醋酸甲孕酮单克隆抗体的制备与鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

蔡小丽  王权  王敏  王希春  吴金节 《畜牧与兽医》2009,41(9)

用人工合成的醋酸甲孕酮-牛血清白蛋白(MPA-BSA)作为抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术筛选得到1株稳定分泌醋酸甲孕酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株4C11A3B6,该细胞株经体外传代和冻存复苏后抗体分泌稳定。间接ELISA测定培养上清效价为1∶640,诱生腹水效价为1∶2.56×106。经鉴定:杂交瘤细胞分泌的抗体亚型为IgG2а。竞争抑制ELISA(ciELISA)检测显示其IC50为22 ng/mL,与常见抗生素及结构类似物的交叉反应小,表明该单抗具有较好的敏感性和特异性。  相似文献   

鸡肌肉组织中左氧氟沙星残留ELISA检测方法的研究     

蒋兴东  陈玉飞  涂健  彭开松  王涓  樊磊  祁克宗 《中国兽药杂志》2008,42(5)

用N-羟基琥珀酰亚胺法把左氧氟沙星(LVL)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫抗原,免疫新西兰大白兔得到LVL的多克隆抗体,建立了LVL间接竞争ELISA方法.结果表明:抗LVL血清效价达1: 212以上,得到标准曲线的线性回归方程为y=-0.289 4x+0.049 5(R2=0.987 8),50%抑制浓度(IC50)为64 ng/mL,最低检测限(LOD)为10 ng/mL,标准曲线的线性范围为10～1 000 ng/mL.批内变异系数为3.51%～7.46%,批间变异系数为8.66%～11.89%,鸡肌肉中的LVL添加浓度在10～1 000 ng/ml范围内时,回收率为73.5%～84.36%.本试验建立的ELISA方法能够满足左氧氟沙星兽药残留检测要求.  相似文献   

二氟沙星残留检测的Ci-ELISA方法建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

潘孝成  祁克宗  朱良强  赵瑞宏 《中国畜牧兽医》2007,34(10):127-129

以合成的二氟沙星（DIF）人工抗原为基础，制备出了高效价抗DIF血清（1∶29×104），并建立了DIF间接竞争酶联免疫吸附测定法(Ci-ELISA法)。标准曲线的线性回归方程为y=-0.223x+0.9631(r=0.9929)，中值（I50）=119.21 ng/ml，最低检测限（LOD）=1.14 ng/ml，线性范围为1.14~10000 ng/ml，方法的平均批内变异系数（CV）为4.83%,平均批间CV为10.69%。DIF以浓度15~10000 ng/ml在鸡肉中添加时，回收率为81.24%~90.64%，变异系数为8.18%~11.75%。  相似文献   

牛奶中孕酮直接竞争ELISA检测方法的建立     

高维明  张洪友  夏成  李徐延  徐闯 《中国兽医杂志》2009,45(8)

采用直接竞争ELISA方法检测牛奶中孕酮含量.采用碳化二亚胺法,应用辣根过氧化物酶(HRP)标记11-α羟基孕酮琥珀酸酯(11α-OH-P4-HS),制备孕酮酶标抗原;酶标抗原与牛奶样品中的孕酮共同竞争结合固相包被的孕酮单克隆抗体,建立直接竞争ELISA反应体系.试验结果表明,最佳抗体包被浓度为1∶2 000,最佳酶标抗原工作浓度为1∶16 000,建立的标准曲线为y=-2.4598x+0.999(R2=0.996),牛奶中孕酮检测范围0.12～40 ng/mL,最低检测量为0.12 ng/mL,批内和批间变异系数分别为1.63%和2.49%.成功建立了可用于牛乳中孕酮快速检测的直接竞争ELISA方法.  相似文献   

鸡肌肉组织中左氧氟沙星兽药残留ELISA检测方法的研究     

蒋兴东 《中国兽药杂志》2008,42(5):5-10

用N-羟基琥珀酰亚胺法把左氧氟沙星（LVL）与牛血清白蛋白（BSA）偶联制备免疫抗原,免疫新西兰大白兔得到LVL的多克隆抗体,建立了LVL间接竞争ELISA方法。结果表明：抗LVL血清效价达1∶212以上,得到标准曲线的线性回归方程为y=-0.289 4x＋0.049 5（R2=0.987 8）,50%抑制浓度（IC50）为64 ng/mL,最低检测限（LOD）为10 ng/mL,标准曲线的线性范围为10～1 000 ng/mL。批内变异系数为3.51%～7.46%,批间变异系数为8.66%～11.89%,鸡肌肉中的LVL添加浓度在10～1 000 ng/ml范围内时,回收率为73.5%～84.36%。本试验建立的ELISA方法能够满足左氧氟沙星兽药残留检测要求。  相似文献   

SPR生物传感器快速检测醋酸甲羟孕酮的初步应用研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

黄强力  王晶钰  韩雪清  林祥梅  王慧煜  梅琳 《中国畜牧兽医》2010,37(3):102-104

动物源性食品中残留的醋酸甲羟孕酮(medroxy progesterone acetate,MPA)对人类健康有潜在的危害。利用SPR生物传感器快速检测MPA,对抗原的固定条件、抗体的浓度及芯片再生条件进行了优化,同时对抗体的稳定性及特异性进行了分析。结果显示,该方法检测的最低限约为1 ng/mL。利用模拟标本进行平行测试表明,其与进口ELISA检测试剂盒结果基本一致。SPR生物传感器检测MPA,单个样品的检测时间小于5 min,非常适合现场的快速检测,具有广泛的应用前景。  相似文献   

氯霉素竞争ELISA检测方法的研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

田素娟  董斌  袁茵  林月霞  段涛  孟民杰  黄树林 《中国预防兽医学报》2009,31(7)

用抗氯霉素的MAb 2G2建立了检测氯霉素的竞争ELISA,对主要影响因素进行了研究,其回归方程为y=0.3522x+0.5939,相关系数为RZ=0.9906,检测线性范围为0.098 ng/mL～25 ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为1.848 ng/mL.检测限为0.135 ng/mL.与氯霉素琥珀酸钠交叉反应率为143%,与其它结构类似物和常见抗菌素的交叉反应率均小于0.01%.批内和批间变异系数分别为4.98%和9.42%,牛奶样的平均添加回收率为101.31%.所建立的检测氯霉素竞争ELISA法,符合检测氯霉素残留的要求,为氯霉素残留快速检测试剂盒的研制奠定了基础.  相似文献   

鸡肌肉组织中氯霉素残留ELISA检测方法的研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

魏书林  史为民  彭莉  沈建忠  原蕾  崔伟 《中国兽医杂志》2004,40(9):7-9

本文利用活化酯法合成了氯霉素抗原 ,作为免疫原免疫新西兰大耳白兔得到氯霉素的多克隆抗体 ,建立了氯霉素间接竞争酶联免疫检测方法 ,进行了药物交叉反应性试验 ,并对鸡肌肉进行添加回收试验。结果显示抗体效价可达 1∶ 6 4 0 0 0 0 ,IC50 为 1.3ng/ ml,最低检测限达到 0 .0 5 ng/ ml,线性检测范围为 0 .1～ 36 .4 5 ng/ ml。在 0 .5、1、2 .5、5 ng/ g浓度水平添加到鸡肌肉组织中 ,测得回收率为 5 5 .4 %～ 119.0 % ,变异系数为 4 .3%～ 10 .4 %。该 EL ISA方法快速、灵敏、方便 ,满足了氯霉素残留检测的要求。  相似文献   

达氟沙星间接竞争ELISA检测方法的建立     

李振华  斯坎达尔·买合木提  魏东  张乃生 《中国畜牧兽医》2007,34(6):79-81

将达氟沙星（danofloxacin, DFLX）与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶联分别作为免疫原与包被原, 达氟沙星为竞争的半抗原，建立间接竞争ELISA检测方法。试验结果表明,理想的包被抗原浓度为1.25 μg/L, 多抗(DFLX-PcAb)工作浓度为1∶10000,酶标二抗的工作浓度为1∶4000,最适检测范围为0.1～10 ng/L,最低检测限为0.2 ng/L, 批内和批间变异系数分别为3.81%和6.25%。得到回归方程y=0.7975-0.125x（R2=0.989）和标准曲线，从而建立了DFLX的快速检测残留的间接竞争酶联免疫吸附试验（ci-ELISA）。  相似文献   

家禽饲料中玉米赤霉烯酮化学发光酶联免疫分析方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

熊挺  蒋蔚  韩阳瑞  龙梦瑶  凌娇  王权  孙卫东 《畜牧与兽医》2018,(2):122-130

为了建立比较间接竞争化学发光酶联免疫分析法(ic-CLEIA)与直接竞争化学发光酶联免疫分析法(dc-CLEIA)检测家禽饲料中玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)的方法,采用二因子交叉试验优化确定最佳包被原浓度和抗体稀释度,建立ic-CLEIA和dc-CLEIA。结果显示:icCLEIA在0.05~5 ng/m L范围内线性关系良好,线性回归方程为y=-0.383 5x+0.417 9(R2=0.994 6),灵敏度(IC50)为0.611 ng/m L,检出限(LOD)为15 pg/m L,平均批内和批间变异系数为1.79%和1.02%,家禽饲料添加样品回收率为91.9%~112.1%,变异系数小于10.5%;dcCLEIA在0.025~5 ng/m L范围内线性关系良好,线性回归方程为y=-0.386 5x+0.334 1(R2=0.991 8),灵敏度(IC50)为0.372 ng/m L,检出限(LOD)为3 pg/m L,平均批内和批间变异系数为1.16%和1.20%,添加样品回收率为87.3%~119.3%,变异系数小于9.8%。结果表明:两种方法精确,灵敏度高,均可作为定量检测ZEN的有效手段;与ic-CLEIA相比,dc-CLEIA更适用于检测家禽饲料中的ZEN。  相似文献   

氯霉素间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法的建立   总被引：3，自引：0，他引：3  

周斌  石德时  覃雅丽  王桂枝 《中国预防兽医学报》2000,(Z1)

以人工合成的氯霉素－牛血清白蛋白（ＣＡＰ－ＢＳＡ）为包被抗原,氯霉素（Ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ,ＣＡＰ）为竞争的半抗原,两者与一定量的抗ＣＡＰ单抗（ＣＡＰ－ＭｃＡｂ）反应。实验结果表明,理想的包被抗原浓度为１．２５μｇ／ｍｌ,抗ＣＡＰ－ＭｃＡｂ工作浓度为１：１２０００,酶标二抗工作浓度为 １： ５０００,可测最适范围为 １ｎｇ／ｍｌ－１００ｎｇ／ｍｌ,最小检测量为０．１ｎｇ／ｍｌ,批内和批间变异系数分别为３． ６２％和 ５． １９％。得到回归方程 ｙ ＝１．２７３０－ ０．６７４５ｘ（ｒ２＝ ０． ９７７９）和标准曲线,从而建立了快速定量测定 ＣＡＰ含量的间接竞争酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）。整个测定时间为６小时。  相似文献   

恩诺沙星在鸡肉组织中残留的ELISA检测方法研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

JIANG Xing-dong  陈玉飞  TU Jian  彭开松  WANG Juan  祁克宗  ZHU Liang-qiang 《畜牧与兽医》2008,40(8)

分别用N-羟基琥珀酰亚胺法和氯甲酸异丁酯法把恩诺沙星(ENR)与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原和包被抗原,免疫新西兰大白兔得到ENR的多克隆抗体,建立了ENR间接竞争ELISA方法。结果表明:抗ENR血清效价达达1∶212以上,得到标准曲线的线性回归方程为Y=-0.2341X+0.1193(R2=0.9878),中值(IC50)为36 ng/mL,最低检测限(LOD)为10 ng/mL,标准曲线的线性范围为10~1000 ng/mL。批内变异系数为3.18%~7.64%,批间变异系数为9.69%~11.94%,鸡组织中的ENR的回收率为76.5%~89.42%。本试验建立的ELISA方法能够满足恩诺沙星兽药残留检测要求。  相似文献   

孔雀石绿间接竞争ELISA检测方法的建立   总被引：1，自引：1，他引：0  

王权  郭德华  李健  蒋蔚  赵新宇 《畜牧与兽医》2010,42(2)

采用无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)单克隆抗体建立了水产品中孔雀石绿(Malachite green,MG)残留的间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法。结果表明,LMG-McAb最佳稀释倍数为1∶80 000,包被抗原最佳质量浓度为0.80μg/mL;竞争反应时的LMG理想稀释液为40%乙腈水溶液;标准曲线呈线性相关,相关系数R2=0.9823,最适检测范围1 ng/mL~256 ng/mL,最低检测限为1.29 ng/mL,批内和批间变异系数分别为4.307%和4.566%;鳗鱼肉样的平均添加回收率为90%~110%;该检测方法与隐性结晶紫、孔雀石绿、结晶紫的交叉反应(CR%)分别为40.67%、13.50%和5.89%,与其他抗生素无交叉反应。  相似文献   

建立水产品中己烯雌酚残留ELISA检测方法     

赵新宇  王权  闫叶娜 《中国畜牧兽医》2010,37(10):43-47

本试验利用己烯雌酚(DES)单克隆抗体,通过优化反应条件,加标回收试验,确定ELISA检测方法相关参数,建立了己烯雌酚残留的酶联免疫吸附(ELISA)检测法。试验结果显示,包被抗原最佳浓度为2μg/mL,DES单克隆抗体最佳稀释倍数为1∶3×104;标准曲线呈线性相关,相关系数R2=0.9956,IC50=1.103 ng/mL,最适检测范围为0.125~128 ng/mL,检测敏感度为0.077 ng/g;批内和批间变异分别为6.14%和7.48%;鳝鱼肌肉组织的加标回收率为77.6%~94.6%;特异性试验结果表明,该单抗与己烯雌酚单羧丙基醚交叉反应率为112.7%,与其它水产禁用药物交叉反应率0.1%。  相似文献   

猪圆环病毒2型特异性IgA间接ELISA检测方法的建立与初步应用     

刘雨丰  马攀攀  陈陆  杨霞  姚惠霞  王川庆  赵军 《中国预防兽医学报》2012,34(4):301-304

为检测猪圆环病毒2型(PCV2)特异性IgA抗体,本研究以纯化的PCV2 Cap蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗猪IgA为二抗,建立检测PCV2特异性IgA抗体的间接ELISA方法.确定最佳抗原包被浓度为200 ng/孔,HRP标记羊抗猪IgA的最佳稀释度为1∶30 000.所建立方法与抗猪瘟病毒等病原的抗体间无交叉反应.结果表明该方法具有较好的特异性,组内和组间重复性试验的变异系数介于0.12％～5.47％,具有较好的可重复性.该方法为进一步研究猪感染PCV2和PCV2疫苗免疫后特异性黏膜IgA水平及进行黏膜免疫评价提供了有效的检测方法.  相似文献   

苯乙醇胺A单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立   总被引：1，自引：1，他引：0  

项自来  王玲  夏苏干  邹辉  顾建红  袁燕  刘学忠  刘宗平  卞建春 《中国畜牧兽医》2019,46(3):849-857

为制备苯乙醇胺A(phenylethanolamine A,PA)单克隆抗体,建立一种针对苯乙醇胺A的快速、简便、灵敏度高的检测方法,本试验采用重氮化法将制备的苯乙醇胺A衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联作为免疫原和包被原。利用弗氏佐剂充分乳化免疫原(PA-BSA),按常规免疫程序免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠,选择血清抗体效价较高的小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞以PEG法进行细胞融合。结果显示,经3次细胞亚克隆筛选后,最终筛选出一株可稳定分泌抗苯乙醇胺A单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为D6H8,利用此细胞以小鼠体内诱生法制备抗体。经鉴定,D6H8腹水抗体亚型为IgG1,轻链为κ链;纯化后的抗体与沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、盐酸异丙肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素均无明显的交叉反应(CR<0.18%),表明该抗体特异性良好。利用此抗体建立针对苯乙醇胺A药物残留检测的间接竞争ELISA方法,结果表明,腹水抗体效价为1∶12 800,猪肉中苯乙醇胺A添加浓度在5～1 000 ng/mL时线性关系良好,标准工作曲线为y=0.3861x-0.1845 (R^2=0.990),其IC₅₀为58.88 ng/mL,LOD为3.83 ng/mL,回收率在85.96%～104.32%之间。综上所述,本试验成功建立了检测苯乙醇胺A药物残留的间接竞争ELISA方法,该方法灵敏度高、稳定性较好。  相似文献   

猪圆环病毒2型Cap蛋白ELISA检测方法的建立及初步应用     

廖园园 《中国兽药杂志》2012,46(6):1-4

将杆状病毒表达系统表达并经梯度离心纯化的PCV2Cap蛋白作为标准品,利用双抗夹心法建立了针对猪圆环病毒2型Cap蛋白的ELISA检测方法,并应用于圆环病毒2型基因工程疫苗的质控。结果表明,多抗最适包被浓度为1μg/mL,最佳封闭液为1％BSA,最佳单抗反应浓度为2μg／mL,反应时间60min,最佳二抗使用稀释度1：40000,反应时间60min。该方法与St9细胞、BSA和其他猪病病毒抗原之间无交叉反应,最低检测抗原量为5ng。  相似文献   

恩诺沙星完全抗原的合成及兔源多抗血清的制备     

刘莉  张家禾  袁维峰  孟婷 《中国畜牧兽医》2014,41(6):38-41

为了合成恩诺沙星（enrofloxacin,EFLX）完全抗原,制备兔源多克隆抗体血清,试验通过活化酯法将小分子的EFLX偶联到牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白(OVA)上,形成偶联物EFLX-BSA和EFLX-OVA,以EFLX-BSA为免疫原免疫兔,以EFLX-OVA为检测原通过ELISA方法检测兔血清效价。结果表明,免疫兔血清效价都在1∶51200以上,其中2号兔效价最高,达到1∶204800,敏感性好,半数抑制浓度IC₅₀为169.91 ng/mL,检测范围为37.52～302.31 ng/mL。本试验成功制备了EFLX完全抗原,获得了敏感的兔源多克隆抗体血清,为以后ELISA试剂盒和胶体金试纸条的研发奠定了基础。  相似文献   

禽类食品中磺胺二甲嘧啶间接竞争ELISA检测方法的建立     

龚云飞  王唯芬  张明洲  陈宗伦  奚茜  李沐洁 《中国畜牧兽医》2011,38(6):55-59

试验采用高碘酸钠法合成了磺胺二甲嘧啶的人工SMZ-BSA和SMZ-OVA,紫外扫描和SDS-PAGE电泳鉴定证明抗原耦联成功。在此基础上,建立间接竞争ELISA法,将磺胺二甲嘧啶添加到鸡蛋和鸡肉样品中,分别用ELISA和高效液相色谱(HPLC)分析方法检测。结果表明,在0.1~50 ng/mL浓度范围内,方法的检测灵敏度IC₁₀=0.18 ng/mL。鸡蛋实际样品的检出限可达到2.0 ng/g,鸡肉实际样品检出限可达到5.0 ng/g。研究建立的ELISA方法与HPLC方法具有较高的相符性,可用于鸡蛋与鸡肉样品中磺胺二甲嘧啶残留含量分析的大量样品的筛查。  相似文献