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巴西固氮螺菌Yu62 glnB基因和glnZ基因的克隆和序列分析 总被引：4，自引：0，他引：4
ｇｌｎＢ基因编码的ＰⅠⅠ蛋白在巴西固氮螺菌的固氮过程中起着非常重要的调控作用,而ｇｌｎＺ是与ｇｌｎＢ高度同源的基因,其产物ＰＺ可能也在固氮调控中起作用。本研究用ＰＣＲ法克隆了巴西固氮螺菌Ｙｕ６２ ｇｌｎＢ基因和ｇｌｎＺ基因。ＤＮＡ序列分析表明ｇｌｎＢ和ｇｌｎＺ这２个基因的编码区的长度都为３３６ｂｐ,编码１１２个氨基酸。将巴西固氮螺菌Ｙｕ６２菌株与标准菌株Ｓｐ７的ｇｌｎＢ基因和ｇｌｎＺ基因分别进行比 相似文献
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培养基铁浓度对不同非共生固氮菌株与小麦基因型联合固氮效率的影响 总被引：3，自引：0，他引：3
采用Ｓｐｅｒｍｏｓｐｈｅｒｅｍｏｄｅｌｓ测定５种培养基铁浓度下两株非共生固氮菌（巴西固氮螺菌ＮＯ４０和多粘芽孢杆菌）及两者的混合菌分别与两个小麦基因型（Ｇｉｚａ１６７和Ｓａｋｈａ８）的联合固氮效率，发现培养基的铁浓度对联合固氮效率具有显著的影响．若不考虑菌株间和小麦基因型间的差异，培养基铁浓度在２．５８３～１４．７１５ｍｇ／Ｌ时的联合固氮效率显著高于铁浓度为４２．８８３～１６６．３１ｍｇ／Ｌ；联合固氮效率在小麦基因型间未表现出显著差异，但在不同菌株之间差异极显著．表现为：巴西固氮螺菌＞混合菌＞多粘芽孢杆菌；联合固氮效率在培养基铁浓度与不同菌株之间存在明显的交互作用，巴西固氮螺菌对铁浓度的适应范围比多粘芽孢杆菌及混合菌广，在固氮高峰期巴西固氮螺菌与小麦基因型Ｇｉｚａ１６７组合的联合固氮效率在５种供试铁浓度下均达较高水平而未表现出显著的差异，巴西固氮螺菌与Ｓａｋｈａ８组合的联合固氮效率在铁浓度为２．５８３～４２．８８３ｍｇ／Ｌ时最高．说明巴西固氮螺菌ＮＯ４０对培养基中供铁水平的适应范围较广，因而具有良好的应用前景． 相似文献
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糖蜜草内生固氮菌IS-PCR和16S rRNA基因全序列分析 总被引：6，自引：0，他引：6
采用插入序列指纹图谱分析（IS-PCR）和16SrRNA基因全序列分析,对来源于优良牧草——糖蜜草Melinis minutiflora Beauv．内生固氮菌进行研究．结果表明,糖蜜草中分离的内生固氮菌与产脂固氮螺菌模式菌株DSM1691的插入序列指纹图谱存在着差异;来源于糖蜜草的4株菌紧密地聚在一起,与GenBank中已知产脂固氮螺菌Azospirillum lipoferum的16SrRNA基因全序列有97％的序列相似性．初步确定糖蜜草中分离的内生固氮菌为一新类群的内生固氮菌． 相似文献
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盆栽实验表明,分属于固氮菌属(Azotobacter)、固氮螺菌属(Azospirillum)、克雷伯氏属(Klebsiella)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)的9株玉米联合固氮菌均能在玉米苗根际繁殖并有固氮作用,且能提高植株的含氮量和干重。但不同菌株的固氮活性和玉米的联合固氮效果不同。 相似文献
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近年来,在对肺炎克氏杆菌(Klebsiella pneumoniae)nifA产物研究的基础上已建立了固氮基因调控的模型。固氮基因(nif)的表达受氮调节系统ntr和nifAL操纵子的两个系统的调控。本实验将固氮基因nifHDK启动子、aphA-6基因和rbcL3’构建aphA-6基因表达盒,克隆到pSK.KmR载体,将其转入到大肠杆菌中验证nifHDK启动子的表达活性。结果表明,只有在转入外源nifA基因时,nifHDK启动子才具有转录活性,aphA-6基因才能表达。验证了NifA蛋白和σ54因子是固氮基因的正向调节蛋白,为下一步固氮生物工程研究提供了理论基础。 相似文献
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《江苏农业科学》2017,(1)
对5株固氮与11株非固氮斯氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)基因组开展综合比较分析,从基因组水平上研究斯氏假单胞菌种内遗传多样性及其固氮基因岛进化机制。核心与元基因组分析发现,16个斯氏假单胞菌拥有的独特基因数占元基因数的46.37%;基于平均核苷酸相似度分析,这16个菌株被划分为11种不同的基因组变异型,表明斯氏假单胞菌基因组异质化程度高。固氮基因岛及进化树分析表明,5株固氮菌属于3种不同基因组变异型,它们的固氮基因岛及其侧翼序列保守性好,而且固氮酶基因进化树与菌株谱系进化树呈现高度一致性。据此推测,斯氏假单胞菌祖先可能通过水平基因转移的方式获得固氮基因岛,从而转变为固氮菌,但是在后期进化过程中,绝大部分固氮菌株丢失了固氮基因岛。 相似文献
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根际联合固氮菌对小麦生产的效应研究 总被引：2，自引：1，他引：2
在盆栽条件下,施用专性小麦根际联合固氮菌,提高了根际土固氮酶活性,植株叶绿素和全氮含量以及小玫生物产量,增加了小麦根际土和根表皮层中联合固氮菌数量;净固氮量比下不施菌增加４５－６０ｋｇ／ｈｍ＾２,与固氮效力较高的巴西固氮螺菌相当,但适应性较优。 相似文献
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北方水稻田固氮细菌资源的研究（简报） 总被引：4，自引：0，他引：4
1991～1994年，在国家自然科学基金的资助下，本组较系统地研究了北方稻田固氮细菌的资源分布。根据北方水稻的三个生态区（即华北半湿润单季稻作区、东北半湿润早熟单季稻作区和西北干燥单季稻作区）选取北京、哈尔滨、龙井（吉林）、沈阳、永宁（宁夏）、米泉（新疆）等地稻田取根际土样，以Dobereiner蔗糖苹果酸培养基为主，分离筛选出具有动快还原活性的细菌18种，经15N示踪技术测定均具明显的固氮能力。以大量法提取这些细菌的总DNA，进行Southern转移，并分别以含肺炎克氏杆nifHKDE基因的质粒pSA30，及含巴西固氮螺菌nifH基因的… 相似文献
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采用Ｓｐｅｒｍｏｓｐｈｅｒｅ ｍｏｄｅｌｓ测定５种培养基铁浓度下两株非共生固氮菌（巴西固氮螺菌ＮＯ４０和多粘芽孢杆菌）及两者的混合菌分别与两个小麦基因型（Ｇｉｚａ１６７和Ｓａｋｈａ８）的联合固氮效率，发现培养基的铁浓度对联合固氮效率具有显著的影响。若不考虑菌株间和小麦基因型间的差异，培养基铁浓度在２．５８３￣１４．７１５ｍｇ／Ｌ时的联合固氮效率显著高于铁浓度为４２．８８３￣１６６．３１ｍｇ／Ｌ；联 相似文献
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小麦蓝矮病植原体延伸因子(EF-Tu) tuf基因序列的同源性分析 总被引：5，自引：3，他引：5
【目的】利用分子生物学方法分析小麦蓝矮病植原体延伸因子tuf基因，从亚组水平上确定小麦蓝矮病植原体的分类地位。【方法】电镜观察自然发病的小麦蓝矮病病叶；用引物fTufu/rTufu对小麦蓝矮病植原体延伸因子tuf基因进行PCR扩增；核苷酸序列测定及分析。【结果】经电镜超微结构观察，在韧皮部观察到大量典型植原体。通过PCR扩增得到约850 bp的特异片段。感受态转化后，进行测序，结果表明小麦蓝矮病植原体tuf基因片段长842 bp，编码280个氨基酸。分析比较15种植原体延伸因子tuf基因的同源性，结果表明小麦蓝矮病植原体与三叶草绿变（KVF）亲缘关系最近，核苷酸同源性为99.9％，氨基酸同源性为100％。【结论】从亚组水平上确定了小麦蓝矮病植原体的分类地位，为研究小麦蓝矮病植原体的来源及致病分子机理提供理论依据。 相似文献
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小麦抗叶锈病基因Lr45的AFLP分子标记 总被引：12，自引：0，他引：12
利用AFLP技术对小麦抗叶锈基因Lr45进行了标记，从60对AFLP引物中筛选出2对在亲本及TcLr45×Thatcher F2抗感群体间揭示多态性的引物P-AGG/M-GAG和P-ACA/M-GGT。其扩增片段为261 bp和105 bp，2个标记与Lr45的遗传距离分别为0.6 cM和1.3 cM。测序比较261 bp片段与大麦属Vulgare HotrI基因部分序列同源性达86%，105 bp片段与一粒小麦磷脂酰丝氨酸脱羧酶基因部分序列同源性高达96%。2个测序片段均包含开放阅读框（ORF）序列。 相似文献
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根据猪乳铁蛋白N端基因序列及表达载体质粒的基因融合特点,设计一对引物,以泌乳3日龄母猪乳腺组织RNA为模板,进行RT-PCR,获得含有猪乳铁蛋白基因N端1 077 bp目的片段,将其与表达载体质粒pPG612.1进行连接,通过转化进入宿主菌JM109细胞内,通过质粒提取、PCR鉴定、酶切鉴定和序列测定分析,表明猪乳铁蛋白N端PLFN基因已成功插入到表达载体质粒中,获得了猪乳铁蛋白干酪乳杆菌表达载体质粒pPG612-PLFN。将获得的重组质粒再分别电转化入干酪乳杆菌ATCC393、植物乳杆菌KLDS1.0344、副干酪乳杆菌KLDS1.0652及戊糖乳杆菌KLDS1.0413中,获得表达猪乳铁蛋白基因的多种重组乳酸菌分别为pPG612-PLFN/L.casei,pPG612-PLFN/L.plantarum,pPG612-PLFN/L.paracasei和pPG612-PLFN/L.pentosus.,为猪乳铁蛋白的乳酸菌表达及重组乳酸菌抗菌制剂的制备奠定了基础。 相似文献
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枣疯病和酸枣丛枝病植原体16S rDNA和tuf基因的序列同源性分析 总被引：4，自引：1，他引：4
【目的】枣疯病是枣树上由植原体引起的一种毁灭性病害，遍布于中国华北、西北、华东、华南等25个省(市)的枣区，造成了巨大的经济损失。【方法】经PCR扩增，分别对中国陕西的彬县、阎良、武功、佳县、杨凌，河北沧州和山东德州7个枣区的枣疯病样品和杨凌4个酸枣丛枝病样品植原体16S rDNA基因保守序列和延伸因子tuf基因进行克隆和测序。【结果】获得枣疯病和酸枣丛枝病植原体的16S rDNA基因片段均为1 239 bp，tuf基因均为851 bp。通过序列同源性比较，结果表明中国陕西、河北、山东的枣疯病的病原一致，归属于植原体16S rⅤ-B组。由于枣疯病和酸枣丛枝病的植原体16S rDNA有5个碱基的差异，tuf基因的同源性为99.6%，推测为同一个种的不同寄主生物学型。【结论】首次报道了中国枣疯病和酸枣丛枝病植原体16S rDNA和延伸因子tuf基因的序列，确定了枣疯病和酸枣丛枝病植原体的分类地位，为研究枣疯病植原体的致病分子机理、遗传本质提供理论依据。 相似文献
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[目的]探讨肺炎克雷伯菌ATCC 49790（KP）耐药的分子机制。[方法]以KP基因组DNA为模板来扩增mdtl基因,将mdtl基因扩增产物进行DNA测序及同源性分析;将扩增产物与载体连接后转化到大肠埃希菌KAM32感受态细胞中,对转化子进行药敏分析。[结果]KP的mdtl基因扩增产物与已报道的mdtl基因核苷酸序列同源性达到99%,这个转化子对红霉素、氯霉素和卡那霉素具有很高的耐药性,这种高耐药性能被外排泵抑制剂羰基氰氯苯腙和维拉帕米逆转。[结论]克隆到了KP一多药外排基因。 相似文献
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【目的】由于草甘膦在农业生产中的广泛使用,抗草甘膦转基因作物的研究一直是转基因作物研究的热点,其中草甘膦抗性功能新基因的挖掘是核心问题。自然界中微生物种类繁多,基因资源丰富,论文拟从广东地区农田土壤中筛选和鉴定出高抗草甘膦菌株,克隆其草甘膦靶标酶基因并进行抗性水平验证,以期获得高抗草甘膦新基因资源用于抗草甘膦转基因作物的研究。【方法】用含有浓度梯度草甘膦的选择培养基从备选土壤中筛选出具有高抗草甘膦特性的菌株;通过显微观察、革兰氏染色以及16S rDNA序列分析结果对菌株种类进行鉴定;利用RT-PCR技术克隆该菌株的草甘膦靶标酶基因aroAS001,并通过序列比对和系统发育树分析aroAS001序列的基本特征;利用重叠 PCR法对aroAS001变异位点进行定点突变获得aroAS001-mut序列后,将aroAS001和aroAS001-mut基因片段转入aroA基因缺陷型菌株DH5α/△aroA中进行基因功能互补和草甘膦抗性水平验证。【结果】分离出一株高抗草甘膦菌株,经形态学和分子生物学鉴定该菌株为肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）,命名为kpS001;克隆该菌株草甘膦靶标酶5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶（EPSPS）基因aroAS001,序列分析结果显示由该基因所编码的氨基酸序列具有典型的Class I EPSPS特征,但与已报道肺炎克雷伯氏菌的aroA相比其第227位碱基发生突变,致使对应的氨基酸发生变异。对该基因差异位点进行核酸定点突变获得aroAS001-mut基因片段后,将aroAS001和aroAS001-mut基因片段分别转入缺陷型大肠杆菌菌株DH5α/△aroA进行功能互补验证,与对照菌株相比,转入aroAS001和aroAS001-mut的重组菌株均能在含200 mmol?L-1以下浓度草甘膦的培养基中能够正常生长,表现出良好的抗性,之后随着草甘膦浓度增加其生长状态开始受到抑制,当草甘膦浓度达到350 mmol?L-1时,菌株生长基本完全被抑制。【结论】肺炎克雷伯氏菌kpS001菌株是一株高抗草甘膦菌株,由aroAS001编码的草甘膦靶标酶EPSPS属于Class I EPSP合成酶,aroAS001对草甘膦具有优良抗性,能在含350 mmol?L-1以下浓度草甘膦的培养基中生长,该基因可以作为备选基因资源用于抗草甘膦转基因作物的研究。 相似文献