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1.
为探讨和分析免疫性不孕奶牛和可孕奶牛宫颈黏液ASA能够识别的精子膜抗原及其差异,本试验通过提取精子膜总蛋白,对24头免疫性不孕奶牛和14头可孕奶牛宫颈黏液ASA能够识别的精子抗原进行了比较分析。免疫印迹试验结果显示,不孕奶牛宫颈黏液ASA对分子质量为88-90ku、66ku、55~57ku、25-27ku的精子膜抗原有特殊免疫性反应,识别抗原率为100％（24／24）、100％（24／24）、87．5％（21／24）、70．8％（17／24）;而可孕奶牛宫颈黏液AsA对分子质量为88-90ku、55-57ku、25-27ku的识别率仅为21．4％（3／14）、14．2％（2／14）、14．2％（2／14）,可孕奶牛宫颈黏液不能识别分子质量为66ku#~精子膜抗原。结果表明,不孕奶牛宫颈黏液ASA~g够识别更多的精子膜抗原,这些精子膜抗原可能与免疫性不孕有密切相关,对其深入的研究将有助于免疫性不孕相关精子膜抗原的筛选和鉴定。 相似文献
2.
免疫不孕严重影响奶牛正常繁殖,相对于其他不孕类型不容易被确诊,准确对孕牛与不孕牛之间宫颈黏液AsAb的差异进行定性和定量分析,对奶牛免疫不孕的治疗研究有重要的意义。本试验将浅盘凝集检测和实际生产结果相结合确定的不孕奶牛和可孕奶牛作为研究对象,对宫颈黏液中蛋白进行SDS—PAGE电泳并对其分离条件进行优选。结果表明,本试验建立了一种在8％分离胶上,以15p~L上样量,100V,电泳3～4h的SDS—PAGE分离奶牛宫颈黏液的有效方法：对浅盘凝集检测和实际生产记录相结合确定AsAb免疫性不孕奶牛的宫颈黏液,用SDS—PAGE分离得到一种分子量为22～25kDa蛋白,初步确定为AsAb轻链：发现100％（24／24）不孕奶牛的宫颈黏液中存在AsAb轻链,14．3％（2／14）可孕牛宫颈黏液中存在AsAb轻链,但表达量明显低于不孕牛。 相似文献
3.
利用丝状霉形体山羊亚种标准株PG3制备抗原,经纯化后作为包被抗原建立了间接ELISA方法,用于检测丝状霉形体山羊亚种血清抗体。经方阵滴定确定最佳抗原包被浓度为1.09μg/mL,血清样品最佳稀释度为1∶64,兔抗羊IgG辣根过氧化物酶结合物的最佳稀释度为1∶40 000,抗原抗体最佳结合时间为1 h。判定标准为样品D490 nm值与标准阴性血清D490 nm值之比（P/N）≥3为阳性,≤2.5为阴性,介于二者之间的为可疑。重复性和稳定性试验证明,建立的间接ELISA的稳定性和重复性良好,与间接血凝试验相比,其敏感性较高。 相似文献
4.
奶牛新孢子虫重组蛋白NcSRS2t间接ELISA方法的建立及初步应用 总被引：2，自引：0，他引：2
以纯化的犬新孢子虫(Neospora caninum)重组蛋白 NcSRS2t为抗原包被酶标板,通过对间接ELISA 各反应条件的优化,确定了最佳反应条件.采用已建立的间接ELISA反应条件,对218份阴性血清的检测结果进行统计学分析,确定了间接ELISA的判定标准,即OD450nm值大于等于O.32为阳性,小于O.32为阴性.应用建立的间接ELISA方法对128份阴性血清和50份阳性血清(经IDEXX公司新孢子虫抗体检测试剂盒证实)进行检测,结果表明,闻接ELISA方法的特异性为93.0%,敏感性为90.0%.采用本试验建立的新孢子虫间接ELISA 诊断方法对黑龙江省克山、海林、双城、甘南、克东、富裕、牡丹江、大庆等8个县(市)奶牛场的540份奶牛血清进行了检测.结果表明,被检的540份奶牛血清样本中奶牛新孢子虫的抗体阳性率为13.33%.该间接ELISA 诊断方法的建立及初步应用为新孢子虫病诊断试剂盒的研制和新孢子虫病的预防研究奠定了基础. 相似文献
5.
提取A型鼻气管鸟杆菌(ORT)外膜蛋白,经纯化后包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、兔抗鸡酶标二抗稀释倍数,建立了检测ORT抗体的间接ELISA方法.经方阵滴定确定最佳抗原包被质量浓度为11.85 mg/L,血清样品稀释倍数为1∶20,兔抗鸡IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释倍数为1∶1 000,抗原抗体最佳结合时间为1 h,血清与二抗最适反应时间为45 min.试验结果确定的判定标准为:样品D490 nm≥0.639判定为阳性,D490 nm≤0.350判定为阴性,介于两者之间的为可疑.试验证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性,将205份疑似ORT的鸡血清用本方法进行检测,其阳性检出率为11.7%(24/205). 相似文献
6.
以纯化的PRV抗原为包被抗原,优化ELISA反应条件,建立了可检测PRV血清抗体的间接ELISA诊断方法。标定抗原的最佳包被量为0.802μg/mL,血清样品最佳稀释度为1∶100,最佳作用时间为60min,判定标准为OD 450nm值大于0.357为阳性,小于0.296为阴性,在0.296与0.357之间为可疑。该方法检测其他6种常见猪病病毒(CSFV、PCV-2、PRRSV、PPV、JEV、TGEV)的阳性血清均为阴性;与商品化ELISA试剂盒相比较,符合率、敏感性和特异性分别为90.0%、87.1%、92.3%。本研究建立的PRV间接ELISA抗体检测方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,为PRV免疫猪群抗体监测、快速诊断和PR流行病学调查提供一种快速、简便的血清学诊断方法。 相似文献
7.
猪流感抗体间接ELISA检测方法的建立 总被引：12，自引：1，他引：12
猪流感病毒A／Swine／Fujian／668／2001（H3N2）株感染的鸡胚尿囊液，经差速离心后，再经蔗糖密度梯度离心，提纯、纯化的猪流感病毒经NP-40处理并反复冻融，作为猪流感间接ELISA抗原，确立了间接ELISA检测方法。对29份HI试验猪流感为阴性的血清进行了检测，经统计学分析，确定间接ELISA判定标准，被检血清OD490nm值≥0．20判定为阳性。该方法对猪瘟等11种猪疫病阳性血清无交叉反应，批内和批间重复试验的吸收变异系数分别在3．34％～8．12％和6．2％～9．04％之间。与HI的符合率达到92．8％，经卡方检验（P〈0．01）比HI试验敏感。为猪流感抗体检测提供了快速、准确、简便的方法。 相似文献
8.
为检测猪血清中猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗体水平,以纯化的PEDV作为包被抗原,优化ELISA反应条件,建立了检测PEDV血清IgG抗体的诊断方法:当血清OD_(450nm)值0.31时,判定阳性;当OD_(450nm)值小于0.26时,判定阴性;当OD_(450nm)值介于两者之间判定可疑。结果表明,试验建立的ELISA抗体检测方法可用于检测猪血清中猪流行腹泻病毒抗体、监测猪流行腹泻病的流行情况和评价相关疫苗的免疫效果。 相似文献
9.
检测鸭坦布苏病毒卵黄抗体间接ELISA方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究以纯化的鸭坦布苏病毒WR株为包被抗原,建立检测鸭坦布苏病毒卵黄抗体的间接ELISA方法。经优化后确定检测样品的结果P/N([样品孔OD450nm-空白孔OD450nm)/(阴性孔OD450nm-空白孔OD450nm)]≥2.1判为阳性,<1.5者为阴性;1.5≤P/N<2.1者判为可疑,重检后仍可疑者定为阴性。以建立的间接ELISA方法对H9亚型禽流感病毒、H5亚型禽流感病毒、减蛋综合征病毒、鸭瘟病毒和大肠杆菌卵黄抗体进行了检测,结果均为阴性,表明该方法具有良好的特异性。经重复性试验表明,该方法重复性好。本方法的建立对开产种鸭和蛋鸭坦布苏病毒疫苗免疫效果的评价具有十分重要的意义。 相似文献
10.
用大肠杆菌表达FMDV NSP 3ABC鉴别感染与注苗动物ELISA方法的建立 总被引：11，自引：2，他引：9
用大肠杆菌表达的FMDV NSP 3ABC经纯化复性后作为抗原,建立了鉴别感染动物与注苗动物的间接ELISA方法.用该方法检测了大量的牛血清样品,确定了3ABC-I-ELISA判定标准.3ABC-I-ELISA以(OD样品-OD阴性)÷(OD阳性-OD阴性)来计算待测样品效价.当效价小于0.2为阴性,介于0.2～0.3之间为可疑,大于0.3为阳性.根据此判定标准所测试验感染动物血清都为阳性,敏感性达100%;97.06%疫苗注射动物血清为阴性;98.39%的非免疫健康牛(未感染也未注射疫苗牛)血清为阴性.研究证实感染牛在1年以后仍能检测到3ABC抗体.这说明3ABC-I-ELISA能够鉴别FMDV感染动物和注苗动物,可作为大面积疫情监测的方法应用. 相似文献
11.
羊细粒棘球蚴病抗体间接ELISA检测方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究旨在通过建立检测羊细粒棘球蚴病抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,为羊细粒棘球蚴病的检测提供快速、简便的手段.作者利用DNAStar软件对GenBank上发表的细粒棘球蚴EG95蛋白的氨基酸序列进行分析,筛选出高度亲水的优势表位区EG95s,对该区域编码基因进行克隆并表达.以纯化的重组融合蛋白为包被抗原,按常规方法建立检测羊细粒棘球蚴病抗体的间接ELISA,并对各种条件进行优化.SDS-PAGE结果表明成功获得了可溶性好、表达效率高、纯化简便的重组融合蛋白GST-1EG95s和HIS-1EG95s,Western blot检测结果表明表达产物具有较好的反应原性.间接ELISA方法优化结果显示:HIS-1EG95s作为包被抗原效果优于GST-1EG95s.经统计学分析,确定间接ELISA方法的判定标准:OD450nm值≥0.235时判定为阳性,OD450nm值≤0.191时判定为阴性,介于二者之间则为可疑.分别对采自新疆的70份羊包虫阳性血清和70份阴性血清进行检测,结果表明该方法与新西兰Wallaceville动物研究中心提供的间接ELISA方法符合率为100%,阻断试验结果显示与其他蛋白无交叉反应,批内变异系数介于3.8%～5.6%,批间变异系数介于5.7%～8.5%,结果表明该方法特异性强、敏感性高、重复性好.作者所建立的羊细粒棘球蚴病抗体的间接ELISA检测方法有望为羊细粒棘球蚴病的检测提供快速、简便的手段. 相似文献
12.
采集正常牛20头和不孕牛23头发情宫颈黏液确定浅盘精子凝集检测不孕牛抗精子抗体(AsAb)标准,检测135头不孕牛AsAb并计算阳性率;对AsAb阳性不孕牛采用氯前列烯醇、双抗和氢化可的松相结合2次处理诱导同期发情检测AsAb阳性率,然后分别进行AI和AI+MOET治疗试验.结果显示,浅盘精子凝集检测不孕牛发情宫颈黏液AsAb可用1/16稀释和精子凝集率>10%作为判定标准,135头不孕牛中87头呈阳性,占64.4%.2次复方药物处理后AsAb阳性率由100%(87/87)下降到64.2%(53/87,P<0.05).87头AsAb阳性牛经2次复方药物治疗后53头同期发情,被分为AI组(n=32)和AI+MOET组(n=21),AI+MOET组90 d受胎率和犊牛出生率达到57.1%和71.4%,分别显著高于AI组的34.4%的受胎率和34.4%犊牛出生率(P<0.05). 相似文献
13.
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本文对酶联免疫吸附试验(ELISA)检测牛乳中流产布鲁氏茵抗体一法进行了评价。从血清学阳性或阴性的奶牛采取乳样,测定其吸收值的分布,据此可将牛乳区别为 ELISA 阳性或阴性。在22头乳样和血清样品 ELISA 为阳性的奶牛中,有10头(45%)的乳样分离到流产布鲁氏茵。认为 ELISA 试验是检测牛乳中流产布鲁氏茵抗体的一个较为适用的方法 相似文献
16.
为准确了解、比对不同种猪场猪群免疫猪瘟E2灭活疫苗与猪瘟C株 （脾淋源、ST传代细胞源）活疫苗效果。对A、B、C、D、E、F 6家猪场1 672头母猪免疫对应猪瘟疫苗后,分别采集6家猪场的20头、30头、10头、20头、10头、10头共计100头母猪的血清样品进行间接ELISA检测。结果显示100份样品中猪瘟抗体阳性率100%;其中免疫猪瘟C株 （脾淋源、ST传代细胞源）活疫苗组A、B、C场抗体效价OD均值分别为2.0662、2.0029、1.8147,离散度分别为41.86%、28.89%、43.85%;免疫猪瘟E2灭活疫苗D、E、F场抗体效价OD均值分别为2.6587、2.2537、2.4862,离散度分别为21.75%、7.72%、9.76%;经两样本均数比较T检验分析,2个试验组内抗体效价OD值差异不显著,2个试验组间抗体效价OD值差异极显著。 相似文献
17.
牛结核病和布病的检疫常称之为"两病"检疫。近年来牛结核病γ-干扰素酶联免疫吸附试验(ELISA)的应用日益增加,为了简化"两病"检疫,笔者尝试将牛结核病检测样品即牛型结核菌素(PPD)刺激上清液用于布病检测,用虎红平板凝集试验(RBT)、间接ELISA(i ELISA)试验和试纸条试验同时检测90头牛的血清样品和刺激上清液样品。结果表明:在RBT中,牛型PPD刺激上清液样品均呈非特异性阳性反应;在i ELISA试验中,血清样品的S/P值(样品OD值/阳性对照OD值×100%)平均值(194.84%)显著高于刺激上清液样品的平均值(183.57%,P0.05),调整刺激上清液样品的判定标准后进行卡方检验,两种样品的结果差异不显著(P0.05);在试纸条试验中,刺激上清液样品的阳性率(43.33%)显著大于血清样品的阳性率(28.89%,P0.05)。说明牛结核病γ-干扰素ELISA检测样品不能作为布病RBT和试纸条试验的样品,但可以作为布病i ELISA试验的样品。 相似文献
18.
《动物医学进展》2021,42(7)
为建立伪结核棒状杆菌(Cp)血清抗体间接ELISA检测方法,以热灭活处理的不同的浓度Cp菌株作为固相抗原包被酶标板,用不同封闭液封闭,设置不同的封闭时间,再用不同稀释度的待检血清和不同稀释度的酶标二抗与之反应,以此优化间接ELISA反应条件,确定阳性临界值。对间接ELISA方法的特异性和重复性进行试验,并在此基础上对采集的临床样本进行检测。结果显示,最佳抗原包被量为OD600 nm=0.084的菌悬液100μL,10 g/L BSA封闭时间2 h,一抗血清稀释度为1∶400,酶标二抗的稀释度为1∶5 000,血清阴阳性的OD450 nm值临界值为0.352。该方法仅对Cp阳性血清呈特异性反应,与6种常见病原阳性血清均无交叉反应,特异性较强。批内试验和批间试验的变异系数均小于9.5%,重复性较好。敏感性试验结果表明,当伪结核标准阳性血清进行1∶1 280稀释时检测仍为阳性,敏感性较强。用该方法对10份经细菌分离鉴定为阳性的血清进行Cp抗体检测,结果均为阳性。用建立的方法对临床随机采集的423份血清进行检测,结果显示阳性率为35%。研究建立的抗体间接ELISA方法为Cp抗体检测及血清学调查奠定了基础。 相似文献
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H3N2亚型猪流感病毒血凝素基因的原核表达及间接ELISA诊断方法的建立 总被引：2，自引：1，他引：1
采用RT-PCR扩增H3N2亚型猪流感病毒HA1基因.将该片段插入到原核表达栽体pET-30a( )中,构建原核表达载体pET-HA1.阳性质粒转化宿主菌BL21,经IPTG诱导,HA1基因获得表达,其重组蛋白以包涵体的形式存在.通过改变IPTG的浓度和诱导时间,确定表达HA1基因的最佳诱导条件.Western blot分析表明表达产物具有良好的抗原活性.用纯化的表达产物作为包被抗原建立了检测H3亚型猪流感病毒抗体的间接ELISA方法,确定抗原最佳包被浓度为4 μg/mL,血清最佳稀释度为1:100,阳性标准初步判定为:待检血清OD值>0.4,而且待检血清OD值/阴性血清OD值>2.应用此方法对309份临床血清样品进行了检测,并与HT方法进行了比较,结果表明基于重组HA蛋白的间接ELISA方法可用于H3N2亚型猪流感病毒感染的初步诊断. 相似文献
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一种轮状病毒特异抗体ELISA检测方法 总被引：1，自引：0，他引：1
在实验室条件下,建立较为快速的轮状病毒抗体ELISA检测方法。利用组织培养的轮状病毒SA11株经初步的浓缩和纯化后,作为包被抗原包被酶标板。SDS-PAGE分析表明,经浓缩纯化后,轮状病毒的主要抗原均存在。将测试血清用SA11中和后,轮状病毒或其抗原免疫血清(肠黏液,粪便悬液)的OD490值比中和前有明显的下降,下降比率大于45％,而对照组血清的OD490值与中和前相比没有明显的变化,下降比率小于9％。表明用此ELISA体系检测轮状病毒抗体具有特异性。 相似文献