共查询到20条相似文献，搜索用时 343 毫秒
1.
牛子宫内膜上皮细胞的体外培养及鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
旨在改良牛子宫内膜细胞原代培养方法,并鉴定其特征。分别比较了单纯组织块培养法和先组织块培养后再消化纯化的方法对牛子宫内膜细胞进行培养以及纯化。经免疫荧光染色方法对两种方法获得的牛子宫内膜上皮细胞进行角蛋白表达鉴定。研究结果表明：先组织块培养后再消化纯化的方法获得的牛子宫内膜上皮细胞形态良好,纯度较高。因此,组织块培养后再消化纯化得到的牛子宫内膜上皮细胞是一种操作简单、高效的方法,用该方法得到的细胞可以在体外传至4~5 代,此结果为牛繁殖生理及其机制模型的建立奠定基础。 相似文献
2.
创建粳稻新的种质资源,对加速粳稻遗传育种研究具有重要意义。以粳稻品种秀水11、日本晴为材料,利用30Gy60Coγ-射线辐照其成熟胚愈伤组织筛选突变体。在MR2代群体中观察到叶片、茎秆、籽粒和穗等形态性状发生变异的突变体以及育性和生育期等生理性状方面的变异株;这些突变体为水稻新品种选育和功能基因组学研究提供了良好的基础材料。γ-射线辐照粳稻愈伤组织,利用核诱变与体细胞无性系变异相结合方法,增加再生植株中有利突变类型,其中一些突变体在水稻生产上有较高的应用价值。 相似文献
3.
绵羊子宫内膜上皮细胞的纯化培养与鉴定 总被引：1，自引：1，他引：0
为了探索一种分离纯化绵羊子宫内膜上皮细胞的简便高效方法,本试验采用先组织块培养后消化纯化和直接消化后过筛纯化两种方法对绵羊子宫内膜上皮细胞进行培养、纯化,最后用免疫荧光方法对上述方法得到的细胞进行角蛋白检测从而鉴定上皮细胞纯度。结果表明先组织块培养后消化纯化法可以得到纯度95%,且形态均一、活性良好的绵羊子宫内膜上皮细胞;先消化后过筛纯化法得到的子宫内膜上皮细胞形态良好但是纯度仅为70%,与前一方法相比有待提高。因此,先组织块培养后消化纯化法是获得绵羊子宫内膜上皮细胞的一种简单易行且高效的方法,该方法得到的细胞可以在体外传至3-4代。 相似文献
4.
5.
奶牛和绵羊子宫内膜细胞体外培养方法的研究 总被引：4，自引：3，他引：1
为了探讨适用于奶牛和绵羊子宫内膜细胞的培养方法,采用了组织培养法、常温消化法、先组培后消化法和先消化后组培法,并适时用倒置显微镜观察,探讨哪一种原代培养方法更适合获得奶牛和绵羊子宫内膜细胞。结果表明,组织培养的奶牛和绵羊子宫内膜细胞生长较快,细胞形态为梭形和铺路石样交织在一起;常温消化法没有成功获得奶牛子宫内膜细胞,但获得了绵羊子宫内膜细胞;而先组培后消化法获得了奶牛子宫内膜细胞,但无法传代、不能长久生长;而先消化后组培法获得的细胞与单一组培法获得的奶牛和绵羊子宫内膜细胞情况相似,细胞上出现很多组织残块,覆盖在细胞上面不利于细胞增殖。说明组织培养方法是简捷快速获得牛、绵羊子宫内膜细胞的方法,获得的子宫内膜细胞可以在体外至少传4代,这类细胞可以用于研究动物子宫内膜的功能和相关分子调控机制。 相似文献
6.
为了深入地讨论牦牛ANXA5基因序列的特点，阐述其组织及细胞表达特性，通过采集牦牛不同组织样品，如心、肝、脾、肺、肾、子宫、卵巢、输卵管等，提取总RNA。采用PCR、生物信息学软件、实时荧光定量PCR、免疫组化等技术对牦牛ANXA5基因进行克隆、序列分析及表达特性研究。结果显示，牦牛ANXA5基因CDS区长为966 bp,共编码321个氨基酸。与黄牛比较，发现共有6个碱基突变存在于牦牛ANXA5基因中。黄牛与牦牛的核苷酸和氨基酸同源性大于99%,与其他哺乳动物进行氨基酸同源性比较，结果也均在90%以上，说明ANXA5基因在长期进化中保守。在牦牛的肺组织中，ANXA5基因表达量最高，与其他组织差异极显著(P<0.01);在子宫和输卵管组织中表达量次之。ANXA5在牦牛不同时期卵巢颗粒细胞中均有表达，且表达量随时间增长而逐渐升高。结果显示，培养72 h颗粒细胞中ANXA5表达量极显著高于培养24,36 h颗粒细胞(P<0.01);培养48 h颗粒细胞中ANXA5表达量极显著高于培养24 h颗粒细胞(P<0.01),显著高于培养36 h颗粒细胞(P<0.05),表明A... 相似文献
7.
Smad2是TGFβ超家族蛋白的胞质内信号转导分子,以往的研究证实Smad2的mRNA表达和定位于大鼠、小鼠子宫。本项研究的目的是用免疫组织化学方法检测Smad2蛋白在附植早期（妊娠32天）绵羊子宫内膜的分布。选山西省太谷县本地绵羊,于秋季交配后32天（32 day post coitus, dpc）,解剖取材子宫和胎衣组织,制作石蜡切片,用免疫组织化学方法检测了Smad2蛋白在子宫内膜的分布。结果显示Smad2蛋白定位于子宫腔上皮、腺上皮和上皮下方的基质中;胚胎附植处Smad2高表达,胎衣滋养层组织也呈现Smad2强阳性表达。结论：Smad2表达于附植早期绵羊子宫内膜和滋养层,可能参与子宫内膜和附植后胚胎发育的调节。 相似文献
8.
为了初步探讨大肠杆菌型奶牛子宫内膜炎发生机制,进而为后续筛选出作用于关键信号通路靶点的药物奠定基础。试验通过组织块培养法和传代培养分离纯化得到奶牛子宫上皮细胞(Bovine endometrial epithelial cell,bEEC)。30μg/mL的脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激bEEC 12 h后,收集细胞用于奶牛子宫内膜上皮细胞体外炎性损伤模型的研究。通过荧光定量RT-PCR检测LPS作用于bEEC 2、6、9、12 h后细胞内IL-1β、IL-8、IL-6、TNF-α mRNA表达,然后通过Western-blot检测LPS诱导bEEC NF-кB和MAPKs相关蛋白的表达。结果表明：30μg/mL的LPS作用b EEC细胞2、6、9、12 h可极显著(P<0.01)诱导IL-1β、IL-8、IL-6、TNF-α mRNA表达。LPS可上调MAPKs相关蛋白P38、ERK、JNK的磷酸化水平(P<0.01),促使NF-κB抑制蛋白IκBα的降解(P<0.05)。说明LPS可激活MAPKs和NF-кB信号通路,诱导大量炎症介质的... 相似文献
9.
探索建立一种用绿色荧光蛋白对鸡原始生殖细胞进行标记分离的方法。本研究克隆并测序鸡原始生殖细胞特异表达基因CVH1.6Kb启动子序列。序列分析表明它含有类似于TATA box和CAAT box的元件,在其远端上游区域还有多个GC富含区。将CVH基因启动子亚克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-1的多克隆位点,成功构建表达载体pCVH-EGFP。重组质粒在脂质体LipofectamineTM2000介导下分别转染鸡Ⅹ期胚盘细胞和鸡胚成纤维细胞,并于转染后12 h在荧光显微镜下观察转染效果。实验结果显示：在胚盘细胞转染后12 h可观测到绿色荧光表达,转染后24 h荧光细胞增多,细胞形态均呈圆形、体积较大;在鸡胚成纤维细胞未检测到GFP表达。实验结果说明,由CVH基因启动子控制下的EGFP可在Ⅹ期胚盘细胞特异表达,为利用流式分离技术PGCs标记分离、纯化研究奠定基础。 相似文献
10.
采用酶解去壁低渗法进行大白菜染色体制片,研究了影响其有丝分裂相指数和制片质量的根尖长度、预处理药剂和时间、前低渗和酶解的温度与时间等相关因子,并对大白菜制片质量进行了25SrDNA的FISH检测。结果表明：当大白菜生长旺盛的根尖长为1.5~2.0 cm时中期分裂相指数最高;最佳预处理药剂为0.002 mol/L 8-羟基喹啉,当预处理时间为2 h时能获得较多的分裂相和清晰的染色体形态;0.075 mol/L KCl中25℃前低渗0.5 h,然后采用2%纤维素酶和2%果胶酶混合液4℃消化5~6 h或25℃消化2~2.5 h,染色体分散良好,酶解完全,无细胞质残留,制备的染色体标本可不经预处理直接用于FISH杂交。本研究结果为在大白菜上开展FISH技术的相关研究奠定了基础。 相似文献
11.
摘 要：[目的][方法]利用中性蛋白酶将牦牛血红蛋白水解,探讨各因素对中性蛋白酶水解牦牛血红蛋白的影响以及水解度的关系,并对酶解液进行了活性炭脱色效果的研究。通过单因素和正交试验（L16(45)）,[结果]确定了中性蛋白酶水解血红蛋白的适宜条件为 pH 7.0,温度 45℃,酶底物浓度比 4000 U/g 蛋白质液,底物浓度 5%,酶解时间 7 h。通过正交试验,确定酶解液的最佳脱色工艺条件为活性炭用量 4%,脱色温度 75℃,pH 5.0,脱色时间 60 min。 相似文献
12.
采用稀酸浸泡结合蒸汽爆破预处理方式,对竹子的糖化效果进行了条件筛选。对浸泡酸浓度、浸泡时间、蒸汽爆破压强及、爆破压力维持时间4个因素进行探索,以酶解得到的还原糖含量高低作为衡量指标。结果表明：在单因素实验中,最优条件与其对应的还原糖浓度分别为：浸泡酸浓度2.5%时,还原糖浓度39.4301 g/L;浸泡时间10 h时,还原糖浓度35.2116 g/L;蒸汽爆破压强2 MPa时,还原糖浓度31.7554 g/L;蒸汽爆破压力维持时间150 s时,还原糖浓度30.3634 g/L。通过正交试验优化并验证后,得到最优的预处理条件：常温条件下,将竹子浸泡在2.5%的硫酸中8 h,于压强2 MPa的蒸汽爆破装置中维持180 s后爆破,可以得到最高的还原糖产量42.3707 g/L,且上述单因素影响主次顺序为：浸泡酸浓度＞浸泡时间＞压力维持时间＞爆破压强。 相似文献
13.
从土壤中筛选获得了1株木糖醇高产菌株,该菌株发酵玉米芯水解液后获得的发酵液,通过离心去除菌体,用紫外分光光度法测得木糖醇产量。采用摇瓶发酵对发酵工艺条件进行优化,通过测定发酵液中木糖的残留量、木糖醇的产量、木糖醇的转化率来确定最佳的发酵工艺。结果表明,木糖醇的产量由最初3.12g/L增加到8.79g/L,转化率由15.6%增加到43.95%;优化后,最佳培养基条件为:选用木糖质量浓度为20g/L的玉米芯水解液为碳源,质量浓度为2.5g/L的蛋白胨和2.5g/L的酵母浸膏作为氮源,质量浓度为3.0g/L的KH2PO4,4.0g/L的NaCl,0.5g/L的MgSO4·7H2O,最佳发酵条件为:摇瓶发酵装液量80mL/250mL,转速160r/min,pH值为5.0,发酵温度30℃,发酵时间44h,在此条件下,木糖醇最大产量是13.84g/L,木糖转化率达69.0%。该菌株经初步研究,显示了良好的研究潜力和应用前景。 相似文献
14.
不同浓度赖氨酸对猪IEC碱性氨基酸转运载体mRNA表达的影响 总被引：2，自引：1，他引：2
本研究通过建立猪肠粘膜上皮细胞（Intestinal epithelial cells, IEC）原代培养的方法,研究了赖氨酸对体外培养的猪小肠粘膜上皮细胞碱性氨基酸转运载体mRNA表达的影响。用机械刮取初生仔猪小肠粘膜加胶原酶Ⅱ消化的方法,成功地在体外培养了新生仔猪IEC;分别用浓度为0.5 mM、2 mM、8 mM赖氨酸处理细胞96 h,提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR方法,检测了碱性氨基酸转运载体在不同处理细胞中的表达丰度。结果表明：高浓度的赖氨酸对CAT-1 mRNA的表达有上调作用,差异极显著(P<0.01),并且呈剂量依赖效应;不同浓度的赖氨酸对CAT-2 mRNA的表达影响不大,8 mM和2 mM赖氨酸组CAT-2 mRNA的表达丰度均有低于0.5 mM的趋势,但二者之间差异不显著(P>0.05);不同浓度的赖氨酸对y+LAT1 mRNA表达影响差异不显著(P>0.05);高浓度的赖氨酸可提高4F2hc mRNA的表达;0.5 mM和2 mM赖氨酸组4F2hc mRNA的表达丰度均低于8 mM,且差异显著(P<0.05);0.5 mM和2 mM赖氨酸组之间差异不显著(P>0.05)。 相似文献
15.
为了建立Lm型雌性系蓖麻不同发育时期的标雌/单雌/两性系花序MSAP反应体系,提取不同类型不同发育时期的花序基因组DNA,混合成基因池;用EcoRⅠ和HpaⅡ/MspⅠ的组合,12 h可将DNA酶切完全;16℃条件下,将酶切产物与EcoRⅠ、HpaⅡ/MspⅠ接头过夜连接;连接产物用于预扩增。优化后的预扩增反应体系为10×PCR Buffer 2.5μL、d NTPs(10 mmol/L)2.5μL、Mg2+(25 mmol/L)2.0μL、模板2.0μL、E0扩增引物(10pmol/μL)1.5μL、H0扩增引物(10 pmol/μL)1.5μL、LA Taq(5 U/μL)0.25μL、dd H2O 12.75μL。预扩增产物稀释10倍后用于选择性扩增。优化后的选择性扩增体系为10×PCR Buffer 2.5μL、d NTPs(10 mmol/L)2.0μL、Mg2+(25mmol/L)4.0μL、模板3.0μL、EX扩增引物(10 pmol/μL)1.0μL、H/MX扩增引物(10 pmol/μL)1.0μL、LA Taq(5U/μL)0.30μL、dd H2O 11.2μL。 相似文献
16.
考察发酵培养基组分对纤维杆菌X4-9发酵产葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶的影响。应用DPS软件的二次回归旋转中心组合实验设计方法,对纤维杆菌X4-9的发酵培养基（花生秸杆粉、蔗糖、尿素、(NH4)2SO4、硫酸镁、磷酸二氢钾）进行了优化。结果表明：在试验数值范围内,花生秸杆粉、蔗糖和(NH4)2SO4对酶活均会产生极显著的正效应,而尿素、硫酸镁和磷酸二氢钾的用量则具有明显的负效应;在优化的发酵培养基配方（花生秸杆粉30 g/L、蔗糖20 g/L、尿素2.5 g/L、(NH4)2SO4 10 g/L）下,葡萄糖内切酶、葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶的酶活分别达到2.705163,5.723014和3.614921 I U/mL,比初始发酵培养基配方下的各酶活分别提高了123.66%,146.32%和186.40%。纤维杆菌X4-9均能同时产生葡萄糖内切酶、葡聚糖外切酶、β-葡萄糖苷酶等纤维素降解复合酶系,且这些酶高产的培养基条件较为一致。 相似文献
17.
不同浓度碳源和氮源对灰树花胞外多糖液体发酵产量的影响 总被引：1，自引：1，他引：0
以灰树花(Grifola frondosa)BUAGF-02 菌株为材料,研究葡萄糖和蛋白胨浓度对液体发酵产多糖的影响。研究以可溶性淀粉、葡萄糖、酵母提取物、蛋白胨等基础发酵培养基,碳源试验葡萄糖浓度分别为5、10、15、20、25 g/L,氮源试验蛋白胨浓度为1、1.5、2、2.5、3 g/L,25℃、170 r/min 振荡培养10 天,离心收集发酵液和菌丝体,采用醇沉法收集多糖,菌丝体和多糖烘干后称重。葡萄糖浓度在20 g/L 时,胞外多糖产量最高,达到0.3 g/100 mL;其浓度25 g/L时菌丝体干重最高,为1.82 g/100 mL。蛋白胨浓度3 g/L时,胞外多糖产量最高,为0.2 g/100 mL;其浓度2.5 g/L 菌丝体干重最高,为1.26 g/100 mL。研究为进一步开展灰树花胞外多糖液体发酵与利用提供了参考。 相似文献
18.
为筛选大丽花花粉活力有效的测定方法,了解大丽花不同品种的花粉活力,以大丽花栽培品种为试验材料,采用4种方法检测大丽花花粉活力,在此基础上,采用单因素试验和正交设计试验分别对大丽花花粉的离体萌发培养条件及培养基组分进行优化,得到最优方案后进一步检测、比较不同品种之间的花粉活力。研究结果显示,TTC染色法不能使花粉着色,I2-KI和孢粉染色法不能有效区分有活力和无活力花粉,离体萌发法效果良好,可准确直观地反映大丽花花粉活力状况, 是测定大丽花花粉活力的有效方法。当培养条件为pH 6.0、温度25℃、培养时间2.5 h时,花粉萌发率最高。培养基组分对大丽花花粉萌发的影响程度依次为PEG>蔗糖>硼酸,实际最佳处理组合为A3B4C2,即PEG4000 25 g/L、蔗糖60 g/L、硼酸50 mg/L的处理组合下,大丽花花粉萌发率最高达62.1%。采用上述获得的最优方案检测22个大丽花品种的花粉活力,花粉萌发率为11.75%~78.72%,不同品种的花粉萌发率差异大,其中,‘兰花公主’的花粉萌发率最低,‘波彻儿’最高。大丽花品种的花粉活力多样性丰富,所测定的22个大丽花品种有14个品种正常可育,杂交时可用作父本;8个品种为半不育或低不育,杂交时更适合作母本。 相似文献
19.
固定液和苏木精对动物生殖器官组织染色效果的影响 总被引：1，自引：1，他引：0
为了给不同动物生殖器官的组织学染色提供参考,以屠宰后收集到的小尾寒羊、藏羊及牦牛体内采集卵巢、睾丸、子宫角、附睾体等器官为试材,用石蜡切片技术及苏木精-伊红(H-E)染色方法,观察并比较使用不同固定液及不同的苏木精染色时间下各生殖器官的染色效果。结果显示,使用4%多聚甲醛固定36 h与使用AAF固定48 h的固定效果类似,但使用AAF固定完毕后的染色效果具有明显优势,而使用4%多聚甲醛固定后的染色时间缩短1/2。研究发现,通过不同固定液对各生殖器进行固定及调整苏木精染色时间,4%多聚甲醛和AAF固定液固定效果各不相同,经AAF固定液固定的组织所需固定时间及苏木精染色时间均长于使用4%多聚甲醛固定时间,且经AAF固定液固定后其染色效果具有明显优势。 相似文献
20.
猪附红细胞体对树突状细胞成熟的影响研究 总被引：1，自引：1，他引：0
为了观察树突状细胞(dendritic cell,DC)2.4的表型和功能变化,以反映猪附红细胞体(Mycoplasma suis,M. suis)对DC成熟分化的影响。通过将DC2.4分成5组：空白对照组：不进行任何处理;实验组：M. suis 0.1、1.0、10.0 μL/mL组,分别在培养液中加入相应剂量的纯化M. suis;阳性对照组：加入脂多糖,终浓度1 μg/ml。应用流式细胞术检测DC2.4培养24 h后细胞表面抗原CD80、CD86、MHC-Ⅱ类分子的表达,并采用MTT法检测同基因混合淋巴细胞反应观察DC2.4对T细胞的抗原提呈能力。流式结果表明：M. suis刺激DC2.4后抑制表面分子CD80、CD86、MHC-Ⅱ的表达,表达量均低于阳性对照组(P<0.01),且对DC2.4的抑制作用呈现剂量依赖。混合淋巴反应中M.suis显著抑制DC2.4对T细胞的激活能力,且阳性对照组与空白组之间差异有显著性意义(P<0.01)。本研究证明了M. suis可以抑制DC2.4的分化与成熟,M. suis刺激的DC2.4在免疫反应中发挥负性调节作用,为M. suis的免疫研究提供科研数据。 相似文献