内ROS水平均显著降低(P<0.05),R^-6、R^-5M^-5和R^-6M^-7组线粒体膜电位均显著增加(P<0.05);R^-6M^-7组显著促进绵羊卵丘细胞扩展、提高卵母细胞第一极体排出率和体外受精胚胎发育能力(P<0.05)。综上,白藜芦醇和褪黑素可以优化绵羊胎儿成纤维细胞电转体系,提高卵母细胞体外成熟效率,为白藜芦醇和褪黑素在转基因动物生产中的应用提供参考依据。  相似文献