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相似文献
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1.
用经蔗糖密度梯度离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒(IBV,M41)作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过常规淋巴细胞杂交瘤技术产生杂交瘤细胞,经ELISA筛选,获得了4株能分泌特异性抗IBV单克隆抗体的细胞系,分别命名为4AC1、4AF1、6DH8及2DH10。4株单抗的亚类都属于IgG2b,在Westernblotting试验中,4AF1、6DH82株单抗特异性地识别IBV的核衣壳蛋白(N);经ELISA测定,各株单抗40h培养上清效价达10-2~10-4,第7天腹水效价达10-5~10-6,4AF1、6DH8与所试7个IBV标准株及2个IBV分离株都发生反应  相似文献   

2.
用淋巴细胞杂交瘤技术研制成4株沙门氏菌属特异单抗CB8,de7,cc6,DD4,在免疫转印试验中,证实它们所识别的抗原表位位于鞭毛蛋白上,ELISA相加试验及竞争试验显示,CB8和cc6与de7,DD4识别的抗原表位不同,表明鞭毛蛋白的属共同抗原具有多种表位的特性。用胰蛋白酶消化鞭毛蛋白,SDS-PAGE结果出现两条新带,分子量分别为42000(F42),27000(F27),长时间消化,最终只剩下F27条带,它可抵制该酶的消化。对该酶切样品的免疫转印结果表明,沙门氏菌鞭毛蛋白属共同抗原表位出现于F42和F27上,而相应的沙门氏菌分型H抗原单抗或因子血清识别的表位也在F42和F27上都得到了证实。这为沙门氏菌鞭毛蛋白抗原的多样性及结构和功能研究提供了证据。  相似文献   

3.
蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制   总被引:14,自引:3,他引:11  
用蚕豆萎蔫病毒(BBWV)提纯病毒粒子免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用纯化的BBWV病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有限稀释法克隆,成功获得2株BB-WV特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为4D11,3G12.2株单抗腹水间接ELISA效价高达1∶640000,抗体类型均为IgG1,经Western-bloting分析表明,2株单抗均是针对BBWV44.7kD的外壳蛋白大亚基的特异性抗体.单抗抗原结合位点分析表明4D11和3G12两单抗作用于同一抗原决定簇  相似文献   

4.
用淋巴细胞杂交瘤技术研制成4株沙门氏菌属特异单抗CB8,de7,cc6,DD4,在免疫转印试验中,证实它们所识别的抗原表位位于鞭毛蛋白上,ELISA相加试验及竞争试验显示,CB8和cc6与de7,DD4识别的抗原表位不同,表明鞭毛蛋白的属共同抗原具有多种表位的特性。  相似文献   

5.
蛋白多肽二级结构的电脑预测表明,非洲猪瘟病毒(MalawiLIL20/1株)k8R基因编码带有多个疏水氨基酸小区的27kDa蛋白质。该基因的PCR产物克隆入质粒pGEX-2T后,在大肠杆菌中表达42~54kDa不溶性GST-k8R融合蛋白。此表达蛋白能被针对不同非洲猪瘟病毒株的猪免疫血清识别。在非洲猪瘟病毒细胞适应株感染的细胞中,针对k8R大肠杆菌表达产物的单抗能检测出27kDa特异病毒蛋白。进一步鉴定表明,k8R基因编码的蛋白质为病毒非结构蛋白,不发生糖基化,出现于病毒感染周期的晚期,主要集中于靠近细胞核的病毒复制部位。用大肠杆菌表达的GST-k8R融合蛋白免疫猪未能抵抗MalawiLIL20/1强毒株攻击。  相似文献   

6.
基因探针技术检测血清1型马立克氏病病毒的研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
选用马立克氏病病毒(MDV)GA株BamHI基因文库中LDNA片段,制成DIG-标记的MDV核酸探针,分别对I型MDV强毒株(BJ-1株)和弱毒株(Md11/75c株)感染材料的核酸进行dot blot杂交检测,结果显示均有阳性呈色反应;而对MDV血清2型(SB-1株)、3型(Fc126株)及禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)和淋巴细胞性白血病病毒(LLV)感染细胞的核酸,作上述同样检测,则均未见  相似文献   

7.
以抗Bursin单抗2F9-4,用免疫组织化学方法,检测Bursin在鸡胚胎期及出壳后1~9周龄雏不同免疫器官中的定位分布。结果表明:胚胎期12日龄囊(上皮芽、上皮)、骨髓呈阳性;14日龄囊(上皮芽、芽突)、胸腺髓质有阳性细胞;20日龄胸腺有阳性细胞。新生雏囊单层或假复层上皮FAE和IFSE呈阳性、髓质有稀少DREC阳性、CME弱阳性。出壳1~3周DREC与哈德氏腺阳性,反应随周龄增加有所增强,胸腺髓质呈阳性,3周脾脏极少数散在阳性细胞。4周CME、DREC、IFSE与TDIA的基底膜有阳性细胞。6周FAE、FAESC、CME、DREC、IFSE与TDIA的基底膜有阳性细胞。8周FAE、FAESC、CME、DREC呈阳性。9周CME、DREC呈阳性。4,6,8,9周Hasal小体、6,9周骨髓呈阳性;4,6周脾脏散在阳性细胞;4,6,9周哈德氏腺有阳性细胞。  相似文献   

8.
禽成髓细胞性白血病病毒的繁殖及其杂交瘤细胞株的建立   总被引:2,自引:0,他引:2  
用实验室 ̄20℃条件下保存6年的禽成髓细胞性白血病病毒BAI-A株鸡传代血浆毒感染1 ̄3日龄的雏鸡,接毒后15 ̄45d陆续发病。取其血浆毒,经差速离心和蔗糖密度梯度离心,获得较纯的AMV抗原,用此抗原免疫8 ̄10周龄BALB/C小鼠,将其脾细胞与SP2/O瘤细胞进行融合,经ELISA筛选、克隆、共获得6株阳性杂交瘤细胞株,分别采用传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、传染性法氏囊病毒、传染性喉气管炎病毒  相似文献   

9.
 本实验所用的马传染性贫血病毒(EIAV)L株(EIAV-L)是我国研制成功的EIAV弱毒疫苗的原始强毒株。以EIAV-L感染马外周血液白细胞中DNA为模板,利用PCR技术,分4个片段扩增EIAV-L前病毒DNA,并分别克隆到载体质粒pBluescript SK中,得到 4个重组质粒p2.8、p2.4、p3.1和 p1.2,经酶切鉴定后测序。对测序结果分析、拼接,得到 EIAV-L前病毒基因组全序列。EIAV-L前病毒基因组全长 8235bp,其中 G+C含量为 38%。通过使用计算机软件DNASIS分析,EIAV-L与马传贫驴强毒和马传贫驴白细胞疫苗毒序列同源性分别为98.4%和96.9%。同源性如此接近反映了它们之间的亲缘关系,另外 EIAV-L与驴强毒的同源性高于其与驴白细胞弱毒疫苗株的同源性,这符合驴白细胞弱毒疫苗株的衍生过程。基因组两端是长为316bp的LTR,其中U3为197bp,R为80BP,U5为39bp。前病毒基因组有 3个较大的开放阅读框架(ORF),分别编码 gag、pol和 env基因。gag基因位于 713~1912位碱基之间,全长1200bp;pol基因位于 1708~5109位碱基之间,全长  相似文献   

10.
参照了已表的IBV Beaudette株全基因组序列,自行设计合成了3和引物(youl+、you2-youM+),引物you1+和you2-在S1基因两侧,跨幅约1610bp,引物you2-和youM+在S1基因的3’端,跨幅约530bp。用这两对引物对5个IBV地方分离株(HN2,HN4,JX1,SC2和SC1)进行RT-PCR,均成功地扩增出相应大小的目的片段。病毒在电镜下观察中以形态多变的冠状病毒粒子。  相似文献   

11.
基于多种生物信息学软件综合预测烟草环斑病毒(TRSV)外壳蛋白抗原表位所在的结构域,明确了该外壳蛋白抗原表位可能位于C端319~328、384~388、420~430、480~487、495~511位氨基酸残基附近。通过RT-PCR扩增出了目的片段,构建了TRSV外壳蛋白原核表达载体,表达的TRSV外壳蛋白外源融合蛋白具免疫活性。采用杂交瘤细胞技术,利用外源融合蛋白制备了单克隆抗体,制备的抗血清可与TRSV外壳蛋白基因原核表达产物发生免疫反应。检验结果表明,制备的抗血清具较好的特异性,可应用于TRSV的检疫检验。  相似文献   

12.
[目的]以免疫信息学和反向疫苗学为理论根据,应用生物信息学相关软件和方法,对BVDV结构蛋白( Structural Protein,SP)的二级结构的不同方面及其B细胞表位进行了预测,综合评价了BVDV结构蛋白的抗原特异性细胞表位,并计算出一些潜在的抗原位点.[方法]利用RT- PCR扩增法获得牛病毒性腹泻病毒结构蛋白序列,通过克隆、测序分析结构蛋白基因的基因组序列和蛋白序列,采用DNAStar Protean软件对结构蛋白的二级结构、可塑性、亲水性、表面可及性及抗原指数等参数进行综合分析,并预测其B细胞的抗原表位分布.[结果]P14、gp48和gp53蛋白含有的细胞优势抗原表位较多,有的甚至有可能成为优势抗原表位或对优势抗原表位有协同作用.[结论]与已鉴定的B细胞抗原表位相比,试验所用方法预测的结果有较高的准确度,是一种较为先进的表位研究方法.  相似文献   

13.
采用碳二亚胺法制备诺氟沙星与牛血清白蛋白(BSA)的结合物,作为诺氟沙星酶联免疫用的免疫原。经紫外光谱法测定,每分子牛血清白蛋白连接的诺氟沙星分子数为16.1个。分别用碳二亚胺法和混合酸酐法制备诺氟沙星与卵清蛋白(OA)的结合物,作为诺氟沙星酶联免疫测定用的包被抗原。经紫外光谱法测定,每分子卵清蛋白连接的诺氟沙星分子数分别为5.8和1.9个。  相似文献   

14.
诺氟沙星与牛血清白蛋白及卵清蛋白结合物的合成   总被引:7,自引:0,他引:7  
采用碳二亚胺法制备诺氟沙星与牛血清白蛋白(BSA)的结合物,作为诺氟沙星酶联免疫用的免疫原。经紫外光谱法测定,每分子牛血清白蛋白连接的诺氟沙星分子数为16.1个。分别用碳二亚胺法和混合酸酐法制备诺氟沙星与卵清蛋白(OA)的结合物,作为诺氟沙星酶联免疫测定用的包被抗原。经紫外光谱法测定,每分子卵清蛋白连接的诺氟沙星分子数分别为5.8和1.9个。  相似文献   

15.
利用生物软件对新城疫病毒F48E9株的血凝素神经氨酸酶(HN)蛋白进行抗原特性分析,选定172~570位氨基酸区域作为多肽表位候选区域。以pUC18-F-HN为模板,设计引物通过PCR扩增,获得HN抗原结构域基因片段,SaⅠl、NoⅠt双酶切定向克隆到原核表达载体pET28a,获得重组质粒分别命名为pET28a-HNa。重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞BL21,筛选出阳性克隆,诱导表达并取产物进行分析。结果表明,HN抗原结构域基因片段获得了融合表达,Western-blotting分析证实表达产物HN与NDV阳性血清具有免疫反应性。为进一步研究HN蛋白抗原结构域的免疫原性以及HN蛋白与F蛋白相互作用奠定了基础。  相似文献   

16.
xa32(t)是从疣粒野生稻与栽培稻经体细胞杂交途径获得的新种质Y76中鉴定出的水稻抗白叶枯病新基因。将Y76与栽培稻"大粒香"回交构建F2群体,获得132个抗性稳定的株系。经致病菌株P6对该F2群体抗性鉴定,得到抗感株系数分别为32和100。随机选用覆盖水稻12条染色体的412对SSR引物对亲本和F2代群体进行多态性分析。筛选出8对多态性好的引物标记,连锁遗传分析发现位于xa32(t)同侧的RM8216和RM20A与其连锁,从而将xa32(t)定位在第12染色体长臂上,遗传距离为6.9cm和1.7cm。  相似文献   

17.
The present study was carried out to illustrate high-efficient detection of quantitative trait loci(QTLs)with selected introgression lines(ILs)and the existence of'hidden genes' conferring drought tolerance(DT).52 selected DT ILs,derived from BC2F2 population developed by crossing and backcrossing the susceptible recurrent parent(RP)IR64 with the susceptible donor Khazar were planted under irrigation and drought condition.Four important agronomic traits,e.g.,grain yield(GY),heading date(HD),panicle numbers per plant(PN),and plant height(PH)were evaluated and 83 SSR polymorphic molecular markers were used for genotypic analysis.Chi-square test based on genetic hitch-hiking and one-way analysis of variances(ANOVA)were used to detect drought-related loci.Nine and 36 loci were detected by chi-square test and one-way ANOVA,respectively.Five common loci were observed by comparing the results of the two methods,among which two QTLs linked with RM7,and RM241 were detected under irrigation condition,both of the favorable alleles were from RP and explained 13%phenotypic variation(PV)for GY and 28% PV for PH,respectively.The other three QTLs linked with RM163,RM18,and RM270 were detected under drought condition,the favorable alleles were all from the donor and explained 10,24,and 19% PV for HD,PH,and PH,respectively.Five common loci were observed by comparing the results of chi-square test and one-way ANOVA including two QTLs(one for GY and one for PH)under irrigation condition and three QTLs(one for HD and two for PH)under drought condition.By combining phenotypic and genotypic analysis,drought escape could be inferred as the main mechanism for drought tolerance in the present study.The results in present study suggested that the selected ILs population analyzed by chi-square test and one-way ANOVA was quite effective for DT QTL detection with low inputs and could also produce useful materials for breeding with wide genetic diversity for drought tolerance.  相似文献   

18.
以晚熟品种“绿化9号”桃为试材,用0,0.5,1.0和2.0mL/kg乙醛处理果实12h后,分别贮藏于室温(20±1)℃和(0±1)℃下,研究桃果实软化及果胶物质代谢中乙醛的作用。结果表明:2个温度下,乙醛处理有抑制桃果实呼吸强度的作用。0℃下,2.0mL/kg和1.0mL/kg乙醛处理可抑制果实果胶甲酯酶(PE)和β-半乳糖苷酶(β-Gal)活性的增加,减轻果实软化,但对原果胶含量和可溶性果胶含量的影响不显著;室温下,乙醛处理促进PE,β-Gal活性的增加和可溶性果胶含量的上升,以及果实软化。PG活性受乙醛处理的影响,与果实硬度、原果胶和可溶性果胶含量等关联性不明显。  相似文献   

19.
本文从光谱学的角度研究了有毒物质丙烯酰胺(AA)与牛血清白蛋白(BSA)间的相互作用.实验结果表明,在pH =7.0和室温条件下,AA可通过静态猝灭的方式有效地猝灭BSA的荧光,AA的加入影响了BSA的构象.通过荧光数据计算可得到AA与BSA的结合位点数(n=0.933)及表观绑定常数(KA=5.55×103 mol·...  相似文献   

20.
水稻芽期耐冷性QTL的分子定位   总被引:31,自引:2,他引:31  
 以籼粳交密阳23号/吉冷1号的F2:3 代200个家系作为作图群体,构建了一张含有97个微卫星 (SSR)标记的分子连锁图谱。在5℃低温条件下,对F3家系进行芽期耐冷性鉴定,并利用SSR标记进行了芽期耐冷性数量性状位点(QTL)分析。研究结果表明,芽期耐冷性在F3家系群中呈单峰连续分布,表现为由多基因控制的数量性状;共检测到与芽期耐冷性有关的QTL 3个,分别位于第2、4 和7染色体上,对表型变异的贡献率范围为11.5%~20.5%。其中,位于第4染色体RM273~RM303的qCTBP4对表型变异的贡献率最大。  相似文献   

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