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1.
本试验旨在探讨生长激素(GH)和胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞内调控乳蛋白合成的关键激酶及调节因子mRNA表达量的影响。试验对纯化后的荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞进行4种处理,对照组采用无血清生长培养基,试验组在对照组的基础上分别添加GH(100 ng/mL)、IGF-Ⅰ(100 ng/mL)和GH(100 ng/mL)+IGF-Ⅰ(100 ng/mL)。培养24 h后,采用实时定量PCR(RT-qPCR)法测定κ-酪蛋白基因以及调控乳蛋白合成的关键激酶及调节因子的mRNA表达量,并测定生长激素受体(GHR)和胰岛素样生长因子Ⅰ受体(IGF-ⅠR)mRNA表达量。结果表明:体外培养的奶牛乳腺上皮细胞可以表达GHR和IGF-ⅠRmRNA,各试验组均能显著提高κ-酪蛋白(CSN3)mRNA表达量(P<0.05),但未发现GH和IGF-Ⅰ复合存在累积效应;与对照组相比,GH组有提高E74-样转录因子5(ELF5)mRNA表达量的趋势(P<0.10),而IGF-Ⅰ组显著提高了哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和核糖体蛋白S6激酶1(rpS6K1)mRNA表达量(P<0.05),GH+IGF-Ⅰ组未呈现加强作用。结果提示,GH和IGF-Ⅰ可能单独通过影响调控乳蛋白合成的关键激酶及调节因子mRNA表达来调节κ-酪蛋白的合成。 相似文献
2.
应用Real-time PCR方法检测不同浓度(0、1、10和100 ng/mL)胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)处理后的体外培养奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白和脂肪合成相关基因mRNA的相对表达量。结果表明,添加不同浓度IGF-Ⅰ对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞IGF-Ⅰ受体基因(IGFIR)、IGF-Ⅰ结合蛋白-3基因(IGFBP3)、α-s1-酪蛋白基因(CSN1S1)和κ-酪蛋白基因(CSN3)mRNA的相对表达丰度均无显著影响(P>0.05)。随着IGF-Ⅰ添加浓度的增加,β-酪蛋白基因(CSN2)、乙酰辅酶A羧化酶基因(ACACA)、脂肪酸合成酶基因(FASN)和脂肪酸结合蛋白-3基因(FABP3)mRNA的相对表达丰度显著上调(P<0.05)。提示,IGF-Ⅰ作为一种重要细胞因子参与调节乳腺上皮细胞乳蛋白和乳脂肪相关基因mRNA的表达。 相似文献
3.
4.
试验旨在研究胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factor 1,IGF-1）对奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells,BMECs）增殖的影响,为后期利用IGF-1调控乳腺发育奠定理论基础。以奶牛乳腺上皮细胞为材料,首先分4组分别外源添加0（对照组）、10、50、100 μg/mL IGF-1且分别培养12、24、48、72 h,测定抑制BMECs凋亡率的最佳浓度;然后分6组：单纯BMECs组、BMECs+IGF-1组、BMECs+LY294002组、BMECs+IGF-1+LY294002组、BMECs+RAPA组和BMECs+IGF-1+RAPA组,采用流式细胞术测定各组细胞凋亡率。结果表明,外源性添加IGF-1对BMECs凋亡率具有抑制作用,最佳浓度为50 μg/mL;BMECs+IGF-1+LY294002与BMECs+IGF-1+RAPA组细胞凋亡率均极显著高于BMECs+IGF-1组（P<0.01）。推断IGF-1能够活化PI3K/Akt/mTOR信号通路,参与BMECs凋亡的调控作用,进而抑制BMECs细胞凋亡;IGF-1可能会对被抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路产生"修复"机制,使其能够重新参与BMECs的生命进程。 相似文献
5.
胰岛素、催乳素和氢化可的松对奶牛乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究旨在探讨胰岛素(A)、催乳素(B)和氢化可的松(C)三种泌乳激素对奶牛乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响。将正常的荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞进行体外培养,采用L9(34)正交试验设计,以无血清无激素培养基作为对照,研究了在培养液中添加不同浓度的三种泌乳激素组合对奶牛乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响。结果表明,泌乳激素的添加能够促进奶牛乳腺上皮细胞的增殖,48 h之前,A2B3C1组合最有利于奶牛乳腺上皮细胞的增殖,60 h之后最优组合为A3B2C1即50 ng/mL催乳素、500 ng/mL胰岛素和0.1 ng/mL氢化可的松,三种激素对试验结果影响的主次顺序为A>C>B;泌乳激素对奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响不大,但A1B2C2,即500 ng/mL催乳素、50 ng/mL胰岛素和0.1 ng/mL氢化可的松组能减少凋亡细胞数量。说明,在正常的奶牛乳腺中,泌乳激素主要是通过促进奶牛乳腺上皮细胞的增殖为进一步的泌乳和乳品质的提高奠定坚实的生理基础。 相似文献
6.
应用特异性方法检测转化生长因子(TGF-β1)对奶牛乳腺上皮细胞增殖和凋亡的作用,用不同浓度的TGF-β1作用于体外培养的奶牛乳腺上皮细胞,在不同时间收集培养细胞及其培养液,应用MTT法检测细胞增殖、应用分光度法检测caspase-3活性、测定DNA片段化率法检测细胞凋亡。结果表明,1、5、10ng/mL TGF-β1试验组与对照组比较细胞增殖差异显著(P<0.05),随TGF-β1浓度增大抑制细胞增殖作用增强。细胞凋亡检测显示,1、5、10ng/mL TGF-β1试验组与对照组比较细胞凋亡差异均显著(P<0.05),随TGF-β1浓度增大促进细胞凋亡作用增强。TGF-β1可以抑制奶牛乳腺上皮细胞的增殖,促进奶牛乳腺上皮细胞凋亡。 相似文献
7.
以皮层颗粒（CG）单层分布于质膜下做为卵母细胞胞质成熟的标志,利用CG荧光染色法,研究了不同浓度表皮生长因子（EGF）和胰岛素样生长因子（IGF-1）及其组合对水牛卵母细胞胞质成熟的影响。结果发现：（1）添加不同浓度的EGF（10、20、30、50ng／mL）都可以提高胞质的成熟率,但是组间差异不显著（P〉0．05）;皮质颗粒的分布随着EGF浓度的升高逐步由中间分布向皮层分布转变;（2）在成熟液中添加IGF-130ng／mL时效果较好,能显著提高卵母细胞胞质的成熟率;皮质颗粒的分布随着IGF-1浓度的升高逐步由中间分布向皮层分布转变,在添加IGF一130ng／mL时,在皮层分布最好,随着IGF-1量的进一步增加,皮质颗粒又向中间分布转变;（3）添加20ng／mL EGF＋30ng／mL IGF-1组卵母细胞体外成熟率高于添加30ng／mL的IGF-1组,显著高于添加20ng／m LEGF组和对照组（P〈0.05）。由此表明,EGF和IGF-1对水牛卵母细胞体外成熟有协同作用。 相似文献
8.
本研究旨在探讨不同泌乳相关激素和生长因子对奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响及其与细胞外基质主要成分层黏连蛋白的关系。将正常的荷斯坦泌乳期奶牛乳腺上皮细胞进行体外培养,在未包被或包被层黏连蛋白的条件下,以MTT法检测催乳素(PRL)、牛生长激素(GH)、类胰岛素生长因子-1(IGF-Ⅰ)、类胰岛素生长因子-2(IGF-Ⅱ)对细胞增殖作用的影响。在层黏连蛋白包被条件下,进行血清恢复的同时添加不同泌乳相关激素和生长因子,GH、IGF-Ⅰ有促进细胞增殖的作用(P<0.05),PRL、IGF-Ⅱ有维持细胞存活的作用(P<0.05);无血清时,几种激素和生长因子单独添加均无明显促增殖效应(P>0.05)。无基质条件下,与血清联合使用时,PRL、GH、IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ均对细胞生长有不同程度促进作用(P<0.05);无血清时,仅IGF-Ⅰ使细胞增殖速率显著加快(P<0.05)。层黏连蛋白作为培养基质对于体外培养的泌乳乳腺上皮细胞生长速度没有显著促进作用,但有利于PRL和IGF-Ⅱ发挥促存活作用。PRL、GH、IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ对细胞增殖和存活有促进作用,但需要与血清中其他成分协同才能充分发挥作用,其中IGF-Ⅰ促增殖能力最强。 相似文献
9.
奶牛乳腺上皮细胞的不同培养方法比较及激素和细胞因子对β-酪蛋白mRNA表达的诱导 总被引：1，自引：0，他引：1
本试验旨在建立一种高效的奶牛乳腺上皮细胞培养方法,并研究不同激素和细胞因子对其表达β-酪蛋白mRNA的诱导作用.分别采用组织块培养法和机械破碎法培养奶牛乳腺上皮细胞,利用成纤维细胞和乳腺上皮细胞对胰酶的敏感性不同,对获得的细胞进行纯化.通过细胞计数法测定纯化细胞的生长曲线,通过免疫荧光组织化学染色法检测角蛋白18的表达,通过实时定量PCR法检测8种不同激素和细胞因子组合培养液诱导细胞表达β-酪蛋白mRNA的效果.结果表明:通过机械破碎法可以分离得到增殖旺盛的奶牛乳腺上皮细胞,与组织块培养法相比,具有细胞迁出速度快等优点.细胞生长曲线呈典型的“S”型.在纯化的乳腺上皮细胞及第20代乳腺上皮细胞中都检测到角蛋白18的表达.100 ng/mL类胰岛素生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)显著提高了乳腺上皮细胞中β-酪蛋白mRNA的表达(P＜0.05).由结果可知,本试验采用的机械破碎法是一种高效的奶牛乳腺上皮细胞培养方法,100 ng/mL IGF-Ⅰ对细胞中β-酪蛋白mRNA表达的诱导效果最好. 相似文献
10.
为研究不同剂量的IGF-1和EGF对辽宁绒山羊毛囊体外生长及毛囊形态的影响,采用显微分离法分离绒山羊初级毛囊,分别测定不同浓度IGF-1(0.1、1、10和100 ng/mL)、不同浓度EGF(0.2、2、20和100 ng/mL)、联合添加IGF-1和EGF(分别添加10 ng/mL和20 ng/mL)对毛囊生长和形态变化的影响.结果表明,IGF-1和EGF对毛囊体外生长均具有正向调节作用,作用大小与剂量有关,最适宜浓度IGF-1为10 ng/mL;EGF为20 ng/mL.IGF-1(10ng/mL)和EGF(20 ng/mL)联合添加对毛囊生长促进作用优于单独添加.IGF-1刺激毛乳头和毛母质细胞分裂增殖;EGF促进毛囊外根鞘细胞分化;联合添加刺激毛球部增大. 相似文献
11.
本试验旨在研究培养基中添加不同浓度的胰岛素对奶牛乳腺上皮细胞生长及κ-酪蛋白(CSN3)和胰岛素受体(INSR)基因表达的影响。选用中国荷斯坦奶牛的乳腺上皮细胞进行体外培养,在以无血清无激素的生长培养基为对照的基础上,分别添加胰岛素5、50、500和5 000 ng/mL,测定CSN3和INSR基因表达量以及CSN3相对含量的变化。结果表明:1)胰岛素能够促进乳腺上皮细胞的增殖,其中5～500 ng/mL的胰岛素促增殖作用较好。2)胰岛素能提高乳腺上皮细胞CSN3、INSR基因表达量和CSN3相对含量,50 ng/mL组CSN3基因表达量和CSN3相对含量均显著或极显著高于对照组(P<0.01)以及5(P<0.01)、500(P<0.01)和5 000 ng/mL组(P<0.05),INSR基因表达量显著或极显著高于对照组(P<0.05)以及500(P<0.05)和5 000 ng/mL组(P<0.01)。结果提示,随着胰岛素浓度的增加,CSN3和INSR基因的表达量及CSN3相对含量均呈先增加后下降的趋势,50 ng/mL时最高,而高浓度(5 000 ng/mL)的胰岛素不利于奶牛乳腺上皮细胞合成乳蛋白。 相似文献
12.
《黑龙江畜牧兽医》2010,(21)
为了研究胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor,IGF-1)对奶牛成骨细胞骨重建相关因子表达的影响,探讨IGF-1对奶牛成骨细胞形成-吸收的作用,试验采用体外分离培养奶牛成骨细胞,用改良Gomori钙钴法染色鉴定,再以0,1,10,50,100 ng/mL人重组胰岛素样生长因子-1(recombinated human insulin-like growth factor-1,rhIGF-1)干预培养5 d后,半定量RT-PCR法检测成骨细胞骨保护素(osteoprotegerin,OPG)和核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nu-clear factor-κB ligand,RANKL)mRNA的表达,ELISA检测细胞培养上清液OPG蛋白水平。结果表明:1~100 ng/mL rhIGF-1干预5 d,OPG、RNAKL mRNA表达均较未干预组增加,10,50,100 ng/mL组OPG/β-actin、RANKL/β-actin比值显著高于未干预组(P0.05),且在1~100 ng/mL浓度范围内,rhIGF-1呈剂量依赖方式上调OPG蛋白表达,其中10,50,100 ng/mL干预组与未干预组差异显著(P0.05)。说明IGF-1调控奶牛成骨-破骨细胞介导的形成-吸收偶联,促进骨形成,这可能是IGF-1参与奶牛骨代谢性疾病的重要机制之一。 相似文献
13.
为了研究胰岛素样生长因子1(IGF-Ⅰ)对奶牛卵母细胞体外成熟和植入前胚胎发育的影响,在卵母细胞体外成熟(IVM)和胚胎体外培养(IVC)期间添加不同浓度(0、20、40、60、80 ng/m L)的IGF-Ⅰ。结果表明:与对照组相比,IVM培养液中添加60、80 ng/m L IGF-Ⅰ显著提高了卵母细胞的成熟率(75.8%、76.2%vs.62.1%);IVM和IVC培养液中添加60、80 ng/mL IGF-Ⅰ显著提高了卵裂率(59.2%、61.5%vs.40.2%)和囊胚率(28.1%、27.6%vs.18.3%)并显著降低了囊胚内ROS水平(55.2、57.1 vs.79.8)。与对照组相比,IVM和IVC培养液中添加40 ng/mL IGF-Ⅰ提高了囊胚IGFBP2基因的表达;IVM和IVC培养液中添加IGF-Ⅰ没有改变IGFBP3基因表达;IVM和IVC培养液中添加60、80 ng/mL IGF-Ⅰ提高了囊胚IGFBP6基因表达(0.36、0.39 vs.0.23)。结果提示,在IVM和IVC培养液中添加适量浓度的IGF-Ⅰ可降低胚胎内ROS水平,增加胚胎细胞内IGFBP6基因表达,提高胚胎的早期发育能力。 相似文献
14.
试验旨在探讨无血清条件下脐带间充质干细胞（UC-MSCs）和奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）共培养对类胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）表达的影响,将UC-MSCs和BMECs按1：2直接共培养,对比单纯培养的两种细胞,48 h时利用ELISA法检测各组上清IGF-Ⅰ浓度水平,再利用Transwell小室将两种细胞分离培养,实时荧光定量 PCR检测各组细胞IGF-ⅠR、IGF-Ⅰ mRNA的表达。结果显示,共培养中IGF-Ⅰ浓度显著高于UC-MSCs组（P < 0.05）,极显著高于BMECs组（P < 0.01）;UC-MSCs/BMECs、BMECs/UC-MSCs组IGF-Ⅰ mRNA表达值均极显著高于单纯培养组（P < 0.01）,BMECs/UC-MSCs组显著高于UC-MSCs/BMECs组（P < 0.05）;UC-MSCs/BMECs、BMECs/UC-MSCs组IGF-ⅠR mRNA表达值显著或极显著高于单纯培养组（P < 0.05;P < 0.01）,BMECs/UC-MSCs组较UC-MSCs/BMECs组差异显著（P < 0.05）。综上,体外无血清培养条件下,UC-MSCs和BMECs共培养可显著提高IGF-ⅠR及IGF-Ⅰ mRNA表达,IGF-Ⅰ浓度水平和IGF-ⅠR mRNA的表达具有一致性,IGF-Ⅰ主要存在于UC-MSCs中。 相似文献
15.
大豆黄酮和染料木素对体外培养奶牛乳腺上皮细胞增殖及抗氧化水平的影响 总被引：7，自引：0，他引：7
通过体外细胞培养的方法探讨大豆黄酮（Daidzein,Da）和染料木素（Genistein,Ge）对奶牛乳腺上皮细胞增殖及抗氧化水平的影响。试验分空白对照组、10ng／mL雌二醇（Ez）组、不同浓度Da和Ge（1、10、100、1000ng／mL）组,培养72h后,采用MTT法检测细胞增殖情况。结果表明,10、100ng／mLGe组和100、1000ng／mLDa组同空白对照组比较可显著促进奶牛乳腺上皮细胞的增殖（P〈0．05）,但均显著低于E2组（P〈0．05）。另取处于对数生长期的乳腺上皮细胞加入不同浓度Da和Ge（1、10、100、1000ng／mL）继续培养24h,检测细胞培养液中总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—PX）活性、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量。结果表明,100、1000ng／mLDa组及100、1000ng／mL Ge组较空白组显著提高了T—SOD活性（P〈0．05）,显著降低了MDA含量（P〈0．05）;100、1000ng／mL Da组及10、100、1000ng／mL Ge组显著提高了NO含量（P〈0．05）;1000ng／mL Da组及100、1000ng／mL Ge组显著提高了GSH—PX活性（P〈0．05）。可见,Da和Ge在一定浓度范围内均有促进奶牛乳腺上皮细胞增殖及抗氧化水平提高的作用。 相似文献
16.
通过建立和完善绵羊子宫内膜上皮原代细胞体外培养技术,为研究绵羊母体和孕体之间的相互作用机制建立体外着床模型。采用组织块法分离培养子宫内膜上皮细胞,观察其生长情况,并比较不同表皮生长因子（EGF）浓度对子宫内膜上皮细胞增殖的作用效果。结果显示,组织块培养1~2 d后,组织周围迁出子宫内膜上皮细胞,长满60 mm培养皿需9~12 d;经差时消化法纯化后,F1代绵羊子宫内膜上皮细胞纯度可达90%以上,表明所获细胞可用于后续试验;F2代细胞在不同浓度EGF（0、12.5、25、50、75、100 ng/mL）下培养144、168 h,经检测在144 h,12.5、25和100 ng/mL浓度下D450 nm值极显著高于对照组（P<0.01）,50 ng/mL浓度下显著高于对照组（P<0.05）,在168 h,12.5 ng/mL浓度下显著高于对照组（P<0.05）,因此,在12.5 ng/mL EGF作用下效果最佳;F3代细胞在0、12.5 ng/mL浓度下培养不同时间（24、48、72、96、120、144、168、192、216 h）,经检测D450 nm值在144 h差异显著（P<0.05）,168 h后差异极显著（P<0.01）。因此,在培养液中添加12.5 ng/mL EGF可以更加高效、快速得到子宫内膜上皮细胞。 相似文献
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为探讨中草药添加剂对奶牛乳腺上皮细胞泌乳功能的影响,选取3种与泌乳功能相关的中药（甲珠、通草、蒲公英）,应用CASY细胞分析仪及HPLC分别检测其对奶牛乳腺上皮细胞增殖、细胞活力及乳腺上皮细胞分泌β-酪蛋白、乳糖的影响。试验结果表明,通草对乳腺上皮细胞泌乳性能影响不显著（P〉0.05）;甲珠和蒲公英对奶牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白和乳糖分泌有显著的促进作用（P〈0.05）,并呈一定的剂量依赖效应,综合考虑确定蒲公英30 mg/mL为其最佳作用浓度。 相似文献
18.
为了解卵母细胞体外成熟与凋亡过程,进而提高卵母细胞体外成熟率,本试验研究了在培养液中添加不同浓度的表皮生长因子(EGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对水牛卵母细胞体外成熟和凋亡的影响。结果表明:(1)添加各种浓度的EGF(10,20,30,50,100 ng/mL)均可以提高水牛卵母细胞的成熟率,降低卵母细胞的凋亡率,其中50 ng/mL EGF有显著影响(P<0.05);(2)添加各种浓度的IGF-1(10,30,50,100 ng/mL)均能提高水牛卵母细胞体外成熟率,降低卵母细胞的凋亡率,以30 ng/mL效果明显(P<0.05);(3)添加20 ng/mL EGF+30ng/mL IGF-1组卵母细胞体外成熟率和凋亡率分别高于和低于单独添加IGF-1和EGF组。 相似文献
19.
《黑龙江畜牧兽医》2020,(4)
为了探讨漏芦乙醇提取物对奶牛乳腺上皮细胞泌乳信号通路的影响,试验以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,先利用CASY细胞活力分析仪检测漏芦乙醇提取物(质量浓度分别为25,50,100,200,400μg/mL)作用于奶牛乳腺上皮细胞后乳腺上皮细胞的活力和增殖能力,选择添加对细胞生长增殖不受抑制即对细胞无毒性的漏芦乙醇提取物浓度来研究其对奶牛乳腺上皮细胞泌乳信号通路信号分子表达的影响。采用确定浓度的漏芦乙醇提取物处理细胞,然后用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测奶牛乳腺上皮细胞泌乳信号通路关键信号分子信号转导与转录激活因子5(STAT5)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)和葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)基因的mRNA表达水平,以及采用Western-blot技术检测奶牛乳腺上皮细胞泌乳信号通路关键信号分子的蛋白质表达水平。结果表明:较高剂量(200,400μg/mL)的漏芦乙醇提取物显著抑制了奶牛乳腺上皮细胞活力及增殖能力(P0.05),因此选择25,50,100μg/mL的漏芦乙醇提取物来研究其对乳腺上皮细胞泌乳信号通路信号分子表达的影响;25,50,100μg/mL的漏芦乙醇提取物可显著提高细胞泌乳信号通路信号分子STAT5、mTOR、SREBP1、AKT1、GLUT1基因的mRNA表达水平(P0.05)及p-STAT5、p-mTOR、SREBP1、p-AKT1、GLUT1蛋白质表达水平(P0.05),但对PPARγ基因的mRNA表达及蛋白质的表达无显著影响(P0.05)。说明漏芦乙醇提取物能通过调节泌乳信号通路关键信号分子的表达,进而促进奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白、乳脂和乳糖的合成。 相似文献