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囊虫病循环抗原酶联免疫试剂检测盒的研制 总被引：7，自引：1，他引：6
以部分纯化囊虫抗原免疫 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠,取其脾细胞与 Ｓ Ｐ２／０ 细胞融合制备抗囊虫循环抗原（ Ｃ Ａ） Ｍｃ Ａｂ ,共获得 ８ 株分泌抗囊虫 Ｃ Ａ Ｍ ｃ Ａｂ 细胞株。经鉴定,筛选出组合后能获得最佳检测效果的 Ｃ Ａ Ｍ ｃ Ａｂ细胞株 Ｍ ｃ Ａｂ １ Ｃ７（包被）和 Ｈ Ｒ Ｐ１ Ｂ５ 作为检测用的 Ｍ ｃ Ａｂ,用其建立了检测囊虫 Ｃ Ａ 的双抗体夹心 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ方法,并研制了囊虫病 Ｃ Ａ 检测试剂盒。试剂盒用于检测囊虫病 Ｃ Ａ,敏感、特异、快速、简便,囊虫病血清 Ｃ Ａ的检出率为 ９１．４３％ ,脑脊液 Ｃ Ａ 的检出率为 ９４．４４％ 。 相似文献
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二甲苯胺噻唑对绵羊血液及脑脊液中乙酰胆碱的影响 总被引：3，自引：1，他引：2
用荧光分光光度计的方法研究了二甲苯胺噻唑（静松灵）对乙酰胆碱（ＡＣＨ）的影响，肌注２．５ｍｇ／ｋｇ该药后，血液及脑脊液中ＡＣＨ浓度呈上升趋势，于２．５小时达峰值，血液ＡＣＨ由０时７．９６５±０．４１８ｎｇ／ｍｌ２．５小时的４３．９３９±１．３０７ｎｇ／ｍｌ（ｎ＝５，Ｐ＜０．０１），ＡＣＨ浓度增加了４．５倍，脑脊液ＡＣＨ则由０时的１２．７２２±１．３４７ｎｇ／ｍｌ增７１、９５４±２．２５７ｎｇ／ｍｌ 相似文献
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竞争间接ELISA检测谷物饲料中的玉米赤霉烯酮 总被引：5，自引：0，他引：5
应用抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体（ＺＥＮ－ＭｃＡｂ）建立了竞争间接ＥＬＩＳＡ，用以检测玉米、小麦、饲料中的玉米赤霉烯酮（ＺＥＮ），最低检出量为０．０５ｎｇ／ｍＬ检测范围为０．０５～５００ｎｇ／ｍＬ。检测掺合ＺＥＮ（２５～５００ｎｇ／ｇ）的小麦、饲料、玉米样品，平均回收率，玉米为１０５．８％、小麦为９０％、饲料为１０３．９％；平均批内和批间变异系数，玉米为３．８％、５．８％，小麦为１２．７％、２８％，饲料为１５．２％、６．８％。对玉米、小麦、饲料自然样品检测，竞争间接ＥＬＩＳＡ的检出率高于薄层色谱（ＴＬＣ），检测程序简易快速。 相似文献
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猪核移植重组胚胎的发育能力 总被引：1，自引：0，他引：1
以ＭｃＧｒａｔｈ－Ｓｏｌｔｅｒ（１９８３）提供的去（注）核方法，将猪胚胎的单个卵裂球细胞注入去核的次级成熟卵母细胞，借助电融合的方法（ＡＣ；５Ｖ，１．５ＭＨｚ，１２－１５ｓ；ＤＣ：２ｋＶ／ｃｍ，４０μｓ。电激活／融合液：０．３ｍｏｌ／Ｌ甘露醇＋－．１ｍｍｏｌ／ＬＭｇＳＯ４＋０．１ｍｍｏｌＣａｃＬ２＋７．５ｍｇ／ｍｌＣＣＢ）融入受体胞质构成重级胚，体外培养（培养液为改衣ＴＣＭ－１９９；培养条件为５％ 相似文献
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新生反刍动物血浆cAMP和cGMP水平变化初探 总被引：2，自引：0，他引：2
初步观察了６头黑白花犊牛和３只湖羊羔生后２４ｈ内血浆环腺苷酸（ｃＡＭＰ）和环鸟苷酸（ｃＧＭＰ）水平变化。结果表明：犊牛出生时ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ分别为１．１２±０．１０ｐＭ／ｍｌ和０．８７±０．０４ｐＭ／ｍｌ，羔羊生后１ｈ分别为１．２０±０．０１ｐＭ／ｍｌ和０．３９±０．０１ｐＭ／ｍｌ，在生后２～４ｈ内犊牛和羔羊ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ均呈上升趋势，以后在相对高水平波动直至２４ｈ，ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ比值生后较高，２ｈ内下降，以后处于较低的比值直至２４ｈ 相似文献
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泌乳曲线可用一般方程Ｙ＝Ａ１（ｔ）２（ｔ）来进行数学表述，方程中Ａ为一个正纯数，（ｔ）是单调增函数，１＝１为其渐近线，２是一个单调减函数，它具有单位起始值，２＝０为其渐近线。可供１．选择的函数有：１—ｂ。ｅ－ｂ１ｔ（Ｍｉｔｓｃｈｅｒｌｉｃｈ）、１／［１＋ｂ。／（ｂ１＋ｔ）］（Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ－Ｍｅｎｔｅｒ）、１／［１＋ｂ０／（ｂ１＋ｔｂ２）］（一般动态饱和）、１／（１＋ｂ。ｅ－ｂｔ）（罗辑斯谛）、ｂ。ｅｘｐ［（—Ｉｎｂ。）（１—ｅ－ｂ１ｔ）］（Ｇｏｍｐｅｒｔｚ）和［１＋ｔａｎｈ（ｂ。＋ｂ１ｔ］／２（双曲正切）；可供２选用的函数有：ｅ－ｅｔ（指数）和１／（１＋ｃｔ）（倒直线）。于是可得到１２种模型，且Ｙ＝Ａｔｂｅ－ｅｔ（Ｗｏｏｄ模型）适合于２３头试验牛整个泌乳期内的数据。Ｍｉｔｓｃｈｅｒｌｉｃｈ×数式、Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ－Ｍｅｎｔｅｎ×指数式、罗辑斯谛×指数式、罗辑斯谛×倒直线式及Ｗｏｏｄ模型都很适配。有了这些模型，达到产奶高峰的时间、最大产奶量、整个泌乳期的总产奶量以及在衰减期中点的相对衰减等的表达式都得到了。Ｍｉｔｓｃｈｅｒｌｉｃｈ×指数式模型一般比Ｗｏｏｄ模型适配得更好，与Ｗｏｏｄ模型不同的是，它对所? 相似文献
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反相HPLC测定猪血浆中隐丹参酮及其活性代谢物的血药浓度 总被引：3，自引：0，他引：3
本试验建立了用反相ＨＰＬＣ同时进行猪血浆中隐丹参酮（ＣＴ）及其活性代谢物丹参酮ⅡＡ（Ｔｓ－ⅡＡ）的快速定量检测方法。采用ＹＷＧＣ１８键合相柱作为分析柱，甲醇－水（８５１５）为流动相，检测波长２５４ｎｍ，二苄基为内标。平均回收率分别为ＣＴ：８８．０９％，Ｔｓ－ⅡＡ：８８．５１％；原药及代谢物的检测限为１０ｎｇ，血浆中最低检出浓度为１６ｎｇ／ｍｌ。日内、日间的变异系数为１．５４％～６．２８％，血浆浓度０．０４～２．５μｇ／ｍｌ范围内呈线性关系，ｒ＝０．９９１４（ＣＴ）及０．９９８８（Ｔｓ－ⅡＡ）。用此法对５头猪进行了ｉｖＣＴ后的ＣＴ及Ｔｓ－ⅡＡ的血浆浓度测定，得出了药时曲线数据。 相似文献
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分泌抗猪伪狂犬病毒(鄂A株)单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 总被引：5，自引：1，他引：4
将本室分离鉴定的猪伪狂犬病毒（Ｐｒｖ）鄂Ａ株纯化后免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取免疫鼠脾细胞与经８氮鸟嘌呤（８－ＡＧ）驯化的ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合。经间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）筛选,挑选强阳性孔进行亚克隆,获得５株能稳定分泌伪狂犬病毒单克隆抗体（Ｐｒｖ－ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株,分别命名为４１８、４８３、５７６、６０３、７４４。经体外连续传代及反复冻存、复苏,杂交瘤细胞均能稳体地分泌ＭｃＡｂ。培养上清液及小鼠腹水ＥＬＩＳＡ效价分别为２－５～２－７和１０－５～１０－１０。各株分泌的ＭｃＡｂ不与疱疹病毒科中的ＤＰＶ、ＩＬＴＶ、ＩＢＲＶ及ＰＰＶ发生交叉反应。阻断试验结果显示阻断率均大于５０％。其中６０３、７４４分泌的ＭｃＡｂ对用ＰＲＶ致敏的乳胶具有凝集特性。相加ＥＬＩＳＡ测定证实６０３、４８３、７４４特异性作用同一抗原位点或作用相关极为密切的抗原位点,另４种ＭｃＡｂ作用位点有部分相关性。 相似文献
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锥-46的耕牛血药浓度反相HPLC测定方法探索 总被引：1，自引：0，他引：1
用惠普ＨＰ１０５０四元泵、ＨＰ１０４０Ｍ二极管阵列检测器和色谱柱ＥｃｏｎｏｓｐｈｅｒｅＣ（１８）（２５０×４．６ｍｍ，５μ）探索了锥－４６的耕牛血药浓度测定条件。检测波长２５２±２ｎｍ，参比波长５５０±２ｎｍ。流动相为甲醇：乙腈：重蒸水＝２０：２５：５５（Ｖ／Ｖ），每３００ｍｌ加入二乙胺１０００μｌ，用磷酸调节至ｐＨ３．５，流速０．６ｍｌ／分。血浆中的锥－４６用磷酸酸化至ｐＨ２．４的甲醇溶液提取，平均提取效率达９９．３３±２．２８％。提取物在６０℃下减压浓缩。平均回收率为９９．４６±６．０７％。本法最低检测浓度为０．１μｇ／ｍｌ。在锥－４６浓度为０．１～１０μｇ／ｍｌ范围内线性良好（相关系数ｒ＝０．９９９９，峰面积＝０．６９２８＋１．５８１×锥－４６ｎｇ数）。锥－４６基本上能与血浆中的杂质成分完全分离。已应用于耕牛体锥－４６的药物代谢动力学的研究。 相似文献
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将半抗原醋酸甲孕酮（MPA）衍生物与牛血清白蛋白(BSA)偶联后，作为包被原与游离的醋酸甲孕酮竞争抗MPA多克隆抗体，通过该模式建立间接竞争ELISA方法检测MPA的残留量。试验结果表明：理想的包被抗原为0.625 μg/ml,抗体的工作浓度为1∶8000，标准曲线在1 ～50 ng/ml之间线性关系较好，最低检测限0.1 ng/ml, 得回归方程y=-1.1479x+0.9426(r2=0.9679),批内和批间变异系数分别为5. 35%、10. 89%。 相似文献
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孔雀石绿间接竞争ELISA检测方法的建立 总被引：1，自引：1，他引：0
采用无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)单克隆抗体建立了水产品中孔雀石绿(Malachite green,MG)残留的间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法。结果表明,LMG-McAb最佳稀释倍数为1∶80 000,包被抗原最佳质量浓度为0.80μg/mL;竞争反应时的LMG理想稀释液为40%乙腈水溶液;标准曲线呈线性相关,相关系数R2=0.9823,最适检测范围1 ng/mL~256 ng/mL,最低检测限为1.29 ng/mL,批内和批间变异系数分别为4.307%和4.566%;鳗鱼肉样的平均添加回收率为90%~110%;该检测方法与隐性结晶紫、孔雀石绿、结晶紫的交叉反应(CR%)分别为40.67%、13.50%和5.89%,与其他抗生素无交叉反应。 相似文献
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将达氟沙星（danofloxacin, DFLX）与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶联分别作为免疫原与包被原, 达氟沙星为竞争的半抗原，建立间接竞争ELISA检测方法。试验结果表明,理想的包被抗原浓度为1.25 μg/L, 多抗(DFLX-PcAb)工作浓度为1∶10000,酶标二抗的工作浓度为1∶4000,最适检测范围为0.1～10 ng/L,最低检测限为0.2 ng/L, 批内和批间变异系数分别为3.81%和6.25%。得到回归方程y=0.7975-0.125x（R2=0.989）和标准曲线，从而建立了DFLX的快速检测残留的间接竞争酶联免疫吸附试验（ci-ELISA）。 相似文献
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以ＳＰＦ鸡抗新城疫病毒ＩｇＧ为包被抗体，兔抗ＮＤＶ ｖｅｒｏ细胞培养纯化毒ＩｇＧ为第二抗体，酶标记羊抗兔ＩｇＧ为指示抗体，建立了检测ＮＤＶ的间接夹心ＥＬＩＳＡ，并分别以兔抗ＮＤＶ鸡胚毒纯化ＨＮ糖蛋白，Ｆ糖蛋白ＩｇＧ为第二抗体进行了比较试验，并对攻毒鸡外分泌物样品进行了病原检测。 相似文献
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检测牛乳中三聚氰胺的间接竞争ELISA方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
利用戊二醛法合成的三聚氰胺—钥孔匙锥蓝蛋白(KLH)为免疫原制得三聚氰胺的多克隆抗体,并在此基础上以重氮法制备的三聚氰胺—牛血清白蛋白为包被抗原建立了检测三聚氰胺的间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法。结果表明,理想的包被抗原质量浓度为0.8mg/L,抗三聚氰胺抗血清的稀释倍数为1:400,最适检测范围为0.03-10mg/L,最小检测量为0.01mg/L,批内与批间变异系数分别为1.952%和6.673%,回归方程为y=-0.4239-0.0933。本实验建立的三聚氰胺含量的间接竞争酶联免疫吸附试验(ci-ELISA)方法可用于牛乳样品中三聚氰胺残留的检测。 相似文献
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为满足口岸对南非II型口蹄疫检测、监测的需求,在对南非II型口蹄疫抗原表位分析及相关基因合成的基础上,进行融合蛋白pGEX—VP1-VP3的体外表达,采用柱上酶切方法制备VP1-VP3蛋白。将纯化VP1-VP3抗原包被96微孔板,分别优化抗原包被浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度,确定阴性临界值。经反复优化,建立的南非II型间接ELISA检测方法的最佳抗原包被浓度为6．4ug／ml,血清最佳稀释度为1：200,酶标二抗最佳稀释度为1：4000,阴性临界值（0D450）为0．562。检测样品判定标准为：OD450〉0．622为阳性,OD450〈0．502为阴性,0．502≤OD450≤0．622为可疑。特异性试验结果表明,所建立方法与其它血清型口蹄疫间无交叉反应。南非II型口蹄疫间接ELISA检测方法的建立为我国口岸口蹄疫检疫提供了新的查验方法。 相似文献
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为满足口岸对南非Ⅱ型口蹄疫检测、监测的需求,在对南非Ⅱ型口蹄疫抗原表位分析及相关基因合成的基础上,进行融合蛋白pGEX-VP1~VP3的体外表达,采用柱上酶切方法制备VP1~VP3蛋白。将纯化VP1~VP3抗原包被96微孔板,分别优化抗原包被浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度,确定阴性临界值。经反复优化,建立的南非Ⅱ型间接ELISA检测方法的最佳抗原包被浓度为6.4ug/ml,血清最佳稀释度为1:200,酶标二抗最佳稀释度为1:4000,阴性临界值(OD450)为0.562。检测样品判定标准为:OD450>0.622为阳性,OD450<0.502为阴性,0.502≤OD450≤0.622为可疑。特异性试验结果表明,所建立方法与其它血清型口蹄疫间无交叉反应。南非Ⅱ型口蹄疫间接ELISA检测方法的建立为我国口岸口蹄疫检疫提供了新的查验方法。 相似文献
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针对小反刍兽疫病毒核蛋白制备特异性的单克隆抗体,并对其进行生物学特性鉴定和初步应用。以纯化的Bacmid-PPRV-N重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的致敏脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG作用下融合,获得单克隆抗体,并通过染色体技术等方法研究其生物学特性,将其作为竞争单抗,Bacmid-PPRV-N重组蛋白作为检测抗原建立竞争ELISA检测方法。结果表明:经克隆和间接ELISA筛选,获得了2株能稳定分泌抗小反刍兽疫病毒N蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5B11和3H10-3B8。生物学特性鉴定试验表明:5B11和3H10-3B8抗体类型和亚类均为IgG2b;5B11单抗腹水的效价达1∶819 200,3H10-3B8达1∶12 800;血清学试验证明2株单抗均能与Bacmid-PPRV-N重组蛋白抗原结合,具有高度的特异性;相加ELISA试验结果显示,5B11和3H10-3B8 2株单克隆抗体分别识别N蛋白上不同的抗原位点;2株杂交瘤细胞的染色体均为99～104。应用建立的c-ELISA检测方法对222份血清样品进行PPRV抗体的检测,与参考试剂盒比较得到98.20%的符合率。本研究获得了2株能稳定分泌抗PPRV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以单抗5B11作为竞争抗体建立了PPRV的c-ELISA检测方法。 相似文献
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鸡传染性支气管炎ELISA抗体检测试剂盒的研制 总被引：1，自引：0，他引：1
采用加蔗糖垫离心纯化鸡传染性支气管炎病毒(IBV)制备抗原，用提纯的IBV抗原包被微量板，建立了检测鸡传染性支气管炎(IB)抗体的ELISA试剂盒。抗原、被检血清和酶标结合物的最佳工作浓度分别为10ug／ml、1：200和1：3200。与IDEXX试剂盒相比，其敏感性、重复性、特异性均接近国外同类产品水平。对SPF鸡血清、实验免疫与攻毒的SPF鸡血清进行检测，结果表明所建立的ELISA特异性为95．6％，与IDEXX试剂盒符合率为95．6％。用于检测抗IBV特异性IgG抗体发现在免疫接种IB弱毒苗后，第4天即可检测到IgG抗体，峰值在第3周。试验鸡在通过滴鼻、点眼途径人工感染IBV强毒后，第5天抗体滴度明显上升。我们认为，该法是目前我国SPF鸡质量监测、养鸡生产中进行IB监测较好的方法。 相似文献